Kene Antijeni Keşfi ve Kene Karşıtı Aşı Geliştirmede Son Gelişmeler Bölüm 2

2.4. Malpighian İlişkili Antijen Adayları

Canlı organizmalarda, 50 -nükleotidazlar, çeşitli kene türlerinde yaygın olarak dağılmış bir enzim grubudur. Kenelerin 50 -nükleotidazı ile omurgalılarda bulunan enzimler arasında hatırı sayılır benzerlikler vardır ve bu enzimler tarafından, pürin kurtarma yollarına katılım da dahil olmak üzere bir dizi varsayılan işlev gerçekleştirilir [108]. Keneler arasında, bu enzim grubu bağırsak, tükürük bezleri ve yumurtalıklar gibi birçok farklı dokuda bulunur.

Bununla birlikte, Malpighian tübüllerinde, özellikle Malpighi tübüllerinde ve yumurtalık hücrelerinin yüzeyinde en bol bulunurlar. 50 -Nükleotidazların özellikleri, bunların antikorlar için potansiyel bir hedef olduğunu gösterir [109]. Umut ve ark. 50 -nükleotidazları, konak bağışıklığına olası katılımları açısından araştırdılar ve koyunlara tek başına rekombinant 50 -nükleotidaz enjeksiyonlarının, anti-nükleosidaz antikorlarında önemli bir yukarı regülasyona neden olduğunu buldular; bir aşının geliştirilmesi [104].

Bununla birlikte, aynı araştırmacı grubu, sığırlarda antijen olarak işlevlerini analiz ettiğinde, antikor seviyelerinde herhangi bir artış olmamıştır. Bu nedenle, 50 -nükleotidazlar, aşı geliştirme antijenleri olarak daha fazla araştırılmadı. Bununla birlikte, başka bir grup araştırmacı tarafından yakın zamanda yürütülen bir araştırma, O. erraticus'ta beslenmeden sonra 50 -nükleotidaz/apiraz üretim seviyesinin arttığını bulmuştur [110]. Ayrıca, bir rekombinant apiraz proteini ile konak aşılama yoluyla apiraz fonksiyonunun bloke edilmesinin, O. moubata kenelerinde beslenmeyi güçlü bir şekilde azaltabileceğini öne sürdüler ve 50 -nükleotidazların/apirazların, bir anti-kene gelişimi için potansiyel olarak ümit verici aday antijenler olduğunu gösterdiler. aşı [110,111].

Nükleotidaz, nükleotitlerin hidroliz reaksiyonunu katalize edebilen, nükleotitleri nükleositlere ve inorganik fosfatlara parçalayabilen bir enzimdir. Nükleotidler, DNA ve RNA'nın yapımı, depolanması ve iletimi, enerji transferi ve hücre sinyal iletimi dahil olmak üzere organizmalarda önemli biyolojik işlevlere sahiptir. Bu nedenle, nükleotidazlar canlı organizmalarda önemli bir rol oynar. Bağışıklık, vücudun, bağışıklık hücrelerinin genişlemesi, farklılaşması ve düzenlenmesi dahil olmak üzere çeşitli biyolojik süreçleri içeren, dış ortamdaki patojenlere direnme yeteneğidir. Birkaç çalışma, nükleotidazların bağışıklık sisteminin işlevini ve dolayısıyla bağışıklığı etkileyebileceğini göstermiştir.

Örneğin, bazı nükleotidaz varyantları, otoimmün hastalıkların gelişimi ile ilişkilendirilmiştir. Ek olarak, nükleotidaz, bağışıklık hücrelerinin çoğalmasını ve aktivasyonunu da etkileyebilir ve bağışıklık hücrelerinin işlevini teşvik edebilir. Dolayısıyla nükleotidaz ile bağışıklık arasında kesin bir ilişki vardır. Bu açıdan bağışıklığın geliştirilmesine büyük önem vermeliyiz. Cistanche, bağışıklığı iyileştirmede önemli bir etkiye sahiptir. Et külü, polisakkaritler, iki mantar, Huang Li, vb. gibi çeşitli biyolojik olarak aktif bileşenler içerir. Bu bileşenler bağışıklık sistemini uyarabilir. Sistemdeki çeşitli hücre türleri, bağışıklık aktivitelerini arttırır.

Tıklayın cistanche tubulosa faydaları

2.5. Kene-Çimento İlişkili Antijen Adayları

Kene çimentosu, konakçıya bağlandıktan kısa bir süre sonra kene tükürüğü yoluyla konakçıya salgılanan glikol ve lipoproteinlerin bir karışımıdır ve aşı gelişimi için kene kaynaklı antijenlerin değerli bir kaynağıdır [112]. Kene ağız parçalarının konak derisine [113] yapışmasına ek olarak, kene çimentosunun B. burgdorferi sensu lato (sl) ve kene kaynaklı ensefalit virüsü [114,115] için bir depo işlevi gördüğü gösterilmiştir. Şimdiye kadar, kene istilasını ve kene kaynaklı hastalıkları kontrol etmede etkili olduğu da gösterilen kene çimentosundan çeşitli antijenler tanımlanmış ve karakterize edilmiştir.

Rhipicephalus appendiculatus'un tükürük bezleri tarafından salgılanan 15 kDa'lık bir çimento proteini olan 64P'nin (64TRP'ler) kesik yapıları, orta bağırsak ve tükürük bezlerindeki antijenleri hedefleyerek yetişkin keneler ve nimflerde ölüme neden olarak Rhipicephalus sanguineus ve Ixodes ricinus'a karşı çapraz koruma gösterdi. Kene-naif konakçıların rekombinant 64P ile aşılanması, nimf ve yetişkin kene istilalarının sayısını önemli ölçüde azalttı ve yüzde 48 nimf ve yüzde 70'e varan yetişkin ölüm oranıyla sonuçlandı ve aynı zamanda büyüme ağırlığı ve yumurta kütleleri üzerinde de bazı etkiler [116].

Bu sonuçlardan, bu proteinin geniş spektrumlu bir aşı antijeni olduğu ve I. ricinus [100] dahil olmak üzere farklı kene türlerinin yetişkin ve olgunlaşmamış aşamalarına karşı etkili olduğu anlaşılmaktadır. Bu çimento antijeni, (i) bağlanma ve beslenmeyi bozarak hamster, kobay ve tavşan modellerinde bir aşı olarak ve (ii) "gizli" orta bağırsak antijenleri ile çapraz reaksiyona girerek sonuçta tıkalı kenelerin ölümüne neden olarak ikili bir işlev gerçekleştirdi. [100,117]. Bu antijen, yalnızca kene istilasına yanıt olarak antikor titrelerini artırmakla kalmaz, aynı zamanda farklı kene dokularıyla çapraz reaktiviteye sahiptir; bu nedenle hem "gizli" hem de "açık" antijenlerin faydalarını birleştirir [118].

