Glukokortikoidle İndüklenen Sıçan Modelinde Cistanche Deserticola ve Pirinç Şarabı Buharlama Ürünlerinin Nöroendokrin-Bağışıklık Fonksiyonu Üzerine Çalışma-Ⅱ

3.2.4. İmmünohistokimya

Nöronal apoptoz, başta apoptozu teşvik eden Bax geni ve Bcl-2 gen ailesinin antiapoptotik genleri olmak üzere birçok apoptotik ve antiapoptotik gen tarafından kontrol edilir. Bcl-2, mitokondri, endoplazmik retikulum ve nükleer membranlar gibi reaktif oksijen üreten organellerde lokalizedir. Bcl-2'nin oksijensiz radikaller üzerinde çok az etkisi vardır ancakhücrelerde oksidatif hasarı önlemek. Bax, sitoplazmadan mitokondriyal membrana taşınır, mitokondriyal membran yapısını değiştirir ve sitokrom c salınımını ve apoptozun indüksiyonunu destekler.

CİNSEL FONKSİYONU GELİŞTİREN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Bax ve Bcl-2 proteininin adrenal sitoplazmasında bir ifade vardı. Boyama tüm sarı parçacıkları gösterdi. BC grubuyla karşılaştırıldığında, MC grubundaki Bax proteininin ortalama optik yoğunluğu önemli ölçüde arttı (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Şekil 5(b), BC grubuyla karşılaştırıldığında, MC grubundaki Bcl-2 proteininin ortalama optik yoğunluğunun önemli ölçüde azaldığını göstermektedir (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Kaspaz-3 proteini normal dokulardaki orijinal formunda esas olarak sitoplazmada lokalizedir ve düşük ekspresyona sahiptir. Pozitif sinyaller soluk sarı veya kahverengimsi sarıdır. BC grubuyla karşılaştırıldığında, MC grubundaki kaspaz-3 ifadesi önemli ölçüde arttı (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Normal dokularda Fas geninin ifadesi azalmıştı ve yerinde hibridizasyon için pozitif sinyal kahverengimsi sarıydı. Şekil 5(d)'de gösterildiği gibi, BC grubuyla karşılaştırıldığında, MC grubundaki Fas proteininin ortalama optik yoğunluğu arttı (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL proteini esas olarak hücre zarında veya sitoplazmada bulunur ve pozitif sinyalleri kahverengidir. BC grubuyla karşılaştırıldığında, MC grubundaki FasL geninin ortalama optik yoğunluğu önemli ölçüde arttı (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Sonuçlar CD ve WCD'nin olabileceğini gösterdiinflamatuar hücrelerde apoptozu indüklemekve FasL proteininin ekspresyonunu ve Fas proteinine bağlanmayı teşvik ederek, kaspaz-3 proteinini aktive ederek ve bir kaspaz kaskadını tetikleyerek adrenal hasarı azaltır. WCD-HD grubunun etkisi en iyisiydi.

3.3. Bağışıklık Fonksiyonunun Belirlenmesi

3.3.1. Bağışıklık Organ İndeksi

BC grubuyla karşılaştırıldığında, MC grubunun timus katsayısı ve dalak indeksi önemli ölçüde azaldı (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

CİNSEL FONKSİYONU GELİŞTİREN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Periferik Kanda T Lenfosit Alt Gruplarının Tespiti

BC'de ve her ilaç grubunda sol üst kadranda CD4+ hücrelerinin ve sağ alt kadranda CD8+ hücrelerinin yüzdesi MC grubuna göre daha yüksekti. BC grubuyla karşılaştırıldığında, CD4+ThCD8+ oranı MC grubunda önemli ölçüde azaldı (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Serumdaki IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α ve IFN-C Düzeyinin Belirlenmesi

Şekil 8, BC grubuyla karşılaştırıldığında IL-6, TNF- ve IFN-c seviyesinin önemli ölçüde arttığını göstermektedir (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Lymus Doku Mikroskobu Gözlem Deneyinin Sonuçları

Şekil 9, BC grubunda çok sayıda lenfositin mevcut olduğunu göstermektedir. Lenfositler ve retikülositler, dağınık yuvarlak veya oval timositlerle merkezde gevşek bir şekilde düzenlenmiştir. Nekroz, inflamatuar hücre infiltrasyonu ve anormal değişiklik yoktu.

