İsveç kirazı (Vaccinium Vitis-idaea L.) Polifenollerinin Obez Adiposit Hipertrofisi ve Vasküler Endotelyal Disfonksiyon Üzerine ROS Modüle Edici Etkileri Bölüm 1

lütfen tıklayınoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

Soyut:Hipertrofik yağ dokusuna eşlik eden oksidatif stres ve düzensiz adipositokin sekresyonu, vasküler endotel disfonksiyonuna yol açan kronik inflamasyonu indükler. Bu çalışma, yaban mersini meyvesinden elde edilen antosiyanin (ACN) ve antosiyanin olmayan polifenol (PP) fraksiyonlarının, 3T3-L1 adipositleri ve insan göbek damarı endotel hücrelerini (HUVEC'ler) kullanarak adipoz doku hipertrofisini ve endotelyal işlev bozukluğunu azaltma yeteneğini araştırdı. Bu çalışma, PP fraksiyonunun, antioksidan enzim ekspresyonunu (SOD2) artırarak ve oksidan enzim ekspresyonunu (NOX4, iNOS) inhibe ederek hipertrofik adipositlerde hücre içi ROS oluşumunu azalttığını göstermiştir. Ayrıca, PP ve ACN fraksiyonları, aP2, FAS ve DAGT1 gibi lipojenik genlerin ekspresyonunun aşağı regülasyonu ile birlikte adipositlerdeki trigliserit içeriğini azalttı. Her iki fraksiyonla tedavi, hipertrofiye olmuş adipositlerdeki anahtar adipokinlerin mRNA ekspresyonunu ve protein salgılanmasını modüle etti. Leptin ve adiponektinin ekspresyonu ve sekresyonu sırasıyla aşağı ve yukarı regüle edildi. Ayrıca, PP ve ACN fraksiyonları, proinflamatuar genlerin (IL-6, IL-1) ve adezyon moleküllerinin (VCAM{{{{ 14}}, ICAM-1, SELE). Elde edilen sonuçlar, polifenol bakımından zengin yaban mersini meyvesinin tüketilmesinin, antioksidan ve antienflamatuar etkileri nedeniyle obezite ve endotelyal disfonksiyonu önlemeye ve tedavi etmeye yardımcı olabileceğini düşündürmektedir.

Anahtar Kelimeler:polifenoller; antosiyaninler;yaban mersini; antioksidan potansiyeli; anti-obezite; antienflamatuvar;cistanche tubulosa özü;3T3-Ll adipositler; hipertrofi;adipokinler; endotel disfonksiyonu

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

1. Giriş

Obezite, kardiyovasküler hastalık için bağımsız bir risk faktörüdür ve hem yetişkinlerde hem de çocuklarda artan dislipidemi, insülin direnci, hipertansiyon ve ateroskleroz riskinin önde gelen nedenlerinden biridir [1]. Obezitede, hipertrofik adipositlerde aşırı yağ birikimi ile beyaz adipoz doku (WAT) işlevsiz hale gelir, bu da kronik inflamasyona, oksidatif strese ve tip 2 diabetes mellitusa katkıda bulunan düzensiz adipokin salgılanmasına yol açar ve ayrıca bağımsız olarak koroner endotelyal disfonksiyon ile ilişkilidir [24]. ,3]. Hipertrofik adipositler, pozitif enerji dengesi, diyabet ve kardiyometabolik hastalıkları birbirine bağlayan temel faktördür [2]. WAT bir endokrin organ olarak görev yapar ve salgılanan adipokinler ve sitokinler aracılığıyla viseral veya subkutan WAT ve kardiyovasküler dokular arasındaki çapraz konuşmaya aracılık eder.cistanche tubulosa redditLeptin, adiponektin ve resistin gibi adipokinler, sitokinler, TNF- , IL-1 , IL-6, IL-8 ve MCP-1 ve reaktif oksijen ve nitrojen türleri ( ROS ve RNS), doğrudan ve dolaylı mekanizmalar yoluyla endotel disfonksiyonu gelişimini etkiler [4]. Ek olarak, esas olarak obez bireylerden gelen perivasküler yağ dokusu (PVAT), lokal inflamasyonu ve endotelyal fonksiyon bozukluğunu teşvik eder.