3. Kene Karşıtı Aşı Türleri

Keneler, insanlar ve çiftlik hayvanları ile beslenen ve hastalık bulaştıran en yaygın eklembacaklı parazitlerdir [19]. Zoonotik hastalıklar, insanları etkileyen tüm bulaşıcı hastalıkların yüzde 60'ından fazlasını oluşturmaktadır ve bu enfeksiyonların yüzde 22,8'inin kene vektörleri tarafından bulaştığı tahmin edilmektedir [131]. Keneler tarafından taşınan ve besi hayvanlarını etkileyen hastalıklar nedeniyle dünya çapında besi hayvanı yetiştiricileri için büyük ekonomik kayıplar da söz konusudur [132,133].

Bu nedenle, sosyoekonomik yükü azaltmak için kenelerin kontrol edilmesi önemlidir. Keneler ticari olarak temin edilebilen akarisitlere karşı direnç geliştirebildiğinden, kenelerin kontrolü zorlu hale gelmiştir [134-136]. İşçiler, gıda ve çevre için akarisitlerin güvenliğine ilişkin endişeler ve akarisit keşfi, geliştirilmesi ve pazarlanması ile ilgili artan maliyetler nedeniyle, yenilikçi, çevreye duyarlı kontrol teknolojilerine ihtiyaç duyulmaktadır. Aşıların akarisitlere göre birçok avantajı vardır çünkü bunlar genellikle toksik değildir, çevreyi kirletmez ve kimyasallara kıyasla daha ucuzdur.

Bununla birlikte, türe özgü olma eğilimindedirler. Farmasötik endüstrisi, konakçıya maksimum koruma sağlayabilen ve birden fazla kene türüne karşı etkili olan bir aşı geliştirmeye yönelik araştırmaları desteklemede çok önemli bir rol oynayabilir [133,137]. Aşı araştırma programları çeşitli ülkelerde devam etmektedir ve bu makalenin geri kalanında yeni aşı teknolojilerindeki ilerlemeye ve halihazırda mevcut olanlara odaklanılacaktır (Şekil 2).

Kimyasal uygulamalarda olduğu gibi, aşı direnci göz ardı edilemez ve mevcut aşılar, yeni antijenleri izole etmek veya etkinliklerini eski haline getirmek için mevcut antijenleri değiştirmek için dizileme ve klonlama prosedürleri kullanılarak değiştirilebilir. Herhangi bir tek antijene veya antijenik determinanta karşı direnç geliştirme riskini azaltmak için tek bir aşı ürününe iki veya daha fazla ilgisiz antijen dahil etmek de mümkündür.

3.1. DNA Bazlı Kene Karşıtı Aşılar

DNA aşısının icadı ve kullanımı güvenlik endişelerini artırdı; özellikle genetik materyalin (DNA) somatik ve hatta üreme hücrelerine kararlı transfeksiyonu olasılığı, bu da değişmiş gen ekspresyonu ve mutasyonlarla sonuçlanabilir. Kas içi tedaviyi takiben 19 aydan fazla bir süre boyunca iskelet kasında ekstrakromozomal bir plazmit kodlayan lusiferaz vektörü tespit edildi (138). Ayrıca, elektroporasyondan sonra kas içi enjeksiyon, genel transfeksiyon oranını büyük ölçüde artırdı. Rastgele bölgelerde vektör DNA'nın kromozomal entegrasyonu, transfeksiyon oranındaki herhangi bir artışla ilişkilidir (139).Bu çalışmalara göre, entegrasyon sıklığı, spontan gen mutasyonlarının sayısının oldukça altındaydı.

Bununla birlikte, Manam ve ark. farklı kemirgenlerin iskelet kaslarına uygulanan plazmit DNA'nın çoğunluğunun enjeksiyon bölgesinde kaldığını buldu. Gonadlarda küçük fraksiyonlar da tespit edildi ancak genoma entegre edilmedi (140). Bir lusiferaz kodlayan raportör vektörün primatlarda tekrarlanan kas içi uygulaması, uzun süreli raportör ekspresyonu ile sonuçlandı, ancak anti-DNA antikorlarını indüklemedi (141,142). Buna rağmen, DNA aşıları ile ilgili yukarıda belirtilen ve ek güvenlik endişelerinin, bunların klinik pratiğe dönüştürülmesinde dikkate alınması gerektiği unutulmamalıdır (143).

Son yirmi yılda, çeşitli araştırmacı grupları kene istilasını kontrol etmek için bir DNA aşısı geliştirmeye odaklandı ve şimdiye kadar konakçıları bağışıklamak için birkaç DNA aşısı tanıtıldı (130,144,145). Geleneksel protein bazlı aşılardan, antijenik proteinleri kodlayan bakteriyel plazmitlere dayanmaları ve transkripsiyonun etkili ökaryotik promotörler tarafından kontrol edilmesiyle ayrılan DNA aşıları, basit tasarım, yüksek stabilite ve güvenli uygulama avantajlarına sahiptir (143). ] DNA aşılamasında, enjekte edilen plazmid DNA moleküllerinin aktif olarak çekirdeğe girdiği ve epizomal DNA olarak yaşam boyu orada kaldığı ve hücre canlı olduğu sürece sürekli olarak koruyucu antijenler ürettiği düşünülmektedir (146). yüksek bir antikor titresi, DNA ile aşılanmış hayvanlarda in vivo antijenlerin sürekli sentezi, işlenmesi ve T hücrelerine sunulmasıyla çözülebilir.

Ayrıca, bir DNA aşısı yalnızca plazmid DNA içerdiğinden ve kontamine edici proteinler içermediğinden, çoklu veya tekrarlanan aşılamaların vektör DNA'ya karşı bir immün reaksiyona yol açmaması makul görünmektedir (147). Eksprese edilen antijen, sırasıyla hücresel ve hümoral immün yanıtları uyaran CD4 plus ve CD8 plus T hücrelerini indükleyebilen MHC sınıf I ve kompleksleri tarafından sunulabilir (148).

Kanıt, De Rose ve diğerlerinin çalışmasından geldi. [144], burada Merinos melezi koyunlar bir DNA aşısı kullanılarak B. micro plus'a karşı aşılandı. Bm86'nin tam uzunlukta bir gen sekansını içeren bir plazmid, tek başına veya sitokinler, granülosit-makrofaj koloni-uyarıcı faktör (GM-CSF) veya interlökin (IL) için küçükbaş hayvan genlerini taşıyan bir plazmit ile birlikte uygulandığında -1beta, sonraki kene istilasına karşı nispeten düşük düzeyde bir koruma sağladı. Ek olarak, Bm86 ve GM-CSF plazmitleri ile birlikte aşılama, kenelerin doğurganlığında istatistiksel olarak anlamlı bir azalma ile sonuçlandı. Bm86 DNA aşısı enjekte edilen tüm gruplarda, Bm86'ye karşı antikor titreleri düşüktü. Ek olarak, bu gruplarda periferik kan lenfositlerinin düşük seviyede antijene özgü uyarılması meydana geldi. Bununla birlikte, DNA aşılaması, adjuvan içinde tek bir rekombinant Bm86 proteini enjeksiyonunun ardından güçlü bir müteakip antikor tepkisi ile sonuçlandı. Bununla birlikte, antikor üretiminin, rekombinant proteinlerle yapılan iki aşılamadan biraz daha az etkili olduğu görüldü.

