Vasküler Tutulumla İlişkili Hyaluronik Bağlayıcı Protein 2 İfadesinin Belirlenmesi İçin Derinlemesine Plazma Proteomik Kullanılarak Organ Çözülmüş Behçet Hastalığının Proteomik Görünüm Haritalaması

Amaç.

Bu çalışma, Behçet hastalığının (BH) farklı organları kapsayan patogenezini ve heterojenliğini, Behçet hastalarının klinik değerlendirmesi ve tedavisi için biyobelirteçleri belirlemek amacıyla derinlemesine proteomik kullanarak aydınlatmak amacıyla yapıldı.

Yöntemler.

Veriden bağımsız bir kütle spektrometresi ve antikor mikro dizisine sahip derinlemesine proteomik platformumuzu kullanarak 98 BH hastasından ve 31 sağlıklı kontrolden alınan plazma numunelerindeki proteinlerin ekspresyon seviyelerini ölçtük. Behçet grubunda değişen biyolojik süreçlerin ve sinyal yollarının biyoinformatik analizlerini gerçekleştirdik ve organla çözülen Behçet hastalığı patogenezinin proteomik manzarasını oluşturduk. Daha sonra, enzim bağlantılı bir immünosorbent tahlili kullanarak 108 Behçet hastası ve 29 sağlıklı kontrolden oluşan bağımsız bir kohortta hastalık şiddetinin biyobelirteçlerini ve vasküler alt grubu doğruladık.

cistanche tubulosa-bağışıklık sistemini iyileştirir

Sonuçlar.

BD grubunda, BD hastaları (%88,6) ile sağlıklı kontroller (%95,5) arasında ayrım yapan 220 farklı şekilde eksprese edilmiş protein vardı. Biyoinformatik analizler, kompleman aktivasyonu, yara iyileşmesi, anjiyogenez ve lökosit aracılı bağışıklık dahil olmak üzere BD patogenezleriyle ilişkili farklı biyolojik süreçleri ortaya çıkardı. Ayrıca organ çözümlü BD'nin yapılandırılmış proteomik manzarası, BD'nin farklı organlarla ilişkili proteomik özelliklerini ve tedavinin geliştirilmesi için kullanılabilecek protein hedeflerini tanımladı. Hyaluronik bağlayıcı protein 2, tenascin ve serpin A3, vasküler BD'nin ve tedavi hedeflerinin klinik değerlendirmesi için potansiyel biyobelirteçler olarak doğrulandı.

Çözüm.

Sonuçlarımız, proteomik özellikler ve klinik değerlendirme için potansiyel biyobelirteçler ve vasküler BH için potansiyel tedaviler açısından organda çözülmüş BH'nin patogenezi hakkında değerli bilgiler sağlar.

GİRİİŞ

Behçet hastalığı (BH), İpek Yolu olarak bilinen antik ticaret yolu üzerindeki popülasyonda oldukça yaygın görülen, multisistemik, kronik bir vaskülittir. 2016 yılında yapılan bir çalışmada, Türkiye'de ergen/erişkin popülasyonda BB görülme sıklığının 100'de 602000 olduğu bulunmuştur (1). Behçet hastalığı oldukça heterojendir ve hastalarda oral ülserler, genital ülserler, üveit ve deri lezyonları gibi çoklu organ tutulumu görülür; BH, vasküler anevrizma yırtılması veya ciddi nörolojik komplikasyonların bir sonucu olarak ölümcül olabilir. Farklı organlarla ilişkili BH'nin moleküler özellikleri bilinmemektedir. Klinik tanı yöntemleri ve sonraki tedavi seçenekleri esas olarak klinik semptomlara bağlıdır. Ancak BH'nin farklı organ tutulumuna göre ayırt edilmesini sağlayacak biyobelirteçler mevcut değildir. Genomik ile karşılaştırıldığında proteomik, BH patogenezi hakkında bol miktarda bilgi edinme ve BH tanısı ve tedavisi için biyobelirteçler bulma konusunda alternatif bir yaklaşım sunar. Lee ve arkadaşları, matris destekli lazer desorpsiyon/iyonizasyon tandem uçuş süresi kütle spektrometrisi ile birleştirilmiş 2-boyutsal elektroforezi kullanarak 22 diferansiyel olarak eksprese edilmiş protein keşfettiler (2). Bağırsak BD'sindeki üç benzersiz protein (fibrin, apolipoprotein A-IV ve serum amiloid A), enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) kullanılarak bağımsız bir kohortta daha da doğrulandı. Lopalco ve arkadaşları, 25 inflamatuar sitokin içeren Bio-Rad sitokin boncuk dizilerini kullanarak, gp130/salgılanan interlökin-6 (IL-6) reseptörünün, salgılanan IL-6 reseptörünün, IL{{19}'nin salgılandığını buldu. } ve timik stromal lenfopoietin serum seviyeleri, sadece mukokutanöz tutulumun olduğu alt grupla karşılaştırıldığında, mukokutanöz belirtiler ve oküler tutulumun olduğu BH alt grubunda anlamlı derecede arttı (3). Ancak bu çalışmalardan elde edilen bilgiler protein ve hasta gruplarının küçük olması ve tanımlanan biyobelirteçlerin yeterince doğrulanmamış olması nedeniyle sınırlıydı. Bu çalışma için, bilgimize göre, özelleştirilebilir antikor mikrodizilerine (4) sahip veriden bağımsız edinim kütle spektrometresi (DIA-MS) ile entegre edilmiş derinlemesine proteomik platformumuzu kullanarak BD'nin ilk kapsamlı plazma proteom profilini çıkardık. Proteomik verilerle bipolar bozukluk hastaları ile sağlıklı kontrol grubu arasında farklı eksprese edilen proteinleri ve bu proteinlerin bipolar bozukluk patogenezindeki biyolojik süreçlerini ve yolaklarını analiz ettik. Ayrıca organ çözümlemeli bir BD ortamı oluşturduk ve her organın proteomik özelliklerini belirledik. Vasküler Behçet hastalığı ve hastalık şiddetinin biyobelirteçleri bağımsız bir kohortta doğrulandı.

HASTALAR VE YÖNTEMLER

Bu çalışma Pekin Birliği Tıp Fakültesi Hastanesi Tıbbi Etik Kurulu (JS-2049) tarafından onaylandı. Bu makale herhangi bir BD hastası veya sağlıklı kontrol katılımcısına ilişkin tanımlanabilir veri içermemektedir. Keşif kohortu 98 BD hastasını ve 31 sağlıklı kontrolü içeriyordu. Plazma proteomu, DIA-MS ve antikor mikrodizisi kullanılarak derinlemesine ölçüldü. Biyoenformatik analizler, bipolar bozukluk grubundaki değişen biyolojik mekanizmaları tanımlamak ve organla çözülmüş bipolar bozukluğun proteomik manzarasını oluşturmak için kullanıldı. Aday plazma biyobelirteçleri, sağlıklı kontroller ve bipolar bozukluk ve Takayasu arteriti olan hastalardan oluşan bağımsız kohortlarda ELISA kullanılarak doğrulandı. Keşif ve doğrulama gruplarının klinik özellikleri ve tedavi bilgileri Ek Tablolarda 1-6 gösterilmektedir ve ayrıntılı deneysel prosedürler, https://onlinelibrary.wiley adresindeki Artrit ve Romatoloji web sitesinde bulunan Ek Malzemeler'de açıklanmaktadır. com/doi/10.1002/art.42348.