PVAT, adipokinler, ROS ve nitrik oksit (NO) gibi vazoaktif bileşikler üreterek vasküler homeostaza katkıda bulunur. Çok çeşitli biyoaktif moleküller salgılayarak PVAT, vasküler düz kas hücresi kasılmasını, çoğalmasını ve göçünü etkiler [4].

Cistanche bağışıklığı artırabilir

Damar sisteminin iç duvarını kaplayan endotel hücreleri, homeostatik fonksiyonları düzenler ve bunların disfonksiyonu, ateroskleroz ve kardiyovasküler hastalıkların erken habercisidir [5]. Oksidatif stres, endotelyal hücre aktivasyonuna katkıda bulunur, onu adezyon, infiltrasyon ve immün hücre aktivasyonu için hazırlar ve vaskülatürde düşük dereceli bir inflamatuar fenotipe yol açar [5,6]. ROS, NO'nun artan degradasyonu yoluyla endotel bağımlı vasküler gevşemeyi değiştirebilir [6]. Endotel disfonksiyonu tersine çevrilebilir, bu da aterosklerozun ilerlemesini geciktirebilir, hatta önleyebilir ve arteriyel fonksiyonu iyileştirebilir ve kardiyovasküler olayların insidansını azaltabilir I5]. Son klinik çalışmalar, obeziteyi ve insülin direncini hedefleyen farmakolojik olmayan ve farmakolojik tedavilerin endotel fonksiyonunu iyileştirdiğini ve düşük dereceli inflamasyonu azalttığını göstermiştir [7]. Bu bulgular obezite, insülin direnci ve endotel disfonksiyonu arasındaki ilişkiyi göstermiştir; bu nedenle obezitede patolojik adiposit fonksiyonunun azaltılması kardiyovasküler hastalıkların önlenmesinin amacı olmalıdır. Hipertrofik yağ dokusunda oksidatif stresi ve inflamasyonu azaltan terapötik ve beslenme stratejileri, kardiyovasküler hastalığı önlemek için önemli bir hedef olabilir [7].

Meyveler, flavonoller, fenolik asitler ve antosiyaninler gibi zengin polifenol kaynaklarıdır ve epidemiyolojik çalışmalar, meyve alımındaki artış ile obezite ve kardiyovasküler hastalıktaki azalma arasında bir ilişki olduğunu bildirmiştir ]8]. Berry meyveleri doğal antioksidanlar olarak bilinir ve yüksek antioksidan potansiyelleri nedeniyle giderek daha sık doğal fonksiyonel gıdalar olarak anılırlar [9]. İsveç kirazı "süper meyveler" olarak sınıflandırılır, özellikle C, A ve E vitaminleri (tokoferol) ve polifenoller gibi antioksidanlar açısından zengindir [10]. In vitro ve in vivo çalışmalar, yaban mersininin anti-inflamatuar[11], antioksidan [11] ve antiproliferatif aktiviteler [8,9] gibi sağlığa yararlı çeşitli etkileri olduğunu göstermiştir. Ayrıca yaban mersininin diyabetik hayvanlarda diyete bağlı obeziteyi ve düşük dereceli iltihabı önlediği gösterilmiştir [12]. Önceki çalışmamız, dondurularak kurutulan İsveç kirazı meyvesinin sulu ekstraktının anti-inflamatuar potansiyelini gösterdi [11]. Ekstrakt, iltihaplı TNF'de pro-inflamatuar (IL-6, MCP-1 ve IL-1) ve anti-inflamatuar (IL-10) gen ekspresyonunu düzenledi{{20} }3T3-L1 adipositlerini indükledi ve proinflamatuar mediatörlerin (TNF- , IL-1 , IL-6, MCP) ekspresyonunu aşağı regüle ederek aktive edilmiş RAW 264.7 makrofajlardaki inflamatuar yanıtı bastırdı{{30 }}, iNOS, COX-2). Ek olarak, yaban mersini meyve özü ile tedavi edilen iltihaplı adipositlerde önemli antioksidan etkiler gözlendi. Antioksidan savunma enzimlerinin (SOD, katalaz, GPx) ekspresyonunun artması ve pro-oksidan enzimin (NADPH oksidaz 4) inhibe edilmesinin bir sonucu olarak hücre içi ROS birikimi azalmıştır [11].