Ayrıca, diğer birçok araştırmacı, konakçıları kene istilasına karşı aşılamak için DNA bazlı antijenlerin etkinliğini araştırdı. Örneğin, Sayed ve ark. [149], Argas persicus yumurtalarından DNA çıkardı ve bunu tavukları 200-800 µg DNA/kg tavuk vücut ağırlığı dozlarıyla aşılamak için kullandı. DNA ile aşılanmış tavuğa maruz kaldıklarında kenelerin beslenme başarısı yüzde 74,64 (50 µg DNA/kg civciv vücut ağırlığı) ve yüzde 89,39 (100 µg DNA/kg civciv vücut ağırlığı) azaldığı için sonuç destekleyiciydi. Buna ek olarak, yazarlar, DNA ile aşılanmış tavukların serumunun, A. değerlinin bağırsak proteinlerine karşı aktiviteye sahip olduğunu bildirdiler; ancak diğer kene türleri kullanılarak yapılan ileri analizler, serum aktivitesinin türe özgü olduğunu göstermiştir. Aşılanmış tavuk serumunun elektroforetik modeli, tavuğun kenelere karşı bağışıklık savunmasının geliştirilmesinde yer aldığı varsayılan üç yeni protein bandı gösterdi [149]. Daha sonra birçok çalışma antijene özgü DNA aşılamasına odaklandı; bununla birlikte, koruma düzeyleri farklı antijen tiplerine göre değişiklik göstermiştir. Plazmit pBMC2-kodlayan antijen Bm86 enjekte edilen BALB/c farelerinin Boophilus microplus'a karşı direnç gösterdiği gösterilmiştir.

Aşıya bağlı daha yüksek dozda Anti-Bm86 antikor üretimi ve daha yüksek interlökin (IL) seviyeleri (IL-4, IL-5 ve IL-12 (p40)) ve pBMC2 ile aşılanmış farelerin serumundaki interferon-gama (IFN-) seviyeleri. pBMC2 ile bağışıklaştırılan fareler, bromodeoksiüridin ve IFN g salgılanmasının dahil edilmesine göre splenositlerin antijene özgü uyarımını gösterdi. Bu aşının çiftlik hayvanlarında uygulanması, antikor üretimine neden oldu, bu da Bm86 DNA aşılamasının B. micro plus'a karşı güçlü bir bağışıklık tepkisini indüklediğini düşündürüyor [150]. Başka bir çalışma, tavşanlarda H. longicornis'in (pcDNA3.1(+)-Pmy) Paramyosin'ini (Pmy) kodlayan rekombinant plazmidler tarafından ortaya çıkarılan bağışıklık korumasını değerlendirdi. Tavşanlar yüksek düzeyde IgG geliştirdiler, bu da aşılamanın hümoral bir bağışıklık tepkisi oluşturduğunu düşündürüyor. Aşılanmış tavşanlarla beslenen bazı keneler (yüzde 27,31) ölürken, geri kalan kenelerin ortalama kanlanma ağırlığı ve dişi yetişkinlerin yumurtlaması sırasıyla yüzde 36 ve yüzde 39 azaldı.

Bu nedenle, bir Pmy DNA aşısının etkili bir hümoral bağışıklık tepkisini indükleyebildiği, ancak sağlandığı ve tavşanları H. longicornis enfeksiyonuna karşı kısmen koruduğu görülmektedir [151]. İlginç bir şekilde, hem CD4 plus hem de CD8 plus sitotoksik T lenfosit epitoplarını içeren bir çoklu epitoplu DNA aşısı, laboratuvar koşullarında Ehrlichia ruminantium'a karşı koyunlara yüzde 100 koruma sağladı. Ancak, sonuçlar saha koşullarında tekrarlanmadı. Bu çalışmada, pLamp'ın topikal uygulamaya ek olarak intramüsküler yolla MPL ile birlikte uygulanması, bellek T hücre yanıtlarının aktivasyonunu indükleyerek koyunları kenelere karşı yüzde 60'a kadar korumuştur [152].

Salp14 ve lipokalinler gibi diğer birkaç antijen, tek başına veya diğer antijenlerle kombinasyon halinde son zamanlarda DNA aşıları olarak değerlendirilmiştir ve bu da kenelere karşı bir DNA aşısı geliştirme umudunu daha da artırmaktadır [130,153]. Salp14 DNA aşısının, kene tehdidinden sonra kene ısırma bölgesinde eritem oluşturduğu gösterilmiştir [153]. Benzer şekilde, H. longicornis'ten (HlLIP) LIP homologunun rekombinant plazmidi pcDNA3.1-HlLIP'sini içeren bir lipokalinler (LIP) aşısı, bir tavşan konakçıya bağışıklık kazandırmak için uygulandı. Bu uygulama konakçının hümoral bağışıklığını indüklemesine ve ayrıca H. longicornis'in kanlanma ağırlığını, yumurtlama pozisyonunu ve yumurtadan çıkma kabiliyetini etkilemesine rağmen, etkinliğin çok düşük olması, bu antijenin konakçıya kısmi koruma sağladığı için aşılar için uygun olmadığını düşündürür [130 ].

Son olarak, bir DNA aşısı geliştirmenin temel amacı, aşıyı, kene bağışıklığında önemli bir rol oynayan hümoral bağışıklık yanıtı olduğundan, konağın bağışıklık yanıtını Th2 yanıtına doğru polarize edecek şekilde tasarlamak olmalıdır. B. micro plus midgut antijenleri ile aşılanmış sığırlarda, Th2 hücreleri tarafından modüle edilen spesifik IgG1 seviyelerinin koruma ile ilişkili olduğu bulundu. Salgı sinyali dizisinin hedef genin aşağı akışına uygun şekilde yerleştirilmesi durumunda, hedef antijenin hücre dışı bölmeye salgılanması ve daha büyük bir hümoral bağışıklık tepkisini indüklemesi olasılığı vardır. Ayrıca, IL4 ve IL10 gibi diğer immünomodülatör genlerle ko-enfekte olmaları durumunda Th2 hücrelerinin seçiminin tercih edilmesi muhtemeldir.

3.2. mRNA Aşısı

Son yıllarda, kene önleyici bir aşının geliştirilmesinde kullanılabilecek yeni koruyucu antijenlerin keşfedilmesi için birçok girişimde bulunuldu ve sayısız iyileştirme yapıldı. Aşı adayının etkinliğini test etmek için, rekombinant proteinler, diğer proteinler veya adjuvanlarla ilişkili olsun ya da olmasın, model organizmaların kullanımı yoluyla etkinliklerini test etmek için tercih edilen platform olmuştur.