SONUÇLAR

Hasta özellikleri. Behçet hastalığı olan hastaların klinik özellikleri ve kan alma sırasında glukokortikoid (GC'ler) ve bağışıklık baskılayıcı ilaç kullanımları, https://onlinelibrary.wiley.com/doi adresindeki Artrit ve Romatoloji web sitesinde bulunan Ek Tablo 1'de gösterilmektedir. / 10.1002/md.42348. Proteomik analizimizde, BD'li 98 hasta ile 31 sağlıklı kontrol (keşif grubu) arasında cinsiyet ve yaş açısından anlamlı bir fark gözlenmedi (Ek Tablo 1). BH grubunda sırasıyla 45, 38 ve 15 hastada hafif, orta ve şiddetli BH vardı. Behçet hastalarının tamamında oral ülser mevcuttu ve >%20'sinde genital ülser (%80,6), cilt lezyonları (%65,3), göz lezyonları (%23,5) ve damar tutulumu (%22,4) vardı. Keşif kohortunda BD hastalarının vasküler tutulumu Ek Tablo 2'de gösterilmektedir ve aday biyobelirteçlerin ifadesini doğrulamak için uygulanan doğrulama kohortlarının özellikleri Ek Tablo 3-5'te gösterilmektedir (Artrit ve Romatoloji web sitesinde mevcuttur) enhttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

cistanche tubulosa-bağışıklık sistemini iyileştirir

Cistanche Enhance Immunity ürünlerini görüntülemek için buraya tıklayın

【Daha fazlasını isteyin】 E-posta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Behçet hastalarında DIA-MS ve antikor mikrodizisi kullanılarak plazma proteomunun derinlemesine profilinin çıkarılması. Protein profili oluşturma çalışmasının şematik bir çizimi, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde bulunan Şekil 1A ve Ek Şekil 1'de gösterilmektedir. 10.1{{11} }02/art.42348. BD hastalarından ve sağlıklı kontrollerden alınan tüm plazma numuneleri, DIA-MS ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip antikor mikrodizisinden oluşan derinlemesine plazma proteomik platformumuz kullanılarak ölçüldü. Spearman'ın antikor mikrodizisi kullanılarak plazma proteini tespitine ilişkin korelasyon katsayıları, farklı diziler içinde ve arasında sırasıyla 0.98 ve 0.93 idi (Ek Şekiller 2A ve 2B, https adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur) ://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Spearman'ın DIA-MS kullanılarak plazma proteini tespitine ilişkin korelasyon katsayısı 0,92 idi (aralık 0,87-0,96; Ek Şekil 2C). BD hastaları ve sağlıklı kontroller için antikor mikrodizisiyle taranan temsili görüntüler, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresinde bulunan Ek Şekil 3'te gösterilmektedir. Sonuçlar genel olarak Behçet hastalarının plazma proteinlerinin, sağlıklı kontrollerin plazma proteinleriyle karşılaştırıldığında yukarı regüle edildiğini gösterdi. Derinlemesine plazma proteomik platformumuzla 759 protein tanımladık (Ek Şekiller 1, 4 ve 5, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur), plazmada yaklaşık 10 büyüklükte dağıtılmıştır (Şekil 1B). Bu proteinler, 410 protein biyobelirteci (İnsan Hastalıkları Plazma Protein Biyobelirteç Veritabanı, http://biokb.ncpsb.org.cn/hdpp/#/ adresinde çevrimiçi) ve şu anda onaylanmış veya devam eden klinik çalışmalarda araştırma aşamasında olan 388 terapötik hedefi içeriyordu (Terapötik) Hedef Veritabanı, çevrimiçi olarak http://db.idrblab.net/ttd/ adresindedir) (Şekil 1B). Bu biyobelirteçlerin ve terapötik hedeflerin fonksiyonel açıklamaları, bu proteinlerin BD, lupus nefriti, ankilozan spondilit ve vaskülit dahil olmak üzere çeşitli otoimmün ve otoinflamatuar hastalıklara ait olduğunu göstermektedir (Şekil 1C ve 1D ve Ek Tablo 7 ve 8, Artrit ve Romatoloji'de mevcuttur). https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348 adresindeki web sitesi). Bu sonuçlar, platformumuzla tespit edilen plazma proteinlerinin BD'nin oluşumu ve gelişimi ile yakından ilişkili olduğunu göstermektedir.

Şekil 1. Veriden bağımsız edinim kütle spektrometresi (DIA-MS) ve antikor mikrodizi analizi ile derinlemesine bir proteomik platformu kullanılarak Behçet hastalığı (BD) olan hastalardan alınan plazma numunelerinin proteom profili. BD ile ilgili proteomik çalışmamızın İş Akışı. B, DIA-MS ve antikor mikrodizisi ile tespit edilen plazma protein konsantrasyonlarının, insan plazma proteom veri tabanındaki (http://www.plasmaproteomedatabase.org/) referans konsantrasyonlarına göre dağılımı. C, Bir insan hastalığı plazma proteini (HDPP) biyobelirteç veritabanı (http://biokb.ncpsb.org.cn/hdpp/#/) kullanılarak tanımlanan, tespit edilen protein biyobelirteçleriyle ilişkili hastalıklar. D, Bir terapötik hedef veritabanı (TTD) (http://db.idrblab.net/ttd/) kullanılarak tanımlanan, tespit edilen terapötik hedef proteinlerle ilişkili hastalıklar. C ve D'deki daire boyutları, her hastalıkta zenginleşen protein sayısına karşılık gelir. HC=sağlıklı kontrol; FASP=filtre destekli numune hazırlama; QE-HF=Exaktif HF Hibrit Dört Kutuplu Orbitrap (ThermoFisher) kütle spektrometresi; Strep-PE=streptavidin-fikoeritrin; ELISA=enzime bağlı immünosorbent tahlili; IgA=immünoglobulin A.

BD ile ilişkili diferansiyel olarak eksprese edilen plazma proteinlerinin proteom çapında analizi. https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresinde bulunan Ek Şekil 1, DIA-MS ve antikor mikrodizi sonuçlarından diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerin nasıl tanımlandığını ve entegre edildiğini gösteren akış şemasını gösterir. DIA-MS tarafından toplam 493 protein hedeflendi, bunlardan 379'u proteinle tutuldu.<29 missing values in the BD group and < 7 missing values in the healthy control group. After 36 proteins with potential contaminations from blood cells (5) were removed, we analyzed 343 additional proteins for hypothesis testing, of which 166 proteins showed a statistically significant difference between the BD and healthy control groups. The antibody microarray detected 549 proteins. After 5 control proteins were removed, we retained 544 proteins for further analysis; of these, 74 proteins showed statistically significant differences between the BD group and the healthy control group (Supplementary Figure 1). In total, 220 (29.0%) of 759 proteins were significantly differently expressed between the BD group and the healthy control group (P < 0.05), as shown using our in-depth proteomics platform comprising DIA-MS and the antibody microarray (Figure 2A and Supplementary Figures 1 and 5, available at https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). The number of differentially expressed proteins is 10-fold more than previously reported (2,3,6). Among these proteins, 5 were identified as potential plasma or serum biomarkers in proteomics research for patients with BD, including haptoglobin, apoprotein, transthyretin, immunoglobulin light chain, and immunoglobulin heavy chain. Furthermore, growth arrest–specific 6, resistin, von Willebrand factor (VWF), and others were also identified to be increased in the BD group (Figure 2B). We identified 215 new proteins associated with BD, including serpin A3 (SERPINA3), glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D1 (GPLD1), and attractin (ATRN) (Figure 2C).

cistanche tubulosa-bağışıklık sistemini iyileştirir

BD hastalarının sağlıklı kontrollerden ayırt edilip edilemeyeceğini belirlemek için, diferansiyel olarak eksprese edilen 220 proteinin (P < 0.05) tarafsız bir hiyerarşik kümeleme analizini gerçekleştirdik; burada { Behçet hastalığı olan hastaların %{3}},0'ı ve sağlıklı kontrollerin 86%,4'ü kümelenmiştir (Ek Şekil 6, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur) 10.1002/md.42348). Diferansiyel olarak eksprese edilen 130 protein arasında (P < 0,01), BD'li hastaların %88,6'sının ve sağlıklı kontrollerin %95,5'inin kümelendiğini bulduk (Şekil 2D). Daha ileri kısmi en küçük kareler diskriminant analizi, BD grubundaki hastaların diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerin sınıflandırmasına göre sağlıklı kontrollerden açıkça ayırt edilebildiğini ortaya çıkardı (Ek Şekil 7, https://onlinelibrary.wiley adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur). com/doi/10.1002/art.42348). DisGeNET platformunu (7) kullanarak hastalıkların zenginleştirilmesi ayrıca, diferansiyel olarak eksprese edilen bu proteinlerin, BD ve vaskülit de dahil olmak üzere inflamasyon ve otoimmün ve vasküler hastalıklarla önemli ölçüde ilişkili olduğunu göstermiştir (Şekil 2E ve Ek Tablo 9, https adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur). ://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Cytoscape ve CluGo kullanarak yaptığımız biyoinformatik analizde bipolar bozuklukta aşağıdaki 8 ana biyolojik süreç tanımlandı: 1) kompleman aktivasyonu, 2) plazma lipoprotein partikül seviyelerinin düzenlenmesi, 3) yara iyileşmesi, 4) anjiyogenez, 5) lökosit aracılı bağışıklık, 6 ) peptidaz aktivitesi, 7) hücre aktivasyonunun pozitif regülasyonu ve 8) lökosit göçü (Şekil 2F ve Ek Tablo 10, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur) ). Bu biyolojik süreçler, bipolar bozukluk gelişimi sırasındaki patolojik inflamasyon ve pıhtılaşma mekanizmasıyla birleşir; burada lipit profilleri ve inflamasyon sırasında oksidatif stresle yapılan modifikasyon, endotel disfonksiyonuna ve vasküler olaylara yol açar (8-11).