Bu çalışma, yaban mersini meyvesi antosiyanin (ACN) fraksiyonu ve antosiyanin olmayan polifenol (PP) fraksiyonunun, in vitro modellerde taklit edilen hipertrofik obezite ve endotelyal disfonksiyonu önleme ve tedavi etme kabiliyetini araştırdı. ACN ve PP fraksiyonlarının oksidatif stres, inflamasyon ve düzensiz adipokin sekresyonundaki moleküler yolaklar üzerindeki etkisi, obez hipertrofiye 3T3-L1 adipositlerde analiz edildi. Endotel disfonksiyonuna karşı koruyucu potansiyel, TNF-x ile indüklenen insan göbek damarı endotel hücreleri (HUVEC'ler) kullanılarak değerlendirildi.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1.Antosiyanin ve Antosiyanin Olmayan Polifenol Fraksiyonlarının Hazırlanması

DANEX şirketinden (PHU"DANEX", Wielen, Polonya) elde edilen donmuş yabanmersini(Vaccinium Vitis-idea L.)meyvesi meyve özüne homojenleştirildi, daha sonra -80 derecede donduruldu ve dondurarak kurutmaya tabi tutuldu. daha önce açıklanan prosedüre göre [11]. Meyve tozu, yüzde 0.75 (h/h)asetik asit içeren bir su solüsyonunda süspanse edildi. Katıların (g) ve özütleyicinin (mL) oranı 1:10'du. 30 saniye boyunca bir girdaplı karıştırıcıda karıştırıldıktan sonra, süspansiyon bir sonik banyoya (5 dakika, 20 derece) yerleştirildi. Yine ekstraksiyon karışımı bir vorteks karıştırıcıda 30 saniye karıştırıldı ve 20 derecede beklemeye bırakıldı.

10 dakika sonra numune 3600xg'de (10 dakika, 20 derece) santrifüjlendi ve elde edilen süpernatant toplandı. Taze özütleyici, ikinci özütleme aşamasını başlatmak için kalan katıların içine döküldü. İkinci aşamanın prosedürü ilkiyle aynıydı. Her iki aşamanın özleri birleştirildi ve küçük meyve kalıntılarını çıkarmak için 12,000×g'de santrifüjlendi.

Fraksiyon hazırlamanın bir sonraki adımında, ekstrakttan şekerlerin ve organik asitlerin uzaklaştırılması gerçekleştirilmiştir. Ayırma, XK 26/20 cam kolon (GE Healthcare, Chicago, IL, ABD) ile donatılmış AKTA Explorer 100 Air(GE Healthcare, Chicago, IL, ABD) kromatografi sistemi ile gerçekleştirildi. ). Kolon, 40 mL Amberlite XAD-7 HP makro gözenekli adsorban reçine (DuPont, Wilmington, DE, ABD) ile dolduruldu. Kolona enfeksiyondan önce, çözelti (ekstraktın 50 ml'si ekstraksiyon aşamasında elde edildi), cam elyaf ön filtreli (Merck) 0.45-um gözenek boyutlu şırınga filtresi (Millex-HV Durapore PVDF) membranı kullanılarak süzüldü. Millipore, Burlington, MA, ABD). Üç eluent uygulandı: yüzde A-5 (h/o)formik asit, B-metanol ve C-yüzde 0.1 (u/o) formik asit. Formik asit çözeltileri, uygun miktarda formik asit ile deiyonize su karıştırılarak hazırlanmıştır. Eluent akış hızı 5 mL/dk olarak ayarlandı. Ayırma sırasında aşağıdaki kromatografik program kullanıldı: Kolon dengeleme: yüzde 95 A, yüzde 5 B, 3 CV (sütun hacmi); örnek enjeksiyonu-50 özütün mL'si; bağlanmamış maddelerin yıkanması-1:yüzde 100 C,6 CV;bağlı olmayan maddelerin yıkanması-2:yüzde 100 A,1 CV;elüsyon:yüzde 20 A,yüzde 80 B,5 CV;sütun yıkama: yüzde 100 B, 2.5 CV.