DNA ve mRNA aşı platformlarının kolaylıkla üretilebilmesi nedeniyle, son yıllarda genetik (DNA ve mRNA) aşı platformlarının kullanımında önemli gelişmeler olmuştur [130,145]. Kene tükürük proteinlerinden oluşan bir kokteyli kodlayan bir mRNA aşısı, kobaylarda "kene bağışıklığını" indükledi ve böylece Lyme hastalığına (borreliosis) neden olan ajan olan kene kaynaklı Borrelia burgdorferi'nin bulaşmasını önemli ölçüde azalttı. Pek çok kene antijeni adayının bir konakçıda bağışıklık tepkilerini ortaya çıkardığı gösterilmiş olsa da, aşılama kullanarak sağlam kene bağışıklığını kopyalamak henüz mümkün olmamıştır. Bunun nedeni, beslenmenin farklı aşamalarında, kenelerdeki tükürük proteinlerinin bileşiminin dinamik olarak değişebilmesi ve muhtemelen konak iç değişikliklerini yönetmek olabilir. Bu bilgi, bir grup araştırmacının insanlarda Lyme hastalığı için yaygın bir vektör olan kara bacaklı kene I. scapularis'in 19 tükürük proteinini tanımladığı ve rasyonel olarak seçtiği yakın tarihli bir çalışmada sağlanmıştır. Bu proteinleri kodlayan nükleosid modifiyeli mRNA'lar tasarladılar.

mRNA-LNP aşısı 19ISP'yi (19 Ixodes tükürük proteinleri) üretmek için bunlar, lipid nanoparçacıklarında (LNP'ler) eşit miktarlarda kapsüllendi. Aşının I. scapularis'in beslenme davranışı üzerindeki etkisini değerlendirmek için kobaylar, 4-haftalık aralıklarla intradermal olarak üç kez aşılandı, bu da kodlanmış antijenlerin en az ona karşı güçlü antikor tepkileriyle sonuçlandı. Deneyin bir sonraki adımında, hayvanlara enfekte olmamış I. scapularis nimfleri verildi. Aşılanan hayvanlarda 24 saat içinde önemli ölçüde eritem gelişti.

Ayrıca, aşılanmış hayvanlardaki keneler yetersiz beslendi ve 48 saat içinde ayrılmaya başladı; aşılanmış hayvanlardaki kenelerin yüzde 80'i, aşılanmamış hayvanlardaki yüzde 20'ye kıyasla 96 saat sonra ayrıldı. Değişen beslenme davranışının patojenlerin bulaşmasını etkileyip etkilemediğini daha fazla incelemek için, B. burgdorferi ile enfekte olmuş I. scapularis nimfleri, ya 19ISP ile ya da ateşböceği lusiferazı kodlayan bir mRNA aşısı ile aşılanmış kobaylara yerleştirildi. Bu hayvanların her biri, enfekte olmuş üç kene aldı. İnsanların eriteme bağlı kaşıntıya neden olan bir keneyi çıkarma olasılığının yüksek olduğu düşünülerek, keneler kızarıklık ortaya çıktığı anda çift-kör bir şekilde ayrıldı.

Kontrol hayvanlarının toplam yüzde 46'sı, tehditten üç hafta sonra B. burgdorferi ile enfekte olurken, aşılanan hayvanların hiçbiri bu patojen ile enfekte olmadı. Bir gen ekspresyonu analizi, aşının, T ve B hücre reseptörleri, kemokin, FcεRI ve IL-17 sinyalinin yanı sıra doğal öldürücü hücre aracılı toksisite dahil olmak üzere çeşitli bağışıklık yollarını aktive ettiğini göstermiştir. Ayrıca, ısırma bölgesi analizleri de aşının T-hücre yanıtlarını indüklediğini göstermiştir [154].

Eşzamanlı olarak, aynı araştırmacı grubu, mRNA lipid nanoparçacıkları (LNP'ler), plazmit DNA veya rekombinant protein platformları kullanarak kene bağışıklığını incelemek için bir model antijen olarak Salp14'ü kullandı [153]. Bu çalışmada, Salp14'ü kodlayan (mRNA-LNP'ler) nükleosid ile modifiye edilmiş mRNA lipid nanoparçacıklarını içeren aşılama, her 4 haftada bir iki takviye ile intradermal olarak verildi. Salp14-spesifik antikorların gelişimi, farklı aşılama stratejileri arasında karşılaştırıldı. Salp14 mRNA aşılaması, DNA ve protein aşılamasına kıyasla en güçlü hümoral yanıtı indükleyen platformdu. salp14 mRNA ile bağışıklı kılınan kobaylar, tüm bağışıklı kılma gruplarında ısırma yerinde gözlemlenen en sağlam ve yoğun eritemi ortaya çıkardı; ancak, kene ayrılma oranını etkilemedi ve tıkanma ağırlıklarını değiştirmedi [153]. Bir kene aşısının etkili olabilmesi için eritemi indüklemesi gerekir ve bağlanma ve tıkanma dahil olmak üzere kene beslemesinin daha sonraki yönlerini değiştirmek için bir yaklaşım, birkaç tükürük kene antijeni içeren bir aşı kullanmaktır [154].

Bu nedenle, potansiyel bir aşı adayı olarak kullanılabilen nükleosid modifiyeli mRNALNP salp14 ile aşılamanın, DNA veya protein ile aşılamaya göre daha yüksek antikor titrelerine ve daha erken ve daha yüksek derecede kızarıklığa yol açabileceği görülmektedir, bu da Salp14'ün olabileceğini düşündürmektedir. ya optimizasyonlarla tek başına ya da diğer aday antijenlerle kombinasyon halinde aşı için iyi bir aday olabilir [154].

Genel olarak, çok değerlikli bir mRNA aşısının, kobaylar gibi laboratuvar hayvanlarında kene direncini ortaya çıkarma ve muhtemelen konakçı üzerinde kene besleme süresini sınırlayarak kene istilasını ve kene kaynaklı enfeksiyonu önleme yeteneğine sahip olabileceği görülmektedir. Yavaş, sürekli antijen iletimini mümkün kılan bir mRNA-LNP formülasyonunun doğal kene ısırıklarını taklit edebileceği de öne sürülmüştür. Bu strateji insanlara tercüme edilebilirse, doğrudan bir patojeni veya mikrobiyal hedefi değil, vektörünü hedef alan ilk aşı olacaktır. Ayrıca, kene kaynaklı hastalıkların bulaşmasını önlemede insanlara yardımcı olmak için kene önleyici aşılar hala geliştirildiğinden, bağışıklama stratejisi ve bağışıklama için antijen seçimi dikkate alınmalıdır.

3.3. Protein Bazlı Aşılar

Bazı protein bazlı aşılar ticari olarak temin edilebilir ve etkilidir. Bir aşı programı ilk olarak 1970'lerde, araştırmacıların konakçıyı o sırada keneye (D. Anderson) karşı aşılamak için iki farklı aşı formülasyonu denemeye başlamasıyla başlatıldı. İlki, bağırsak ve yumurtalıktan elde edilen antijenleri içerirken, ikincisi, yarı tıkanmış D. Anderson dişilerinden çıkarılan tüm iç organları içeriyordu.