Tutarlı bir şekilde, KEGG veri tabanındaki (http://www.genome.ad.jp/kegg adresinde mevcut) en önemli yol, tamamlayıcı ve pıhtılaşma basamaklarıydı (Şekil 3A), burada 38 protein (P < 0.05) 19 tamamlayıcı (C) bileşeni (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, C4B, C4b bağlayıcı protein alfa zinciri [C4BPA], C5, C6, C7, C8 alfa zinciri, C8 beta zinciri, C8 gama) dahil olmak üzere tanımlandı. zincir [C8G], C9, kompleman faktörü [CF] B, CFH, CFH ile ilişkili protein 4 [CFHR4], CFI ve bileşen reseptör 1 benzeri protein), 5 pıhtılaşma faktörü (F11, F12, F13B, F5 ve F9) ), 4 pıhtılaşma ile ilgili protein (doku tipi plazminojen aktivatörü [PLAT], protein C, antikoagülan protein S [PROS1] ve VWF) ve 5 serpin ailesi proteini (SERPINA1, SERPINC1, SERPIND1, SERPINF2 ve SERPING1). Kaskadın yirmi beş proteini, terapötik tedavi için uyuşturulabilir hedeflerdi (Şekil 3B). İlginç bir şekilde, KEGG yolunda ve tamamlayıcı ve pıhtılaşma basamaklarında yer alan proteinlerin çoğu, kan pıhtılaşması/yara iyileşmesinin en zengin biyolojik süreçlerinde yer alan proteinlerle örtüşüyordu (Şekil 3B ve Ek Tablo 10, https://onlinelibrary.wiley.com/ adresinde mevcuttur). doi/10.1002/art.42348.). Çalışmada KEGG yolu analizi kullanılarak Staphylococcus aureus enfeksiyonu, prion hastalığı, boğmaca, insan papilloma virüsü enfeksiyonu, herpes simpleks virüsü 1 enfeksiyonu ve sitokin ve sitokin reseptörü ile viral protein etkileşimleri dahil olmak üzere birçok patojenik enfeksiyon yolu tanımlandı ve bu durum patojenik enfeksiyonun rolünü vurguladı. BD'de (Ek Şekil 8A, Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur:https://çevrimiçi kütüphane.

Şekil 2. Proteinler, BD hastası ile DIA-MS ve antikor mikrodizisi tarafından tanımlanan sağlıklı kontrol grupları arasında farklı şekilde ifade edildi. BD hastasında sağlıklı kontrol gruplarına karşı düzensiz proteinleri gösteren bir Volkan grafiği. Önemli ölçüde yukarı regüle edilmiş ve aşağı regüle edilmiş proteinler (P < 0.05) sırasıyla kırmızı ve mavi noktalarla gösterilmiştir. B, BD hastalarının ve sağlıklı kontrollerin plazmasındaki temsili proteinlerin ekspresyon yoğunluğunu gösteren dağılım grafikleri. Semboller bireysel örnekleri temsil eder; yatay çizgiler medyanı gösterir. C, Çalışmamızda tanımlanan Behçet hastalarında diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerin sayısını önceki çalışmalarda tanımlananlarla karşılaştıran Venn diyagramı. D, BD ve sağlıklı kontrol grupları arasında diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerin (P < 0.01) hiyerarşik kümeleme analizi; burada BD hastalarının %88,6'sı ve HC'lerin %95,5'i kümelenmiştir. Kesikli dikdörtgen alan, karşılık gelen yüksek oranda eksprese edilen proteinlerle birlikte her grubu gösterir. E, Sağlıklı kontrollere göre Behçet hastalarında düzensiz proteinlerle ilişkili hastalıkların zenginleşmesi (DisGeNET platformundan türetilmiştir) (log10 [q değeri] < −15). F, Behçet hastalarında sağlık kontrollerine göre diferansiyel olarak eksprese edilen proteinler kullanılarak tanımlanan önemli ölçüde zenginleştirilmiş biyolojik süreçler (P < 0.05). *=P < 0,05; **=P < 0,01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. GAS6=büyüme durmasına özgü 6; RETN=resistin; VWF=von Willebrand faktörü; SERPINA3=serpin A3 (1-antikimotripsin); GPLD1=glikosilfosfatidilinositol'e özgü fosfolipaz D1; ATRN=çekiciliği (diğer tanımlar için Şekil 1'e bakınız).

Şekil 3. Behçet hastalığının patogeneziyle ilişkili sinyal yolları. A, KEGG ve Reactome veritabanlarının kullanıldığı tanımlanan sağlıklı kontrollere göre BD hastalarında diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerle ilişkili önemli ölçüde zenginleştirilmiş sinyal yolları (P < 0.01). Kırmızı yazı tipi, kan pıhtılaşması ve kompleman aktivasyonuyla ilgili yolları gösterir. B, KEGG veri tabanı kullanılarak tanımlanan Kompleman ve pıhtılaşma basamakları, sağlıklı kontrollere göre BD hastalarında diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerle en anlamlı ilişkileri gösterir. Bilinen onaylı ilaçlar tarafından hedef alınabilecek imza proteinleri belirtilmiştir. C ve D, Sağlıklı kontrollere göre BD hastalarında önemli ölçüde eksprese edilen proteinlerle tanımlanan önemli ölçüde zenginleştirilmiş protein alanı (C) ve hücresel bileşenler (D). A, C ve D'de çubuk uzunlukları P değerinin log 10 tabanını gösterir ve çubukların yanındaki sayılar her kategoride yer alan proteinlerin sayısını gösterir. IGF=insülin benzeri büyüme faktörü; IGFBP=insülin benzeri büyüme faktörü bağlayıcı protein; C=tamamlayıcısı; ER=endoplazmik retikulum; ECM=hücre dışı matris; CUB =, C1r/C1s, Uegf ve Bmp1'i tamamlar; EGF=epidermal büyüme faktörü; Yukarı=yukarı regüle edildi; Aşağı=aşağı regüle edilmiştir (diğer tanımlar için Şekil 1'e bakınız).

wiley.com/doi/10.1002/art.42348) (12–17). Diferansiyel olarak eksprese edilen 13 proteini (P <0.05) içeren Staphylococcus aureus enfeksiyonunun KEGG yolu önemli ölçüde zenginleştirilmiştir (bazıları Ek Şekil 8B'de işaretlenmiştir), bu da Staphylococcus aureus enfeksiyonunun BH patogenezindeki rolünü ortaya koymaktadır (18,19). Son olarak zenginleştirme analizi, tamamlayıcı kontrol proteinleri, Sushi tekrarı, membran saldırı kompleksi/perforin, tamamlayıcı bileşen C1q alanı ve CUB alanı (komplemanlar C1r/C1s, Uegf ve Bmp1 için) dahil olmak üzere kompleman alanlarını tanımladı. ) (Şekil 3C). Hücresel bileşen zenginleştirme analizi, yukarı regüle edilen proteinlerin, diğerlerinin yanı sıra, kollajen içeren hücre dışı matris, salgı granül lümeni, trombosit alfa granülü ve plazma lipoprotein partikülü açısından zenginleştiğini, ancak aşağı regüle edilen proteinlerin esas olarak hücre dışı alan ve eksozom (Şekil 3D).