Absorbansı gösteren (λ{0}},320 ve 520 nm）'de izlenen) elüsyon aşamasının tüm çıkış suyu bir döner buharlaştırıcı (Laborota 4003 HB kontrol, Heidolph, Almanya) Katılar, yüzde 0.75 (o/o) asetik asitten oluşan bir sulu çözelti içinde çözüldü.Çözelti, cam şişelere aktarıldı ve -85 derecede donduruldu ve daha sonra bir dondurarak kurutucu Beta'ya {{8 yerleştirildi. }}(Martin Christ, Almanya) Dondurarak kurutma 48 saat gerçekleştirildi.Gerçek kurutma 10 Pa basınç altında 40 saat (20 saat -15 derecelik bir raf sıcaklığında ve 20 saat 15 derece) Son kurutma, 22 derece sıcaklıkta, 8 saat basınç kontrolü olmaksızın gerçekleştirildi.Katı preparasyonlar, nitrojen atmosferi altında, -85C'de hava geçirmez şekilde kapatılmış şişelerde saklandı.

Şişe katı içeriği, yüzde 5 (o/o)formik asitten oluşan su solüsyonunda çözündürüldü ve bir 0.45-um gözenek boyutlu filtre (Merck Millipore) kullanılarak süzüldü. Örneklerdeki diğer polifenol bileşiklerinden antosiyaninlerin ayrılması, bir UV/VIS dedektörü ve bir Agilent Zorbax SB C18 kolonu (250 x 21.2 mm) ile donatılmış bir AKTA Explorer 100 Hava kromatografı kullanılarak gerçekleştirildi. Ayırma 20 derecede gerçekleştirildi. Sıvı fazın akış hızı 21 mL/dakika idi. İki eluent uygulandı: su ve B-metanol içinde A-5 yüzde (h/v)formik asit. Kolon dengelemesinden (yüzde 95 A, yüzde 5 B,3 CV) ve 2 mL hacimde numune enjeksiyonundan sonra, ayırma karmaşık bir gradyan içinde gerçekleştirildi. Gradyan programı şu şekildeydi: yüzde 5 B-0.5 CV; yüzde 20 B-2 CV; yüzde 20 B-1.2 CV; yüzde 30 B-3. 5 CV; yüzde 30 B-1.2CV; yüzde 45 B-3.5 CV; yüzde 45 B-1.2CV;yüzde 100 B-2.5 CV;100 yüzde B-2.5 CV. λ=520 nm'de absorbansa sahip atık su toplandı ve bir antosiyanin （ACN） fraksiyonu olarak ifade edildi. 入=320 nm'de absorbans gösteren çıkış da toplandı ve antosiyanin olmayan polifenol fraksiyonu (PP) olarak belirtildi. Her iki fraksiyon buharlaştırıldı, bir su asetik asit çözeltisi içinde çözüldü, dondurularak kurutuldu ve yukarıda tarif edildiği gibi saklandı. ACN ve PP fraksiyonlarını hazırlamak için kullanılan tüm kimyasallar Sigma-Aldrich'ten (Merck Group, Poznan, Polonya) satın alındı.