Bu çalışma, sığır konakçı yetişkin R. microplus dişilerinden elde edilen özler ile aşılandığında, antikor aracılı bağışıklık tepkilerinin kene bağırsak dokusuna karşı aktive edildiğini keşfetti [155]. Aşı formülasyonunun etkinliğini değerlendirmek için yapılan bu ilk çalışma, dünyanın dört bir yanındaki araştırmacıları kenelerin ve kene kaynaklı hastalıkların kontrolü için bir aşı geliştirmeye odaklanmaya teşvik etti. Böylece, 1980'lerde, iki ayrı araştırmacı grubu, sığırların R. microplus'a karşı bağışıklık tepkisini analiz etmek için aşı formülasyonlarını kullanarak ilk bilimsel araştırmaları gerçekleştirdi [156].

Yukarıdaki çalışmaları takiben, kene bağırsağı ile ilişkili bir glikoproteinin konakçıda immün korumayı indükleyebildiği bulunmuştur [157]. Daha sonraki bir çalışmada, aynı araştırma grubu, Bm86 olarak adlandırılan ve R. microplus'ın [158,159] bağırsak hücreleriyle ilişkili olduğu bildirilen, moleküler ağırlığı 89 kDa olan bir glikoproteini izole etti. Bm86 rekombinant proteini, bir maya ekspresyon sistemi kullanılarak büyük ölçekte üretildi.

Şimdiye kadar yalnızca Bm86-bazlı aşı farklı marka adlarıyla ticarileştirildi, örneğin Avustralya'da TickGARD® markasıyla ve Küba'da Gavac® adıyla satılıyor [160,161]. Bu aşılar, sığırlar üzerindeki kene baskısını azaltmak için büyük ölçüde farklı ülkelerde kullanılmaktadır. Bu aşıların kullanımının kene popülasyonunu yüzde 74'e kadar azaltabileceği ve genel etkinliğinin yüzde 51 ila yüzde 91 arasında değiştiği, kene popülasyonu ve sığırların beslenme durumuna göre değiştiği gösterilmiştir [160-163]. Bazı Kolombiyalı, Meksikalı ve Brezilyalı R. micro plus kene suşlarının, Küba ve Avustralyalı R. micro plus kene suşlarına kıyasla daha düşük genel etkinlik gösterdiğine ve hatta Arjantinli R. micro plus A suşunun bile aşıya dirençli göründüğüne dair kanıtlar vardır. Bm86 [34,164]. Bm86 aşısının dünyanın farklı yerlerinde aynı kene türünün popülasyonları üzerindeki etkinliğindeki varyasyon üzerinde daha fazla analiz yapıldı ve farklı kene popülasyonlarının büyük olasılıkla Bm{'de bir polimorfizme sahip olduğu sonucuna varıldı. {12}} genin amino asit dizisi açısından antijen genleri ve bu, mevcut Bm{13}}bazlı aşıların çok etkili olmamasının ana nedenidir.

Örneğin, Arjantin'deki kene popülasyonlarında tanımlanan Bm86 (Bm95 olarak belirlenmiş) ile homolog olan gende bir polimorfizm vardı ve bu, kene popülasyonları arasında Bm86 sekansında farklılıklara yol açtı. Küba ve Avustralya'da bulundu, bu da Bm86 aşısının Arjantin kenesine karşı neden o kadar etkili olmadığını açıklayabilir [34]. Araştırmacılar, Bm86 aşısının direnç sorunlarını göz önünde bulundurarak, kene istilasını azaltma açısından Küba ve Arjantin'de yüzde 89 ve Hindistan'da yüzde 81 genel etkililik ile oldukça etkili olduğu kanıtlanmış bir rekombinant Bm95 aşısı ürettiler. [34,102,120,165].

Yukarıda bahsedilen ticari aşı ve bunun etkinlik denemesinin yanı sıra, diğer birçok çalışma, Bm86-bazlı aşının etkinliğini daha da artırmaya odaklanmıştır. Bazı yeni araştırmalar, Bm86'den elde edilen ve ayrıca bir rSBm7462® rekombinant peptidi üreten SBm4912, SBm7462® ve SBm19733 dahil peptitleri sentezledi ve etkinliklerini analiz etti. Bu peptitlerin etkililik yüzdesi yüzde 35.87 ila yüzde 81.05 arasında değişmekteydi, bu da bu peptitlerin, özellikle SBm7462® ve rSBm7462®'nin konak bağışıklığının indüklenmesinde çok önemli bir rol oynadığını ve keneyi azaltma açısından oldukça etkili oldukları için ticarileştirilebileceğini düşündürmektedir. istila [121,122]. Ayrıca, yakın zamanda Bm86 rekombinant protein aşısının etkinliğini artırmak için Lapisa SA, Meksika'da Bm86-bazlı bir Bovimune Ixovac® aşısını piyasaya sürdü. Ancak bu aşının kenelere karşı etkinliği araştırılmamıştır; bu nedenle, etkinliğini belirlemek için farklı kene popülasyonları üzerindeki etkilerini belirleyen çalışmalara ihtiyaç vardır.

Bm86 homolog tabanlı bir aşı (TickGard) uygun görünmektedir, çünkü bu aşı geniş bir uygulamaya sahiptir ve Rhipicephalus sanguineus, Hyalomma anatolicum anatolicum, Rhipicephalus (Boophilus) gibi farklı kene türlerinde çapraz reaktif antikorları tetikleyebilir. ) decoloratus, Rhipicephalus (Boophilus) annulatus ve Hyalomma dromedary [166–168]. Ancak bu aşı, diğer bazı kene türlerinde (örn., Rhipicephalus apendiculatus, Amblyomma variegatum ve Amblyomma cajennense) çapraz reaktif koruma sağlayamaz [169,170]. Bm86 aşısının R. annulatus'a karşı yüzde 100 etkinliğe sahip olduğunu ve bunun da R. microplus ile homolog aşının rapor edilen etkinliğinden daha yüksek etkinlikle sonuçlandığını not etmek ilginçtir. Bunun nedeni fizyolojik faktörler (örneğin, vücutta daha az kan birikmesi ve daha düşük proteaz aktivitesi seviyeleri) veya kene genetik faktörleri olabilir. Bu faktörler, BM86 protein seviyelerini etkileyebilir veya beslenme ve protein bozulması gibi fizyolojik süreçleri işaretleyerek daha verimli antikor-antijen etkileşimlerine yol açabilir [171]. Bm86 aşılaması, R. microplus kenelerine karşı mükemmel koruma sağlar, ancak bu deneyimleri bir Ixodes kene aşısına yansıtmak zordur.