Tedavinin plazma proteinleri üzerindeki etkisini araştırmak için Behçet hastalarını GC'ler ve immün baskılayıcılarla tedaviye göre gruplandırdık. Tedavili veya tedavisiz Behçet hastaları sağlıklı kontrollerden açıkça ayırt edilebiliyordu (Ek Şekil 9A, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art adresindeki Artrit ve Romatoloji web sitesinde mevcuttur). 42348). Analiz, GC'ler ve immünosupresanlarla tedavi edilmeyen BD hastalarına karşı tedavi edilen BD hastalarında değişen biyolojik süreçlerin çoğunun immünolojik yanıtların düzenlenmesiyle ilişkili olduğunu gösterdi (Ek Şekil 9B). Ayrıca tedavisiz BH hastaları ile GC ve immünosupresan tedavisi alan BH hastaları arasındaki plazma proteinlerinin diferansiyel ekspresyonunu da karşılaştırdık. Sonuçlar, örneğin plazma lipoprotein partikül seviyelerinin ve temizleme ve serin tipi endopeptidaz aktivitesinin düzenlenmesinde yer alan 68 farklı şekilde eksprese edilmiş proteini (P < 0.05) tanımladı (Ek Şekil 10, https:// adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur). onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

Organ çözümlü BD'nin proteomik manzarası. BD, farklı fenotipik belirtilerle ortaya çıkan, çoklu organ tutulumuna sahip oldukça heterojen bir hastalıktır (Ek Tablo 1, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art adresinde mevcuttur) .42348). Çalışmalar bipolar bozukluğu klinik belirtilere göre alt kategorilere ayırmaya çalışmıştır (20-23). Proteomik verilere dayanarak BD hastaları arasındaki heterojenliği araştırmak için, diferansiyel olarak eksprese edilen 220 protein üzerinde denetimsiz konsensüs kümelemesi gerçekleştirdik (Şekil 4A). Temel bileşenler analizi, alt tip I ve alt tip II'nin alt tip III'ten belirgin bir şekilde ayrıldığını ortaya çıkardı (Şekil 4B). Alt tip I'e özgü proteinler esas olarak kan pıhtılaşmasında ve kompleman aktivasyonunda rol oynar, alt tip II'ye özgü proteinler esas olarak glikoz ve protein-lipit metabolizmasında rol oynar ve alt tip III'e özgü proteinler inflamatuar yanıta katılır (Şekil 4D ve Ek Şekil 11, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresindeki Artrit ve Romatoloji web sitesinde mevcuttur). Proteomik alt tipli BD grupları arasında klinik özellikler açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamasına rağmen, alt tip I ve alt tip II'nin benzer olduğunu bulduk (Şekil 4B), bu da temel bileşenler analizinin sonuçlarıyla tutarlıydı. Alt tip I ve alt tip II'li bipolar bozukluk hastalarında, sinir sistemi tutulumu (alt tip I'de %13,8 ve alt tip II'de %8,2'ye karşı alt tip III'te %0) ve vasküler tutulum (alt tip I'de %27,6 ve alt tip II'de %22,4) dahil olmak üzere ciddi semptomların yüzdeleri daha yüksekti. Alt tip II'de %'ye karşı alt tip III'te %0). Alt tip III'lü Behçet hastalarında nispeten hafif ila orta şiddette semptomlar olmasına rağmen, daha yüksek oranda cilt lezyonları mevcuttu (alt tip III'te %87,5'e karşı alt tip I'de %51,7 ve alt tip II'de %65,3) (Şekil 4E, Ek Tablo) 11, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresindeki Artrit ve Romatoloji web sitesinde mevcuttur). Behçet gelişimi sırasında otoenflamasyon, redoks dengesizliği, metabolomik değişiklikler, dislipidemi ve pıhtılaşma disfonksiyonu dahil olmak üzere birçok biyolojik süreçte değişiklik olduğunu gösteren birikmiş kanıtlar vardır (8,24-27). Dolayısıyla sonuçlarımız, alt tip I ve alt tip II proteomik gruplarına ait Behçet hastalarında Behçet şiddetinin daha yüksek olmasına rağmen, her iki grup için biyolojik mekanizmaların farklı olabileceğini düşündürmektedir.

cistanche bitkisi bağışıklık sistemini güçlendiriyor

{{0}}adımlı küme analizi (23) kullanarak klinik verilere (cinsiyet, yaş, şiddet puanı ve klinik bulgular) dayalı olarak BD kohortunun küme analizini gerçekleştirdik. Şekil 4E'de gösterildiği gibi, Behçet hastaları 2 kümeye (küme 1 ve 2) sınıflandırıldı; burada hastalar oral ülserler, cilt lezyonları, göz lezyonları ve genital ülserler gibi semptomlara göre kategorize edildi. Grup 1'deki Behçet hastalarında, artralji (%40,0) ve gastrointestinal (%8,9), vasküler (%48,9) ve sinir (%22,2) sistem tutulumunu içeren artrit fenotipinin insidansı, Behçet hastalarına kıyasla anlamlı derecede daha yüksekti. küme 2. Daha sonra aynı BD kohortunda klinik ve proteomik sınıflandırmayı karşılaştırdık. Sonuçlar, proteomik alt tip I ve II sınıflandırmalarındaki ve klinik küme 1'deki hastaların, çoklu organ (yani gastrointestinal, vasküler ve sinir sistemi) tutulumu ve daha yüksek hastalık şiddeti gösteren hastalarla benzer klinik özellikleri paylaştığını gösterdi (Şekil 4E). Tersine, proteomik alt tip III sınıflandırmasındaki ve klinik küme 2'deki hastalar benzer klinik özellikler sergilediler; hiçbirinde gastrointestinal, vasküler ve sinir sistemi tutulumu görülmedi. Bu bulgular, proteomik alt tip III'teki hastaların klinik küme 2 ile kümelendiği ve proteomik alt tip I ve II'deki hastaların klinik küme 1 ile kümelendiği tarafsız hiyerarşik kümeleme analizleri (Şekil 4F) ile daha da desteklenebilir. Bu sonuçlar, potansiyel faydayı göstermektedir. BD heterojenliğini ve ciddiyetini göstermede proteomik sınıflandırmanın kullanımı. Behçet hastalarına yönelik tedavi stratejisi büyük ölçüde klinik özelliklere ve ilgili organa bağlıdır. Ancak organ çözümlü BH'nin proteomik özellikleri bilinmemektedir.

Şekil 4. Behçet hastalarının plazma proteomik ve klinik değişkenler kullanılarak sınıflandırılması. A, Her bir proteomik alt tipi ile BD hastalarının birlikte ortaya çıkan oranlarını gösteren konsensüs matrisinin Isı Haritası. B, Behçet hastalarında proteomik alt tip I, II ve III'ün temel bileşen analizi, kümeler arasında dikkate değer farklılıklar göstermektedir. C, Behçet hastalarında 3 proteomik alt tipinde diferansiyel olarak eksprese edilen proteinlerin (P < 0.05, ortalama ekspresyon farkı P > 0,2) hiyerarşik kümeleme analizi. D, 3 alt tiple ilgili spesifik proteinlere göre biyolojik süreçlerin fonksiyonel grupları. E, Behçet hastalarının demografik ve klinik özelliklerinin proteomik alt tiplere ve klinik sınıflandırma kümelerine göre dağılımı. F, Tarafsız hiyerarşik kümeleme analizine dayalı olarak, BD kohortunda her bir klinik özelliğin proteomik alt tiplerine ve klinik sınıflandırma kümelerine göre dağılımı. Tanımlar için Şekil 1'e bakınız.

Şekil 5. Organ çözümlemeli BD'nin plazma proteomik kullanılarak peyzaj haritalaması. A, Organ çözümlemeli BD'nin proteomik manzarası. Sol: Behçet hastalarında fenotipe göre sağlıklı kontrollere göre protein ekspresyonundaki kat değişimini gösteren diyagram. 3 blok, soldan sağa, sağlıklı kontrolleri, karşılık gelen semptomları olmayan (iki) BH hastalarını ve karşılık gelen semptomları olan BH hastalarını temsil eder. Her bloğun renk yoğunluğu, BD ve sağlıklı kontrol grupları arasındaki protein ekspresyonundaki kat değişimiyle orantılıdır. Kırmızı ve mavi sırasıyla yukarı regüle edilmiş ve aşağı regüle edilmiş proteinleri gösterir. Sağda, diferansiyel olarak ifade edilen her bir proteinle ilişkili biyolojik süreç; karelerin gri yoğunluğu, log10-tabanlı P değerini belirtir ve sayı, her kategoride yer alan proteinlerin sayısını belirtir. B, Hyalüronan bağlayıcı protein 2 (HABP2), tenassin C (TNC) ve serpin A3 (1-antikimotripsin) (SERPINA3) ekspresyonu ile Behçet hastalarının şiddet skorları arasındaki korelasyon (Pearson veya Spearman). Gölgeleme %95 GA'yı gösterir. C, Sağlıklı kontrolde ve hafif, orta ve şiddetli BD gruplarında HABP2, TNC ve SERPINA3 ekspresyonunun yoğunluğunu hastalık şiddetine karşı gösteren Keman grafikleri. Semboller bireysel örnekleri temsil eder; noktalı kırmızı yatay çizgi medyanı gösterir; üst ve alt noktalı siyah çizgiler çeyrekler arası aralığı gösterir. *=P < 0.{{20}}5; **=P < 0.01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. Tanımlar için Şekil 1'e bakınız.