2.2.ACN ve PP Fraksiyonlarında Polifenol Tanımlama ve Kantifikasyonu

ACN ve PP fraksiyonlarının polifenol bileşimi, bir G1315D fotodiyot dizi detektörü ile donatılmış bir Agilent 1200 serisi HPLC sistemi (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, ABD) üzerinde HPLC-DAD-ESI-MS yöntemiyle analiz edildi ve çevrimiçi olarak birleştirildi. Agilent 6224 uçuş süresi MS sistemi ile. Kromatografik ayırmalar 150x2.1 mm, 3-um C18 kolonu （Advanced Chromatography Technologies, Aberdeen, İskoçya) üzerinde gerçekleştirilmiştir. Daha önce yayınlanmış bir çalışma, ayırma koşullarını (mobil faz, gradyan elüsyon programı, akış hızı, numune enjeksiyon hacmi) detaylandırmaktadır[11].

HPLC kromatogramları, sırasıyla flavan-3-ols, hidroksisinnamik asit türevleri, flavonoller ve antosiyaninleri saptamak için önerilen 280.325.355 ve 520 nm'de kaydedildi.

ACN ve PP fraksiyonlarındaki polifenol bileşikleri, siyanidin-3-O-glukozit (antosiyaninler), kateşin ((epi)kateşin ve prosiyanidinler), 4-hidroksibenzoik asit (hidroksibenzoik asit türevleri), ferulik asit eşdeğerleri olarak ölçülmüştür. (ferulik asit türevi), klorojenik asit(3-O-kafeoilkinik asit),p-kumarik asit (kumarik asit türevi), trihidroksi benzoik asit-gallik asit(benzoik asit ve arbutin türevleri) ve kersetin (kersetin glikozitler) . Tüm numuneler, bağımsız olarak hazırlanmış ACN ve PP fraksiyonları çözeltilerinden üç kopya halinde enjekte edildi.

DAD dedektöründen geçtikten sonra, kolon eluatı, pozitif iyon ve negatif iyon modunda çalışan bir elektrosprey iyonizasyon (ESI) kaynağı ile donatılmış MS sistemine yönlendirildi. Daha önce yayınlanmış bir makale, ACN ve PP fraksiyonlarındaki fenolik bileşikleri tanımlamak için kullanılan ESI-MS parametrelerini sunar [11]. Cihaz kontrolü, veri toplama ve analizi MassHunter B.04.00 yazılımı (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, ABD) ile gerçekleştirilmiştir. Sigma-Aldrich, HPLC/DAD/MS analizi için fenolik standartlar ve diğer reaktifleri sağladı.

2.3. 3T3-L1 Adiposit Kültürü ve Tedavisi

Fare preadiposit 3T3-L1 hücreleri, American Type Culture Collection'dan (ATCC, CL-173) elde edildi. Hücreler, yüzde 5 CO2 altında 37 derecede, Dulbecco'nun modifiye edilmiş kartal ortamındaki (DMEM) (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) atmosferde yüzde 10 (o/o) fetal sığır serumu (FBS) ile kültürlendi. (Gibco, Thermo Fisher Scientific Polska, Varşova, Polonya) eki. 3T3-L1 preadipositleri, daha önce açıklanan protokol [11] izlenerek farklılaşma sürecine tabi tutuldu. Preadipositler, 2.5 x 104hücre/cm² yoğunlukta 12-kuyu plakalarına ekildi ve birleşene kadar kültürlendi. Daha sonra 0.25 μM deksametazon (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya), 0.5 mM 3-izobütil-1-metilksantin （Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya） içeren bir farklılaşma karışımı ile 2 gün boyunca uyarıldılar. ve yüzde 10 FBS ile DMEM'de 1 μM insülin（Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya）. Ortam, yüzde 10 FBS ve 1 uM insülin ile desteklenmiş DMEM ile değiştirildi. 2 gün sonra, kültür ortamı, yüzde 10 FBS ilavesiyle DMEM ile değiştirildi ve 12.3. günde analiz edilene kadar 2-gün aralıklarla yenilendi3-L1 adipositleri 24 saat boyunca ACN ve PP fraksiyonları ile işleme tabi tutuldu. 5, 10 ve 20 ug/mL konsantrasyonları.