I. ricinus ve I. scapularis'in aksine, R. microplus yalnızca sığırlarla beslenen tek konakçı bir kenedir [168]. Ayrıca kısa bir yaşam döngüsüne sahiptir, tüy dökmez ve kan emişi bittiğinde yeni bir konakçı bulur. Bm86 aşısının etkinliği, R. microplus kene larvalarına maruz kalmış ineklerde araştırıldı ve aşılamadan sonra bırakan tıkanmış yetişkin dişiler üzerindeki kene bağışıklığıyla ilgili parametrelerin ölçümleri yapıldı. Böylece ölçülen koruma, iki tüy dökümü dönemi ve üç kene aşaması üzerindeki etkinin toplamıdır. R. microplus için, Bm86 aşılamasının yetişkin dişi kenelerde hasara neden olduğu ve ardından kanlanma ağırlığını azalttığı gösterilmiştir [172]; yine de Bm86 aşılamasının R. microplus'ın olgunlaşmamış yaşam evreleri üzerindeki göreli etkisi kesin olarak bilinmemektedir. Bm86 homologları da Ixodes kenelerinden izole edilmiş ve tanımlanmıştır. I. ricinus, Bm86, Ir86-1 ve Ir-86-2'nin iki homologunu içerir ve I. scapularis'in ayrıca Is86-1 ve Is{{10}'ın iki homologu vardır } [173]. Sonraki bir çalışma, rekombinant Ir86 proteinlerinin aşılanmasının, rekombinant Ir86 proteinlerine karşı serum IgG titrelerini arttırdığını keşfetti; ancak antikorlar, tavşanları I. ricinus tehdidine karşı koruyamadı; ne bağlı kenelerin sayısı ne de kene ağırlıkları azaltılmamıştır [174].

Bu nedenle, Bm86 aşılamasının R. microplus'a karşı net bir etkisi olmasına rağmen, Ixodes'deki Bm86 homologlarına karşı aşılamanın, Ixodes ricinus popülasyonlarını kontrol etmek için etkili bir yaklaşım olarak görülmemektedir. Bm86 aşısı hatırı sayılır bir başarı göstermiş olsa da, aşının akarisitlerle ilişkili "nakavt etkisinden" yoksun olduğu için akarisitlerin yerini alma ihtimalinin düşük olduğunu anlamak çok önemlidir. Buna rağmen saha deneyimi, Bm86 kullanımının tarlada akarisit tedavileri uygulama gerekliliğini önemli ölçüde azalttığını göstermiştir. Örneğin, Küba'nın kene kontrol programına ilişkin sıkı düzenlemesi, ülkede kullanılan akarisit miktarının yüzde 87 oranında azalmasına yol açtı; bu, yakın zamanda Venezuela'da yürütülen bir çalışmanın sonuçlarıyla karşılaştırılabilir [161,175,176].

Ayrıca, Bm86 aşısının kullanılması, Bovine anaplasmosis ve Bovine babesiosis gibi kene kaynaklı hastalıkları da önemli ölçüde azaltmıştır. Bu aşının uygulanması aynı zamanda çiftlik hayvanlarının, örneğin büyükbaş hayvanların üretkenliğini arttırmış ve sonuç olarak çiftçilerin ekonomik kayıplarını azaltmıştır [160]. Bm86 aşılamasının yukarıdaki yönleri, kene istilasıyla mücadelede kimyasal uygulamalara kıyasla oldukça uygun maliyetli bir yöntem olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, bu aşı, kene kaynaklı hastalıkları azaltmanın yanı sıra kene kaynaklı hastalıkları azaltmak için hayvan çiftliklerinde kene salgınlarının yönetimini iyileştirmede oldukça yararlı olabilir.

4. Sonuç Açıklamaları

Keneler gelişme, büyüme ve üreme için kanla beslenirler ve kene kaynaklı çeşitli hastalıkların bulaşmasından sorumludurlar. Örneğin, Ixodes keneleri, bakteriler, protozoalar ve virüsler dahil olmak üzere çok sayıda patojen taşır. Kene önleyici aşıların kene istilasını azalttığını ve patojen bulaşmasını önlediğini ve ayrıca olumsuz yan etkileri olabilecek kimyasal kontrolden daha güvenli olduğunu not etmek önemlidir. Çeşitli dokulardan/organlardan çeşitli yeni antijenler tanımlanmış ve etkinlikleri laboratuvar hayvanlarında incelenmiş, bu da kenelere karşı herhangi bir yan etki bildirilmemiş bir aşı geliştirmeye yönelik önemli ilerlemelere yol açmıştır. Bm86 proteinine dayalı aşılar, çeşitli ülkelerde ticarileştirilmiştir ve bunların R. microplus'a karşı kullanımı, kenelere karşı aşılamanın verimli bir şekilde kullanılabileceğini göstermiştir. Ancak Bm86-bazlı aşılar, Ixodes keneleri gibi diğer kene türlerine karşı eşit derecede etkili değildir. I. ricinus'un Bm86 homologu ile aşılamanın kene beslenmesi üzerinde herhangi bir etkisinin olmadığı gösterilmiştir [174].

Ek olarak, R. micro plus yalnızca bir konukçu üzerinde beslendiği için, ineklere meydan okumak için larvalar kullanıldı ve bu, yalnızca kene sayısını azaltmakla kalmayan, aynı zamanda kenelerin üç yaşam aşaması üzerinde de önemli bir etkiye sahip olan tamamen tıkanmış yetişkin dişi kenelerle sonuçlandı. tik R. microplus'ın aksine, Ixodes keneleri yaşam döngüleri boyunca konakçı değiştirir ve bu nedenle Ixodes kene aşılaması, bir konakta bir kan emişi sırasında kenelerin bağlanmasının ve/veya beslenmesinin etkili bir şekilde önlenmesini gerektirir. Bununla birlikte, Ixodes kenelerine karşı aşılama mümkün ve gerçekçi görünmektedir. Bu nedenle, konağın çapraz korunmasının bu tip aşılarla zorlu bir görev olabileceğini not etmek önemlidir. Bm86'nin yanı sıra immünosupresif veya antikoagülan ajanlar olarak terapötik potansiyele sahip olabilecek başka bazı proteinler de vardır [39,61].

Genomik ve proteomik alanındaki son gelişmeler, yeni antijenleri keşfetmemizi ve tanımlanmış proteinleri manipüle etmek ve yeni aşıları geçmişte olduğundan çok daha hızlı ve uygun maliyetli bir şekilde test etmek için moleküler teknikler kullanmamızı sağladı. DNA aşılaması da mükemmel bir seçenektir; bununla birlikte, genel olarak, bu tip aşılama, yalnızca düşük seviyelerde antijen ekspresyonuna yol açabilir ve profesyonel olmayan antijen sunan hücre aktive edici CD4 artı MHC sınıf II yolu yoluyla T yardımcı hücrelerini sınırlar [177]. Bununla birlikte, DNA aşılaması sadece konakçıya önemli bir koruma sağlamakla kalmaz, aynı zamanda kimerik bir aşı veya rekombinant protein aşılaması tarafından takip edilirse kenelere karşı çapraz koruma sağladığı da düşünülür [178].