Böylece, farklı organ fenotipleri gösteren BD'li farklı hasta gruplarında spesifik olarak ifade edilen 58 protein belirledik (Şekil 5A). DrugBank veritabanındaki (https://go.drugbank.com/ adresinde mevcut) araştırmamız, apolipoprotein A-IV, CFI, seruloplazmin (CP), glutamat dehidrojenaz 1 (GLUD1), hyaluronik bağlayıcı protein 2 olmak üzere 26 proteini ortaya çıkardı. (HABP2), F5, SERPINC1, SERPINA3, transferrin reseptör proteini 1 (TFRC), VWF, SERPINF2, CD44, Fc bölgesi reseptörü III-A, alanin aminotransferaz 1, lökotrien A-4 hidrolaz, proprotein konvertaz subtilisin/keksin tipi 9, anjiyotensinojen, C8G, haptoglobin, peptidil-prolil cis-trans izomeraz A, selenoprotein P, SERPIND1, SERPING1, C4BPA, lenfotoksin alfa, C4B ve intertripsin ağır zincir 4, kliniklerde veya geliştirilmekte olan terapötik ilaçların hedefleridir. (Ek Tablo 12, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348 adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur.). Fenotipler arasında, artralji semptomlarını içeren artrit fenotipi, dolaşımdaki immünoglobulinlerin aracılık ettiği humoral immün tepkinin düzenlenmesi, B hücresi aracılı immünitenin düzenlenmesi ve immünoglobulin aracılı immün yanıtın düzenlenmesi dahil olmak üzere otoimmünite ile ilişkili biyolojik süreçlerle zenginleştirilmiştir. ; gastrointestinal fenotip, kompleman aktivasyonunun ve B hücresi aracılı immünitenin düzenlenmesiyle ilişkilidir; kalple ilgili fenotip, sitokin reseptör aktivitesi, kollajen metabolik sürecinin düzenlenmesi ve hücre dışı matriks parçalanması ile ilişkilidir; epididimit fenotipi akut faz yanıtıyla ilişkilidir; ve cilt lezyonu fenotipi, serin tipi endopeptidaz inhibitör aktivitesi, kan pıhtılaşması, dolaşımdaki immünoglobulinin aracılık ettiği humoral bağışıklık tepkisi ve diğer süreçlerle ilişkilidir (Şekil 5A ve Ek Tablo 13, https://onlinelibrary adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur) .wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348).

Vasküler fenotip, GLUD1, tenascin C (TNC), XC motifli kemokin ligandı 2, fibulin hücre dışı matriks proteini 1 içeren epidermal büyüme faktörü, HABP2, F5, ATRN, SERPINC1, GPLD1, insülin benzeri dahil olmak üzere en fazla sayıda diferansiyel olarak eksprese edilen proteine ​​sahiptir. büyüme faktörü bağlayıcı protein 6, lektin mannoz bağlayıcı 2, SEPRINA3, TFRC, VWF, SERPINF2 ve ribonükleaz A ailesi üyesi 4 (Şekil 5A). Biyoinformatik analiz ayrıca, diferansiyel olarak eksprese edilen bu proteinlerin, diğer fonksiyonların yanı sıra trombosit degranülasyonunda, kan pıhtılaşmasında, translasyon sonrası protein fosforilasyonunda, serin tipi endopeptidaz inhibitör aktivitesinde ve akut inflamatuar yanıtta rol oynadığını ortaya çıkardı. Bu sonuçların tümü, her organ fenotipindeki hedef proteinler için kişiselleştirilmiş ilaçların geliştirilebileceği organ çözümlü BD'nin proteomik manzarasını göstermektedir.

erkekler için cistanche faydaları-bağışıklık sistemini güçlendirir

Identification of plasma proteins related to BD severity. Among the 220 unique differentially expressed proteins (P < 0.05), 28 were positively correlated with the severity of BD (Figures 5B and 5C and Supplementary Figure 12, available on the Arthritis & Rheumatology website at https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Seven proteins displayed a linear correlation with the severity score, namely, TNC, HABP2, SERPINA3, F5, ATRN, C4B, and CFH (Figure 5B and Supplementary Figure 12A). The expression of these 7 proteins was up-regulated in the severe BD group compared with the mild and moderate BD groups and the healthy control group, as indicated in the scatter plot in Figure 5C (see also Supplementary Figure 12A). Next, we selected and validated 7 protein candidates (TNC, HABP2, SERPINA3, ATRN, C4BPA, GPLD1, and C5) in an independent cohort composed of 108 patients with BD and 29 healthy controls by using quantitative ELISA (Supplementary Table 3, available at https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). The reproducibility of the ELISA for the validation of plasma proteins was >0.9 (Ek Şekil 13, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348 adresinde mevcuttur). HABP2, TNC ve SERPINA3'ün yüksek plazma seviyeleri, sağlıklı kontrol grubuyla (Şekil 6A) karşılaştırıldığında BD grubunda doğrulandı ve ayrıca bunların hastalık ciddiyeti ile korelasyonu (Şekil 6B ve 6C) doğrulandı. Ayrıca ELISA kullanılarak değerlendirilen HABP2 ekspresyonunu Behçet hastaları (n=39) ile Takayasu arteritli hastalardan oluşan kontrol grupları (n=8) ve sağlıklı kontroller (n=10) arasında karşılaştırdık. ) (Ek Şekil 14 ve Ek Tablo 5, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur.). Sonuçlar, HABP2 konsantrasyonunun BD grubunda Takayasu arteriti ve sağlıklı kontrol gruplarındaki konsantrasyondan önemli ölçüde daha yüksek olduğunu gösterdi (Ek Şekil 14), bu da HABP2'nin BD tanısı için potansiyel bir biyobelirteç olarak özgüllüğünü gösterir.

Krause'nin şiddet skoruna göre vasküler semptomların maksimum ağırlığı vardır. Bu nedenle hastaları venöz tromboz, arteriyel stenoz, tıkanma, dilatasyon veya anevrizma varlığına göre vasküler BH ve vasküler olmayan BH gruplarına ayırdık (Ek Tablo 4, https://onlinelibrary. wiley.com/doi/1 adresinde mevcuttur). 0.10{{20}}2/art.42348). HABP2, TNC ve SERPINA3'ün ekspresyon seviyelerini vasküler BD, vasküler olmayan BD ve sağlıklı kontrol grupları arasında karşılaştırdık. Sonuçlar, vasküler BD grubunda 3 proteinin önemli ölçüde yukarı regüle edildiğini gösterdi (Şekil 6D). HABP2, TNC ve SERPINA3 için alıcı çalışma karakteristiği eğrisi analizi de yapıldı; burada kesim, hassasiyet ve özgüllük belirlendi (Ek Tablo 14, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/1{{24 adresinde mevcuttur) }}.1002/mad. 42348.). Sonuçlar, HABP2'nin (eğri altındaki alan [AUC] 0,68, duyarlılık 0,69 ve özgüllük 0,69) ve TNC'nin (AUC 0,71, duyarlılık 0,58 ve özgüllük 0,77) vasküler hastalığı vasküler olmayan BH'den ayırt edebildiğini gösterdi. Aktif olmayan ve aktif vasküler Behçet hastalığı olan hastalar arasında 3 biyobelirtecin seviyeleri karşılaştırıldı. Sonuçlar, HABP2, TNC ve SERPINA3'ün ekspresyon seviyelerinin, vasküler BD aktivitesinden bağımsız olarak BD hastalarında tutarlı bir şekilde daha yüksek olduğunu gösterdi (Ek Şekil 15, https://onlinelibrary.wiley.com/doi adresindeki Arthritis & Rheumatology web sitesinde mevcuttur). /10.1002/md.42348).

Şekil 6. Bağımsız kohortta ELISA ile değerlendirilen vasküler BD biyobelirteçlerinin doğrulanması. A, C ve D, Sağlıklı kontrol grubunda tüm BD'lere karşı hyaluronan bağlayıcı protein 2 (HABP2), tenascin C (TNC) ve serpin A3'ün (1-antikimotripsin) (SERPINA3) Plazma konsantrasyonları (Kons) hastaları (A), hafif, orta ve şiddetli hastalık gruplarındaki (C) BH hastalarına karşı ve vasküler olmayan BH (N-VBD) ve vasküler BH (VBD) hastalarına (D) karşı. B, HABP2, TNC ve SERPINA3 konsantrasyonları ile BD şiddet skorları arasındaki korelasyon (Pearson veya Spearman). Gölgeleme %95 GA'yı gösterir. *=P < 0.05; **=P < 0.01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. Tanımlar için Şekil 1'e bakınız.