2.4.HUVEC Kültürü ve Tedavisi

İnsan göbek damarı endotel hücreleri (HUVEC'ler) ATCC(CRL{{{0}})'den elde edildi. HUVEC'ler, yüzde 10 FBS (Gibco), sığır nöral dokusundan (30 ug/mL) (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) ve heparin ( 100ug/mL)(Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya). HUVEC'ler, sıçan kuyruğu kolajen solüsyonu (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) ile kaplanmış 24-yuvalı plakalara 6 x 103 hücre/cm² yoğunlukta ekildi. Daha sonra 24-h HUVEC kültürleri 3 saat süreyle 0.1,1 ve 10 ug/mL konsantrasyonlarında ACN ve PP fraksiyonlarına maruz bırakıldı ve ardından TNF- (10ng/mL)(Sigma-Aldrich, Poznan) ile işlendi. , Polonya) inflamasyonu indüklemek için 3 saat daha.

2.5. Hücre Canlılığı Testi

Hipertrofik 3T3-L1 adipositlerin ve TNF- -indüklenmiş HUVEC'lerin, tedavi edilmemiş ve ACN ve PP fraksiyonları ile tedavi edilmiş canlılığı, MTT(3-(4,{{7) uygulanarak analiz edildi. }}dimetiltiazol-2-il)-25-difeniltetrazolyum bromür) tahlili(Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) daha önce tarif edilen prosedürü takip ederek[13]. Hücre tedavisi için uygulanan düşük konsantrasyonlarda ACN ve PP fraksiyonları, MTT testinde ortamın rengini ve absorbans okumasını etkilemedi.

2.6.Hücre İçi ROS Üretiminin Belirlenmesi

3T3-L1 adipositlerinde ROS üretimi, daha önce açıklanan prosedüre dayalı olarak nitro mavi tetrazolium (NBT) tahlili kullanılarak ölçüldü [14]. Yüzde 0.2 NBT (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya)çözeltisinde 90-dakikalık inkübasyondan sonra, hücreler fosfat tamponlu salin ile yıkandı ve metanol ile sabitlendi. KOH ve DMSO kullanılarak formazanın ekstraksiyonundan sonra, absorbans 620 nm'de okundu（Tecan Infinite M200, Tecan Group Ltd., Männedorf, İsviçre).

2.7.Hücre İçi Lipid İçeriğinin Ölçülmesi

PP ve ACN fraksiyonlarının hipertrofiye olmuş adipositlerdeki lipid içeriği üzerindeki etkisi, daha önce açıklanan Oil Red O(Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) boyama yöntemi [13] ve Adipogenesis Assay Kit kullanılarak toplam trigliseritler(TG) ölçümü ile belirlendi ( Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya)üreticinin talimatına göre. Hücre içi TG içeriği, bir enzim tahlili ile belirlendi. Mevcut TG'ye karşılık gelen kolorimetrik bir ürün, 570 nm'de ölçülmüştür. TG konsantrasyonu, TG standardı için çizilen eğriye göre hesaplandı.

2.8.RNA Ekstraksiyonu ve Real-Time PCR Analizi

3T3-L1 adipositleri ve HUVEC'ler, toplam RNA izolasyonu için TRI-Reagent (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) ile tedavi edildi. Birinci iplikçik cDNA sentezi, üreticinin talimatına göre bir Transkriptör Birinci Dizi cDNA Sentez Kiti （Roche Diagnostics, Polonya) kullanılarak 1 ug toplam RNA ile gerçekleştirildi. Gen ekspresyonu ölçümü, gerçek zamanlı bir PCR sistemi (SmartCycler DX real-time PCR System Cepheid, Sunnyvale, CA, USA）) kullanılarak gerçekleştirildi. 25 μL'lik bir son hacimde PCR karışımı, bir cDNA numunesi （1 μL）, spesifik ileri ve ters primerler（5 μM/1 μL） ve SYBR⑧ Select Master Mix （12.5 μL）（Life Technologies, Carlsbad, CA, USA） Primer sekansları Tablo S1'de gösterilmektedir. 10 dakika, ardından 40 PCR döngüsü: 95 derecede 40'lar, 59 derecede C'de 30'lar ve 72 derecede 30'lar Göreceli gen ekspresyonu 2-△ACT yöntemi kullanılarak hesaplandı. Transkript seviyeleri -aktin'e normalleştirildi 3T3-L1 adipositler ve HUVEC'ler için GAPDH için Göreceli mRNA ekspresyonu, kontrol (muamele edilmemiş) hücrelere kıyasla kat değişimi olarak ifade edildi.Tüm reaksiyonlar üç kopya halinde gerçekleştirildi.