Ayrıca, mRNA-LNP'ler, kazanılmış kene direncinin en önemli erken göstergelerinden biri olan kene ısırma bölgesinde eritem ortaya çıkmasına yardımcı olabilir. Kene genlerini içeren mRNA-LNP'ler, seçilmiş kene kaynaklı hastalıkları potansiyel olarak önleyebilen aşıların geliştirilmesi için yararlı bir platformdur [153,154]. Hem DNA hem de mRNA aşılaması da etkili stratejiler gibi görünmektedir ve gelecekte kene istilasının ve kene kaynaklı hastalıkların kontrolü için bir mRNA veya DNA aşılamasının geliştirilebileceği ve ayrıca çapraz koruma sağlayabileceği umudu vardır. Bununla birlikte, şimdiye kadar hiçbir aşının ticarileştirilmesi, bir DNA veya mRNA aşısı geliştirmek için kullanımları için giderek daha fazla antijenin etkinliğini belirlemek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç olduğunu göstermektedir. Yeni kene aşısı adaylarının tanımlanması ve karakterizasyonu, kene beslenmesini ve patojen bulaşmasını önleyebilir. Bırakın insanları, evcilleştirilmiş hayvanlar ve vahşi yaşam için aşılarda bu antijenlerin kullanılması bir sorun olmaya devam ediyor.

Yazar Katkıları:

Makalenin yapısını MNA, MAJ ve MK tasarladı. Tüm yazarlar literatür taramasını gerçekleştirdi ve makalenin bölümlerini yazdı/verileri bir araya getirdi. Rakamları MNA ve IM oluşturdu ve düzenledi. ID ve MK kritik revizyonlar yaptı ve taslağı düzeltti. Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okudu ve kabul etti.

Finansman:

MK, Çek Cumhuriyeti Hibe Kurumundan (grant {{0}}S) ve ERD Fonlarından, proje CePaVip OPVVV'den (no. 384 CZ.02.1.01) fon aldı. /0.0/0.0/16_019/0000759). Finansörlerin çalışmanın tasarımında, veri toplanmasında ve analizinde, yayımlama kararında veya taslağın hazırlanmasında hiçbir rolü yoktu.

Kurumsal İnceleme Kurulu Beyanı: Uygulanamaz.

Hasta Onamı Beyanı: Uygulanamaz.

Veri Kullanılabilirliği Beyanı: Uygulanamaz

Çıkar Çatışmaları: Yazarlar, araştırmanın potansiyel bir çıkar çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişki olmaksızın yürütüldüğünü beyan eder.

Referanslar

1. de la Fuente, J.; Kocan, KM Kene istilasına karşı rekombinant aşılar için koruyucu antijenlerin tanımlanması ve karakterizasyonunda ilerlemeler. Expert Rev. Vaccines 2003, 2, 583–593. [ÇaprazRef]

2. Dokumacı, GV; Anderson, N.; Garrett, K.; Thompson, AT; Yabsley, MJ Keneler ve Evcil Hayvanlarda Kene Kaynaklı Patojenler, Yabani Domuzlar ve Guam, ABD'de Ev Dışı Çevresel Örnekleme. Ön. Veteriner. bilim 2022, 8, 803424. [CrossRef] [PubMed]

3. Jones, KE; Patel, NG; Levi, MA; Storeygard, A.; Bal, D.; Gittleman, JL; Daszak, P. Ortaya çıkan bulaşıcı hastalıklarda küresel eğilimler. Doğa 2008, 451, 990–993. [ÇaprazRef]

4. Beugnet, F.; Marié, J.-L. Avrupa'da refakatçi hayvanlarda ortaya çıkan artropod kaynaklı hastalıklar. Veteriner. parazitol. 2009, 163, 298–305. [CrossRef] [PubMed]

5.Peter, SG; Kariuki, HW; Aboge, GİT; Gakuya, DW; Maingi, N.; Mulei, CM Süt Sığırlarını İstila Eden Kenelerin Yaygınlığı ve Kenya, Nairobi'nin Kent Çevresindeki Küçük Çiftliklerde Barındırdıkları Patojenler. Veteriner. Med. uluslararası 2021, 2021, 9501648. [CrossRef]

6. Graf, J.-F.; Gogolewski, R.; Leach-Bing, N.; Sabatini, GA; Molento, MB; Bordin, EL; Arantes, GJ Kene kontrolü: Bir endüstri bakış açısı. Parazitoloji 2004, 129, S427–S442. [CrossRef] [PubMed]

7. de la Fuente, J. Vektör kontrolü için aşılar: Gelecek için heyecan verici olanaklar. Veteriner. J.2012, 194, 139–140. [CrossRef] [PubMed]

8. Sparagano, O.; Földvári, G.; Derdaková, M.; Kazimírová, M. Keneler ve kene kaynaklı hastalıkların ortaya çıkardığı yeni zorluklar. Biyoloji 2022, 77, 1497–1501. [ÇaprazRef]

9. Doolan, DL; Apte, SH; Proietti, C. Genom tabanlı aşı tasarımı: Sıtma ve diğer bulaşıcı hastalıklar için vaat. uluslararası J. Parazitol. 2014, 44, 901–913. [ÇaprazRef]

10. Bragazzi, Hollanda; Gianfredi, V.; Villarini, M.; Rosselli, R.; Nasr, A.; Hüseyin, A.; Martini, M.; Behzadifar, M. Aşılar Büyük Veriyle Buluşuyor: Son Teknoloji ve Gelecek Beklentileri. Klasik 3I'lerden ("İzole-Etkisizleştir-Enjekte") Vaccinology 1.0'den Vaccinology 3.0'a, Vaccinomics'e ve Tarihsel Bir Genel Bakışın Ötesinde. Ön. Halk Sağlığı 2018, 6, 62. [CrossRef]

11. Zepp, F. Aşı tasarımının ilkeleri—Doğadan alınan dersler. Aşı 2010, 28 (Ek 3), C14–C24. [ÇaprazRef]

12. Bouazzaoui, A.; Abdüllatif, A.; Al-Allaf, F.; Bogari, N.; Al-Dehlawi, S.; Qari, S. Aşılama Stratejileri: Konvansiyonel Aşı Yaklaşımları ve Adjuvanlarla Kombinasyonda Yeni Nesil Stratejiler. Eczacılık 2021, 13, 140. [CrossRef] [PubMed]

13. D'Argenio, DA; Wilson, CB A On Yıl Aşılar: Akılcı Aşı Tasarımı için İmmünoloji ve Aşı Bilimini Entegre Etmek. Bağışıklık 2010, 33, 437–440. [ÇaprazRef]

14. Merinos, O.; Antunes, S.; Mosqueda, J.; Moreno-Cid, JA; la Lastra, JMP; Rosario-Cruz, R.; Rodriguez, S.; Domingos, A.; de la Fuente, J. Kene-patojen etkileşimlerinde yer alan proteinlerle aşılama, vektör istilalarını ve patojen enfeksiyonunu azaltır. Aşı 2013, 31, 5889–5896. [CrossRef] [PubMed]

15. Beyaz, AL; Gaff, H. İnceleme: Blacklegged, Lone Star ve American Dog Ticks için Kene Kontrol Teknolojilerinin Uygulanması. J. Entegre Haşere Yönetimi 2018, 9, 12. [CrossRef]