Plazma proteinleri, Behçet Hastalığı Güncel Aktivite Formu skoru ve klinik veriler arasındaki korelasyon analizi. HABP2, TNC ve SERPINA3, aktif olmayan BD grubunda ve sağlıklı kontrol gruplarına kıyasla yüksek seviyeler gösterdi (P < 0.001) (Ek Şekil 16A, Artrit ve Romatoloji'de mevcuttur) https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresindeki web sitesi). Behçet Hastalığı Güncel Aktivite Formu (BDCAF) skorları yüksek olan gruplarda SERPINA3 seviyesi yükseldi (Ek Şekil 16B). Ayrıca Behçet hastalarında SERPINA3 ve BDCAF puanlarının düzeyleri pozitif korelasyon gösterirken (r=0.39, p=0.0036), HABP2 ve TNC düzeyleri ise BDCAF ile pozitif korelasyon göstermedi. BDCAF puanları. Hasta plazma seviyeleri ile klinik veriler arasındaki korelasyonu daha da analiz ettik (Ek Şekil 17A ve Ek Tablo 15, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348 adresinde mevcuttur). Akor grafiğinde r > 0,3'lük bir korelasyon katsayısı vurgulanmıştır. Temsili dağılım grafikleri Ek Şekiller S17B-G'de gösterilmektedir. Sonuçlar HABP2, TNC ve SERPINA3 düzeylerinin C-reaktif protein düzeyi, nötrofil sayısı, kırmızı kan hücresi dağılım genişliği, nötrofil-lenfosit oranı, trombosit sayısı ve trombosit dağılım genişliği ile pozitif korelasyon gösterdiğini gösterdi. Tüm bu sonuçlar HABP2, TNC ve SERPINA3'ün fonksiyonel olarak inflamasyon, endotel fonksiyonu ve trombosit aktivasyonu ile ilişkili olduğunu ve gelecekte farklı bir klinik kohortta doğrulanması gereken BD'nin ciddiyetini ve aktivitesini gösteren biyobelirteçler olarak hizmet edebileceğini göstermektedir. .

TARTIŞMA

BD, insan doku ve organlarındaki her büyüklükteki arter ve damarlarda inflamasyonun indüklenmesinden sorumlu farklı patojenik mekanizmaları yansıtan, heterojen bir klinik tabloya sahip sistemik bir vaskülittir. Bu çalışmada, bipolar bozukluk hasta grubunda farklı biyolojik süreçlere katılan geniş bir dizi düzensiz protein (n=220) belirledik ve bağışıklık-iltihap etkileşimini, tromboz varlığını ve biyoinformatik analizi kullandık. Behçet hastalığında kompleman sisteminin aracılık ettiği patolojik rol. KEGG analizi ayrıca BD'nin kompleman ve pıhtılaşma basamakları ve bakteriyel enfeksiyon ile ilişkisini ortaya çıkardı. Kompleman sistemi, degranülasyon, kemotaksis, fagositoz, B hücresi reseptör sinyal yolu ve membran saldırı kompleksi tarafından hücre lizizi yoluyla patojenlere karşı savunma yapmak için doğuştan gelen bağışıklık ve inflamasyona aracılık eder; pıhtılaşma kaskadları ise anti-inflamatuar yanıt, vazodilatasyon, Artan endotel geçirgenliği ve trombosit aktivasyonu. Bakır-Gungor ve arkadaşları genom çapında ilişkilendirme verilerini kullanarak kompleman ve pıhtılaşma basamaklarının Türk ve Japon BD hastaları arasında paylaşılan 6 yoldan biri olduğunu gösterdi; bu da genetik arka plandan elde ettiğimiz sonuçları destekliyor ve ayrıca inflamatuar mekanizmayı ve vaskülopatiyi ortaya koyuyor. Behçet patogenezinde trombofili (28). Lökosit aracılı bağışıklık, hücre aktivasyonunun pozitif düzenlenmesi ve lökosit migrasyonu, Behçet hastalığında aktif immün ve inflamasyon yanıtlarını göstermektedir. Nötrofiller, serbest oksijen radikalleri ve nötrofil hücre dışı tuzakları üretmek üzere aktive edilir, bu da vasküler endotelyal hücrelerde inflamatuar hasara, venöz tromboza ve anevrizmalara neden olur. Aktif nötrofiller tarafından üretilen reaktif oksijen türleri, lipid peroksidasyonunun artmasıyla gösterildiği gibi (9,11) lipidlerin ve lipoproteinlerin, özellikle de düşük yoğunluklu lipoproteinlerin oksidasyonuna ve modifikasyonuna neden olabilir; bu da sonuç olarak kardiyovasküler riski artırır (9,10) ve sırayla inflamatuar yanıtı artırır (10). Bu olay, çalışmamızda gözlemlenen plazma lipoprotein partikül seviyelerinin ve protein-lipid kompleksi yeniden yapılanmasının düzenlenmesine ilişkin biyolojik süreçlerle uyumludur. Çalışmamızdan elde edilen kanıtlar, Emmi ve arkadaşlarının lökosit reaktif oksijen türlerinin üretimini ve plazma lipit peroksidasyonunu birbirine bağlayan bulgularıyla tutarlıdır (8).

Proteomik kullanılarak yapılan fikir birliği kümeleme analizi, Behçet hastalarının heterojenliğini ortaya çıkardı. Alt tip I hastalarında, kan pıhtılaşması ve kompleman aktivasyonunun aktif biyolojik süreci ile ilişkili olabilecek daha şiddetli semptomlar vardı. Buna karşılık, alt tip III hastalarında nispeten hafif semptomlar vardı ve bu alt grupta inflamatuar yanıt ana patolojik süreç olabilir. Ayrıca farklı organ tutulumu olan Behçet hastalarının proteomik özelliklerini belirledik. Biyoenformatik analizlerimiz, otoimmünite ve artrit fenotipi ile artralji semptomları arasındaki ilişkinin örneklediği gibi, her organ fenotipinin protein özelliklerinin işlevlerini etkili bir şekilde göstermektedir (29-31). Majör vasküler olaylar, oküler lezyonlar ve nörolojik tutulum, morbidite ve mortalitenin başlıca nedenleridir (16). Behçet hastalığının tedavisi, ilgili organın türüne ve o organ sistemindeki hastalığın ciddiyetine bağlıdır. Ancak bildiğimiz kadarıyla bugüne kadar BH için hedefe yönelik bir tedavi mevcut değildir. Sonuçlarımız, organda çözülen her Behçet hastalığı için tanısal prosedürlerin ve tedavi yöntemlerinin, patojenik mekanizmaların heterojenliği nedeniyle farklılık gösterebileceğini göstermektedir. Gastrointestinal, sinirsel, oküler, eklem ve vasküler lezyonlar dahil olmak üzere bazı önemli proteinler fenotipler için ilaçlanabilir hedefler olabilir.