2.9.Adipokin Üretiminin Belirlenmesi

Leptin ve adiponektin konsantrasyonları, üreticinin protokolleri takip edilerek ELISA kitleri (Sigma-Aldrich, Poznan, Polonya) ile ölçüldü. Kantitasyon, standartların kalibrasyonu kullanılarak yapıldı. Her standart ve numune üç kopya halinde test edildi. Testler arası ve testler arası değişkenlik katsayıları sırasıyla leptin için yüzde 12,5 ve yüzde 9,3 ve adiponektin için yüzde 11,2 ve yüzde 7,9 olarak hesaplandı.

2.10.İstatistiksel Analiz

İstatistiksel analiz, STATISTICA sürüm 13.3 yazılımı (Stat-soft, Inc., Tulsa, OK, ABD) kullanılarak yapıldı. Çoklu grup ortalama değerleri arasındaki farkları tahmin etmek için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve Tukey post hoc testi uygulandı. Levene testi varyansların eşitliği varsayımını doğruladı. İstatistiksel önem p olarak belirlendi<>

3. Sonuçlar ve tartışma

3.1. Lingonberry ACN ve PP Fraksiyonlarında Polifenol Bileşimi

Çalışma, yaban mersini meyvesinden ayrılan iki polifenolik preparasyona odaklandı: antosiyanin ACN fraksiyonu ve antosiyanin olmayan PP fraksiyonu. HPLC-DAD-ESI-MS analizine dayalı olarak belirlenen ACN ve PP fraksiyonlarındaki polifenol profilleri Tablo 1'de sunulmuştur. 3-O-galaktozit (yüzde 82,5),3-O-arabinosid(yüzde 13.0) ve 3-O-glukozit (yüzde 4,5) dahil(Tablo 1A) .

Tablo 1. Antosiyanin(ACN) fraksiyonu (A) ve antosiyanin olmayan polifenol (PP) fraksiyonu (B) içinde tanımlanan bileşikler, yaban mersini meyvesinden elde edildi.

The purity of ACN preparation was evaluated at 97.3%; among the non-anthocyanin constituents, 1-O-Benzoyl-β-glucose was identified by HPLC-ESI-MS analysis in positive ion mode (precursor ion at m/z307.079, production at m/z 185.0432). The PP fraction contained polyphenolic compounds belonging to three predominant groups: Flavan-3-ols, hydroxycinnamic acid derivatives, and flavonols, which accounted for 40.4%, 22.8%, and 31.0%, respectively. In addition, the anthocyanin compounds' residue (5.8%)was detected in the PP fraction with cyanidin-3-O-galactoside as dominant anthocyanin, cyanidin-pentoxide, and cyanidin 3-O-(6"-acetyl)-glucoside (Table 1B), trace amounts of which have been identified previously in the original lingonberry fruit extract [11]. In the PP fraction, the following polyphenols were quantified in a significant amount (>%5 ): A- ve B-tipi prosiyanidinler, kateşin,3-O-kafeoilkinik asit, ferulik asit-heksozit, kersetin ve türevleri(3-O-galaktozit,3-O- arabinofuranosid,3-O-rhamnoside). Tablo 1B, yaban mersini meyvesinin PP fraksiyonunda geçici olarak tanımlanan tüm polifenolik bileşiklerin kütle spektral verilerini gösterir.

Bu makale Nutrients 2021, 13, 885 7'dan alınmıştır.