16. Willadsen, P. Kene önleyici aşılar. Parazitoloji 2004, 129, S367–S387. [ÇaprazRef]

17. de la Fuente, J.; Merino, O. Vaccinomics, kene aşılarına giden yeni yol. Aşı 2013, 31, 5923–5929. [CrossRef] 18. Hill, CA; Wikel, SK Ixodes scapularis Genom Projesi: Kene araştırmalarını ilerletmek için bir fırsat. Trendler Parazitol. 2005, 21, 151–153. [ÇaprazRef]

19. Medine, JM; Abbas, MN; Bensaoud, C.; Hackenberg, M.; Kotsyfakis, M. Ixodes ricinus Uzun Kodlamayan RNA'ların Biyoinformatik Analizi, Konak miRNA'ların Bağlanma Yeteneklerini Tahmin Eder. uluslararası J. Mol. bilim 2022, 23, 9761. [CrossRef]

20. Valle, MR; Guerrero, FD Omics çağında kene önleyici aşılar. Ön. Biyosci. (Elit Baskı) 2018, 10, 122–136. [ÇaprazRef]

21. Logullo, C.; Vaz, İDS; Sorgin, MHF; Paiva-Silva, GO; Faria, FS; Zingali, RB; DE Lima, MFR; Abreu, L.; Oliveira, EF; Alves, EW; et al. Sert bir kene olan Boophilus microplus'ın yumurtasından bir aspartik proteinaz öncüsünün izolasyonu. Parazitoloji 1998, 116, 525–532. [ÇaprazRef]

22. Kurlovs, AH; Li, J.; Cheng, D.; Zhong, J. Ixodes pacificus Keneler, Rickettsia Endosymbiont'un Antibiyotik Tedavisinden Sonra Embriyogenezi ve Yumurta Kuluçkasını Sürdürür. PLoS BİR 2014, 9, e104815. [CrossRef] [PubMed]

23. Sappington, TW; Hays, AR; Raikhel, AS Mosquito vitellogenin reseptörü: Saflaştırma, gelişimsel ve biyokimyasal karakterizasyon. Böcek Biyokimyası. Mol. Biol. 1995, 25, 807–817. [CrossRef] [PubMed]

24. Vaz, İDS; Logullod, C.; Sorgin, M.; Velloso, FF; de Lima, MFR; Gonzales, JC; Masuda, H.; Oliveira, PL; Masudaa, A. Sığırların Boophilus microplus yumurtalarından izole edilen bir aspartik proteinaz öncüsü ile aşılanması. Veteriner. immünol. immünopatol. 1998, 66, 331–341. [ÇaprazRef]

25. Leal, AT; Seixas, A.; Pohl, PC; Ferreira, CA; Logullo, C.; Oliveira, PL; Farias, SE; Termignoni, C.; Vaz, İDS; Masuda, A. Sığırların rekombinant Boophilus Yolk pro-Cathepsin ile aşılanması. Veteriner. immünol. immünopatol. 2006, 114, 341–345. [ÇaprazRef]

26. Leal, AT; Pohl, PC; Ferreira, CA; Nascimento-Silva, MC; Sorgin, MH; Logullo, C.; Oliveira, PL; Farias, SE; Vaz, İDS; Masuda, A. Boophilus microplus yumurta sarısı pro-katepsinin inklüzyon gövdelerinde eksprese edilen iki rekombinant formunun saflaştırılması ve antijenitesi. Protein İfadesi Saf. 2006, 45, 107–114. [CrossRef] [PubMed]

27. Yamashita, O.; Indrasith, LS Eklembacaklılarda Embriyogenez Sırasında Sarısı Proteinlerinin Metabolik Kaderleri. (Eklembacaklılar/embriyogenez/yumurta sarısı proteinleri/sınırlı proteoliz/proteaz). Dev. Büyüme Farkı. 1988, 30, 337–346. [ÇaprazRef]

28. Tellam, R.; Kemp, D.; Binicilik, G.; Briscoe, S.; Smith, D.; Keskin, P.; Irving, D.; Willadsen, P. Vitellin ile aşılanmış koyunlarla beslenen Boophilus microplus'ın azaltılmış yumurtlama pozisyonu. Veteriner. parazitol. 2002, 103, 141–156. [ÇaprazRef]

29. Boldbaatar, D.; Umemiya-Shirafuji, R.; Liao, M.; Tanaka, T.; Xuan, X.; Fujisaki, K. Haemaphysalis longicornis kenesinden elde edilen çoklu vitelogeninler, yumurtalık gelişimi için çok önemlidir. J. Böcek Fiziği. 2010, 56, 1587–1598. [ÇaprazRef]

30. Seixas, A.; Dos Santos, PC; Velloso, FF; Vaz, İDS; Masuda, A.; Boynuz, F.; Termignoni, C. Bir Boophilus microplus vitellin parçalayıcı sistein endopeptidaz. Parazitoloji 2003, 126, 155–163. [ÇaprazRef]

31. Seixas, A.; Leal, AT; Nascimento-Silva, MCL; Masuda, A.; Termignoni, C.; Vaz, IDS Bir kene vitellini parçalayan enzimin (VTDCE) aşı potansiyeli. Veteriner. immünol. immünopatol. 2008, 124, 332–340. [CrossRef] [PubMed]

32. Jarmey, J.; Binicilik, G.; Pearson, R.; McKenna, R.; Boophilus microplus'tan Willadsen, P. Carboxydipeptidase: Anjiyotensin dönüştürücü enzime benzerliği olan "gizli" bir antijen. Böcek Biyokimyası. Mol. Biol. 1995, 25, 969–974. [CrossRef] [PubMed]

33. Willadsen, P.; Smith, D.; Cobon, G.; McKenna, RV Sığırların Boophilus microplus'a karşı tek başına veya rekombinant Bm91 ile kombinasyon halinde rekombinant antijen Bm86 ile karşılaştırmalı aşılaması. Parazit İmmünol. 1996, 18, 241–246. [ÇaprazRef]

34. Garcia-García, JC; Montero, C.; Redondo, M.; Vargas, M.; Kanallar, M.; Boue, O.; Rodriguez, M.; Koşular, M.; Machado, H.; Gonzalez, IL; et al. Sığır kenesi Boophilus microplus'tan izole edilen rekombinant antijen Bm95 ile aşılanmış sığırlarda Bm86 ile bağışıklamaya dirençli kenelerin kontrolü. Aşı 2000, 18, 2275–2287. [ÇaprazRef]

35. Lambertz, C.; Chongkasikit, N.; Jittapalapong, S.; Ganguly, M. Bos indicus Sığırlarının Yerel Rhipicephalus (Boophilus) microplus Kenelerinden Elde Edilen Anti-Tick Antigen Bm91'e Karşı Bağışıklık Tepkisi ve Doğal İstila Altında Kene Üreme Üzerindeki Etkisi. J. Parazitol. Res. 2012, 2012, 907607. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com