Farklı ırk ve etnik kökenler arasında vasküler Behçet hastalarının oranı %7,7 ile %43 arasında değişmektedir (32); hastalık neredeyse her zaman yüksek riskli arteriovenöz tromboz ve/veya anevrizma, yüksek hastalık şiddeti ve %38,4'lük kümülatif 5-yıllık nüks oranı ile ilişkilidir (33). Bağışıklık ve inflamatuar faktörlerin, Behçet hastalığının vasküler tutulumuna ve belirtilerine katkıda bulunduğu düşünülmektedir. Endotel hücrelerinde meydana gelen hasarın trombotik risk eğilimine neden olduğu bilinmektedir (34). Ayrıca fibrozis sonrası damar duvarlarının bozulması, arter duvarlarının zayıflamasına ve damar duvarlarının genişlemesine ve ardından anevrizmaların oluşmasına neden olabilir (35,36). Akut inflamasyon sırasında ve fibrozis sonrasında düzensizlikler, daralma ve tıkanıklıklar da meydana gelebilir (37), kronik inflamasyon ise endotelin disfonksiyonel vazodilatör özelliklerini daha da artırır (38). Faktör VII aktive edici proteaz olarak da adlandırılan HABP2, başlangıçta endotel hücre bariyeri düzenlemesinde rol oynayan bir glikozaminoglikan olan hyaluronik asit'e bağlanma yeteneği sayesinde keşfedilmiştir (39) ve kan pıhtılaşması ve fibrinolizde rol almaktadır (40). Önceki çalışmalar, HABP2'nin vasküler düz kas ve endotel hücrelerinde inflamasyonu, apoptozu ve hücre büyümesini aktive edebildiğini (41-43) ve proteazla aktive olan reseptörler (PAR'ler; trombine benzer) yoluyla vasküler bütünlüğün ve geçirgenliğin düzenleyicisi olarak görev yapabileceğini bildirmiştir. )/RhoA/Rho ile ilişkili protein kinaz (ROCK) sinyal yolu (44). HABP2 veya PAR/RhoA/ROCK'nin susturulması (küçük müdahaleci RNA kullanılarak), HABP2- aracılı endotel hücre bariyerinin bozulmasını engeller (44). TNC, trombositleri aktive ederek veya doku plazminojen aktivatörünü aşağı doğru düzenleyerek plak oluşumuna ve yırtılmasına katkıda bulunan proinflamatuar bir hücre dışı matriks glikoproteinidir (45). Serum TNC düzeyleri aterosklerozun ciddiyeti ile ilişkilidir (46) ve geçici TNC ekspresyonunun vasküler hasar sırasında yukarı regüle edildiği ancak onarım tamamlandıktan sonra temizlendiği gösterilmiştir (45).

1-antikimotripsin olarak da bilinen SERPINA3, başta katepsin G olmak üzere birçok serin proteazı inhibe eder (47). Enflamatuar hücrelere ek olarak, daha az kasılabilen düz kas hücreleri, aynı zamanda damar duvarı hasarı bölgesindeki sitokinlerin ve SERPINA3'ün kaynağı da olabilecek makrofaj benzeri bir fenotipe farklılaşabilir (48). Önceki çalışmalar, SERPINA3'ün vasküler düz kas hücrelerinin proliferasyonunu negatif olarak düzenlemede (49) veya nötrofil birikimini inhibe etmede (47) aktif rolünün, olumsuz kardiyovasküler olayların ortaya çıkmasının öngörüsü olabileceğini göstermiştir. Ancak SERPINA3'ün Behçet hastalarında vaskülit patogenezinde rol oynayıp oynamadığı veya patojenik sürecin bir ürünü olup olmadığı belirsizliğini koruyor. Özellikle HABP2 ilacı hyaluronik asit, antiinflamatuar, yara onarımı, doku yenilenmesi ve diğer önemli özellikleri gösteren anyonik, sülfatsız bir glikozaminoglikandır; hyaluronik asit kanser, oftalmoloji, artroloji, pnömoloji, rinoloji ve üroloji tedavisinde ve diğer kullanımlarda araştırılmıştır (50). SERPINA3'ü hedef alan birkaç küçük molekül (çinko asetat, çinko sülfat, çinko, çinko klorür) vardır (Ek Tablo 12, https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 adresinde mevcuttur). Bu sonuçlar, çalışmamızda tanımlanan biyobelirteçlerin aynı zamanda Behçet hastalarına yönelik yeni tedavilerin geliştirilmesinde de hedef olarak hizmet edebileceğini göstermektedir. Çalışmamızın çeşitli sınırlılıkları bulunmaktadır. İlk olarak plazma örneklerinin sayısı sınırlıydı; çalışmamızda tanımlanan biyobelirteçler, kontrol olarak farklı otoinflamatuar ve otoimmün hastalıkların bulunduğu farklı ve daha büyük bir kohortta doğrulanmalıdır. İkinci olarak, sonuçların henüz tedavi görmemiş bipolar bozukluk hastalarından oluşan kohortlarda doğrulanması gerekmektedir. Üçüncüsü, biyobelirteç proteinlerin Behçet hastalığının patogenezindeki biyolojik fonksiyonları, hücre ve hayvan modellerinin kullanıldığı gelecekteki çalışmalarda incelenmelidir.

Birlikte ele alındığında bu çalışma, bildiğimiz kadarıyla, organda çözümlenen BH'nin proteomik özelliklerini kapsamlı bir şekilde analiz eden ilk çalışmadır. Sonuçlar, BD'nin heterojenliği ve patogenezi hakkında temel bilgiler sağlıyor ve vasküler BD'nin gelecekteki klinik değerlendirmesi ve tedavisi için potansiyel biyobelirteçler olarak plazma proteinlerini (HABP2, TNC ve SERPINA3) vurguluyor.

REFERANSLAR

1. Baş Y, Seçkin HY, Kalkan G, et al. Behçet hastalığı ve tekrarlayan aftöz stomatit sıklığının araştırılması: Türkiye'deki en yüksek prevalans. Balkan Med J 2016;33:390–5.

2. Lee HJ, Kim JH, Kim SW ve diğerleri. Bağırsak Behçet hastalığında potansiyel bir belirteç olarak serum amiloidinin proteomik analizi. Dig Dis Sci 2017;62:1953–62.

3. Lopalco G, Lucherini OM, Lopalco A, et al. Mukokutanöz ve oküler Behçet hastalığında sitokin belirtileri. Ön Immunol 2017; 8:200.

4. Xu M, Deng J, Xu K ve diğerleri. Derinlemesine serum proteomikleri, sedef hastalığının ciddiyetinin biyobelirteçlerini ve geleneksel Çin tıbbına yanıtı ortaya koyuyor. Teranostik 2019;9:2475–88.

5. Geyer PE, Voytik E, Treit PV, ve diğerleri. Biyobelirteç çalışmalarında numuneye bağlı önyargıları tespit etmek ve önlemek için plazma proteom profili oluşturma. EMBO Mol Med 2019;11:e10427.

6. Mao L, Dong H, Yang P ve diğerleri. MALDI-TOF/TOF-MS, Behçet hastalığında yüksek serum haptoglobin ve amiloid A'yı ortaya koymaktadır. J Proteome Res 2008;7:4500–7.

7. Piñero J, Ramírez-Anguita JM, Saüch-Pitarch J, ve diğerleri. Hastalık genomiği için DisGeNET bilgi platformu: 2019 güncellemesi. Nükleik Asitler Res 2020;48:D845–55.

8. Emmi G, Bagni G, Lastraioli E, ve diğerleri. Benzersiz bir dolaşımdaki miRNA profili, Behçet sendromunda trombo-enflamasyonu vurgulamaktadır. Ann Rheum Dis 2022;81:386–97.

9. Orem A, Yandi YE, Vanizor B, et al. Behçet hastalarında oksidatif olarak modifiye edilmiş düşük yoğunluklu lipoproteine ​​(LDL) karşı otoantikorların, LDL'nin oksidasyona duyarlılığının, serum lipitlerinin ve lipit hidroperoksit düzeylerinin, total antioksidan durumunun, antioksidan enzim aktivitelerinin ve endotel disfonksiyonunun değerlendirilmesi. Clin Biochem 2002; 35:217–24.

10. Kayataş K, Karatoprak C, Cebeci F, et al. Behçet hastalarında düşük lipid düzeylerinin varlığı ateroskleroza karşı koruyucudur. Eur Rev Med Pharmacol Sci 2013;17:2330–4.

11. Buldanlıoğlu S, Türkmen S, Ayabakan HB, et al. Aktif ve inaktif Behçet hastalarında nitrik oksit, lipid peroksidasyonu ve antioksidan savunma sistemi. Br J Dermatol 2005;153:526–30.

12. Cho SB, Zheng Z, Ahn KJ, ve diğerleri. Behçet hastalığı olan hastalarda Streptococcus sanguinis'in GroEL'ine ve insan heterojen nükleer ribonükleoprotein A2/B1'e karşı serum IgA reaktivitesi. Br J Dermatol 2013;168:977–83.

13. Zheng Z, Sohn S, Ahn KJ, ve diğerleri. Behçet hastalarında herpes simpleks virüsü tip 1 UL48 proteinine karşı serum reaktivitesi ve Behçet hastalığına benzer bir fare modeli. Acta Derm Venereol 2015;95:952–8.

14. Lüle S, Çolpak AI, Balcı-Peynircioğlu B, et al. Behçet hastalığı serumu, varsayılan bir tetikleyici olan bakteriyel HSP-65 ile ortak epitopları paylaşan nörofilament ortamına karşı immünoreaktiftir. J Autoimmun 2017;84: 87–96.

15. Tong B, Liu X, Xiao J, ve diğerleri. Behçet hastalığının immünopatogenezi. Ön Immunol 2019;10:665.

16. Greco A, De Virgilio A, Ralli M, ve diğerleri. Behçet hastalığı: patofizyolojiye, klinik özelliklere ve tedavi seçeneklerine yeni bakış açıları. Autoimmun Rev 2018;17:567–75.

17. Marta M, Santos E, Coutinho E, ve diğerleri. Behçet hastalığı ve nöro-Behçet sendromunda enfeksiyonların rolü. Otoimmün Rev 2015;14: 609–15.

18. Hatemi G, Bahar H, Uysal S, vd. Behçet sendromundaki püstüler deri lezyonları steril değildir. Ann Rheum Dis 2004;63:1450–2.

19. Galeone M, Colucci R, D'Erme AM, ve diğerleri. Behçet hastalığının potansiyel enfeksiyöz etiyolojisi. Patholog Res Int 2012;2012:595380.

20. Karaca M, Hatemi G, Süt N, vd. Behçet sendromunun papülopüstüler lezyon/artrit kümesi de ailelerde kümelenmektedir. Romatoloji (Oxford) 2012;51:1053–60.

21. Taşçılar K, Melikoğlu M, Uğurlu S, vd. Behçet sendromunda damar tutulumu: ilişkilerin ve zaman akışının retrospektif bir analizi. Romatoloji (Oxford) 2014;53:2018–22.

22. Zou J, Luo JF, Shen Y, ve diğerleri. Behçet sendromlu hastaların fenotiplerinin küme analizi: Çin'deki bir sevk merkezinden geniş bir kohort çalışması. Artrit Res Ther 2021;23:45.

23. Soejima Y, Kirino Y, Takeno M, ve diğerleri. Klinik kümelerin oranındaki değişiklikler, Japonya'da Behçet hastalığının fenotipik evrimine katkıda bulunmaktadır. Artrit Res Ther 2021;23:49.

24. Leiba M, Seligsohn U, Sidi Y, ve diğerleri. Behçet hastalığında trombozun önde gelen nedeni trombofilik faktörler değildir. Ann Rheum Dis 2004;63:1445–9.

25. Becatti M, Emmi G, Silvestri E, ve diğerleri. Nötrofil aktivasyonu Behçet hastalığında fibrinojen oksidasyonunu ve trombüs oluşumunu teşvik eder. Dolaşım 2016;133:302–11.

26. Zheng W, Wu X, Goudarzi M, ve diğerleri. Behçet hastalığına bağlı metabolik değişiklikler. Artrit Res Ther 2018;20:214.

27. Xu J, Su G, Huang X, ve diğerleri. Aköz mizahın metabolomik analizi, VogtKoyanagi-Harada ve Behçet hastalığında anormal amino asit ve yağ asidi metabolizmasını tanımlar. Ön Immunol 2021;12: 587393.

28. Bakır-Güngör B, Remmers EF, Meguro A, et al. İki farklı popülasyondan alınan genom çapında ilişkilendirme çalışması verileri kullanılarak Behçet hastalığındaki olası patojenik yolakların belirlenmesi. Eur J Hum Genet 2015;23:678–87.

29. Tong D, Lönnblom E, Yau AC, ve diğerleri. Kollajen tip XI ve tip II'nin ortak bir epitopu, artritli farelerde ve insanlarda patojenik antikorlar tarafından tanınır. Ön Immunol 2018;9:451.

30. Durlik-Popinska K, _ Zarnowiec P, Lechowicz Ł, ve diğerleri. Romatoid artrit hastalarından lizin içeren Proteus mirabilis O3 (S1959) lipopolisakaritine karşı izole edilen antikorlar, kollajen tip I ile reaksiyona girebilir. Int J Mol Sci 2020;21:9635.

31. Jung JH, Han KD, Lee YB ve diğerleri. Behçet hastalığı multipl skleroz ve romatoid artrit ile ilişkilidir: Kore popülasyonuna dayalı bir çalışma. Dermatoloji 2021:1–6.

32. Düzgün N, Ateş¸ A, Aydıntuğ OT, et al. Behçet hastalığında damar tutulumunun özellikleri. Scand J Rheumatol 2006;35:65–8.

33. Taşçılar K, Melikoğlu M, Uğurlu S, vd. Behçet sendromunda damar tutulumu: ilişkilerin ve zaman akışının retrospektif bir analizi. Romatoloji (Oxford) 2014;53:2018–22.

34. Le Joncour A, Martos R, Loyau S, ve diğerleri. Behçet hastalığı olan hastalarda nötrofil hücre dışı tuzaklarının (NET'ler) kritik rolü. Ann Rheum Dis 2019;78:1274–82.

35. Al-Basheer M, Hadadin F. Vasküler-Behçet hastalığının anevrizma oluşum tipi. Kalp Akciğer Çevresi 2007;16:407–9.

36. Chambers JC, Haskard DO, Kooner JS. Behçet sendromlu hastalarda vasküler endotel fonksiyonu ve oksidatif stres mekanizmaları. J Am Coll Cardiol 2001;37:517–20.

37. Demirtürk OS, Tünel HS, Alemdaroğlu U. Behçet hastalığının vasküler belirtileri. İçinde: Gönül M, Kartal S, editörler. Behçet Hastalığı. Londra: IntechOpen; 2017.

38. Aksu K, Dönmez A, Keser G. Enflamasyonun neden olduğu tromboz: mekanizmalar, hastalık ilişkileri ve yönetimi. Curr Pharm Des 2012;18:1478–93.

39. Choi-Miura NH, Tobe T, Sumiya J, ve diğerleri. İnsan plazmasından yeni bir hiyalüronan bağlayıcı proteinin (PHBP) saflaştırılması ve karakterizasyonu: hepatosit büyüme faktörü aktivatörüne benzer şekilde üç EGF'ye, bir kringle'a ve bir serin proteaz alanına sahiptir. J Biochem 1996;119: 1157–65.

40. Kanse SM, Parahuleva M, Muhl L, ve diğerleri. Faktör VII aktive edici proteaz (FSAP): vasküler fonksiyonlar ve aterosklerozdaki rolü. Thromb Haemost 2008;99:286–9.

41. Byskov K, Boettger T, Ruehle PF, ve diğerleri. Faktör VII aktive edici proteaz (FSAP), vasküler düz kas ve endotel hücrelerinde inflamatuar genlerin ekspresyonunu düzenler. Ateroskleroz 2017;265: 133–9.

42. Parahuleva MS, Maj R, Hölschermann H, ve diğerleri. Monosit/makrofaj fonksiyonunun faktör VII aktive edici proteaz (FSAP) ile düzenlenmesi. Ateroskleroz 2013;230:365–72.

43. Kannemeier C, Al-Fakhri N, Preissner KT ve diğerleri. Faktör VII aktive edici proteaz (FSAP), büyüme faktörünün aracılık ettiği hücre proliferasyonunu ve vasküler düz kas hücrelerinin migrasyonunu inhibe eder. FASEB J 2004;18: 728–30.

44. Mambetsariev N, Mirzapoiazova T, Mambetsariev B, ve diğerleri. Hyaluronik asit bağlayıcı protein 2, damar bütünlüğünün yeni bir düzenleyicisidir. Arterioskler Tromb Vasc Biol 2010;30:483–90.

45. Midwood KS, Hussenet T, Langlois B, ve diğerleri. Tenascin-C biyolojisindeki gelişmeler. Cell Mol Life Sci 2011;68:3175–99.

46. ​​Gao W, Li J, Ni H, ve diğerleri. Tenascin C: Koroner aterosklerozun ciddiyetini tahmin etmek için potansiyel bir biyobelirteç. J Ateroskler Tromb 2019;26:31–8.

47. Sanchez-Navarro A, Gonzalez-Soria I, Caldiño-Bohn R, ve diğerleri. Serpinlerin sağlık ve hastalıkta bütünleştirici bir görünümü: SerpinA3'ün katkısı. Am J Physiol Cell Physiol 2021;320:C106–18.

48. Sorokin V, Woo CC. Serpina3'ün vasküler biyolojideki rolü. Uluslararası J Cardiol 2020;304:154–5.

49. Qian LL, Ji JJ, Guo JQ, ve diğerleri. Farelerde ateroskleroza karşı yeni bir trombin inhibitörü olarak serpina3c'nin koruyucu rolü. Clin Sci (Londra) 2021;135:447–63.

50. Fallacara A, Baldini E, Manfredini S, ve diğerleri. Üçüncü binyılda hyaluronik asit. Polimerler (Basel) 2018;10.