MC grubu, merkezde düzensiz bir lenfosit ve retikülosit düzenlemesi ile birlikte büyük miktarda lenfoid nekroz dokusu gösterdi. Yuvarlak veya oval timositler kayboldu, masif hücre dejenerasyonu veya nekroz belirgindi ve anormal patolojik değişikliklerle birlikte inflamatuar hücre infiltrasyonu vardı.

CD gruplarında lenfositlerin morfolojik özellikleri normale dönmüş, santral lenfositlerin ve retikülositlerin dizilişi ise neredeyse normale dönmüştü. Yuvarlak veya oval timositler iyileşti ancak az sayıda dejeneratif veya nekrotik lenfosit ve infiltre edici inflamatuar hücre kaldı.

WCD gruplarında ve PC grubunda lenfositlerin morfolojik özellikleri daha iyi onarıldı. Merkezdeki lenfositler ve retikülositler iyi sıralanmıştı, yuvarlak veya oval timositler neredeyse normaldi ancak az sayıda infiltre edici ve dejeneratif lenfosit kaldı.

3.4. CaM Protein Gen İfadesi

CaM mRNA'nın ifadesini incelemek için RQ değeri (CaM mRNA -aktin mRNA) kabul edildi. BC grubunun RQ'su 1'di. MC grubunda hipotalamusta CaM mRNA'nın ekspresyonu önemli ölçüde arttı (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Tartışma

Çin Farmakopesi [2], CD ve WCD'nin klinikte kaynatma parçalarının ana türleri olarak kullanılabileceğini kaydetmektedir. Pirinç şarabıyla buharda pişirildikten sonrayaşlanma karşıtı ve tonlayıcı böbrek-yang etkilerigeliştirildi. UPLC-QqQ-MS aracılığıyla, pirinç şarabının buharda pişirilmesi işlemi sırasında kimyasal madde tabanındaki niceliksel değişiklikleri tespit ettik. İridoid glikozitler kararsızdı ve bu glikozitlerin içeriği azaldı, hatta tespit edilemez hale geldi. Feniletanol glikozitlerin içeriği de değişti, bu da farmakodinamikte ve klinik etkide değişikliklere neden olabilir.

CİNSEL FONKSİYONU GELİŞTİREN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Klasik böbrek-yang eksikliği modeli deri altı kortikosteron enjeksiyonu ile kopyalanmıştır [19]. Aşırı dozda kortikosteron, hipotalamusta CRH'nin sırrını engelleyebilir. Bu arada ACTH'nin sırrı da engellendi. Adrenal korteks hormonu düzeyi azaldı ve dolayısıyla HPA ekseninin işlevi azaldı. HPA ekseninin hipofonksiyonu, böbrek-yang eksikliğinin ortak bir özelliğidir [20]. Daha sonra fareler "tükenme" fenomeni gösterir ve semptomlar klinikteki böbrek-yang eksikliğininkilerle uyumludur.

MC grubunda sıçan serumundaki CRH, ACTH, T ve CORT seviyeleri önemli ölçüde azaldı (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Bcl-2 ailesi üyelerinin oranının modüle edilmesi, FasThFasL'nin ölüm reseptör yoluna aracılık ettiği temel mekanizmalardan biridir ve Bcl-2 ailesi mitokondriyal yolu düzenler [21]. Apoptozu inhibe eden Bcl-2 faktörü ve Bax gibi apoptozu indükleyen faktörlerin tümü Bcl-2 ailesine aittir [22]. Hücre apoptozu, apoptozu inhibe eden faktörler ile apoptozu indükleyen faktörlerin göreceli oranı ile belirlenebilir [23]. Mitokondri, birçok apoptoz formu için merkezi kontrol noktası işlevine sahiptir [24]. Mevcut çalışma, CD-MD ve WCD'lerin Bax ifadesini çıkarabildiğini ve Bcl-2'yi artırabildiğini gösterdi.böbrek-yang eksikliğini iyileştirmek. Fas, Fas ligandı (FasL) ile ligasyon yoluyla apoptozu indükleyen ana ölüm reseptörüdür [25]. MC grubunda Fas ve FasL'nin ifadesi artarken, bu ifade WCD-MD grubunda önemli ölçüde arttı (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Bağışıklık fonksiyonundaki eksiklik, böbrek-yang eksikliğinin önemli belirtilerinden biridir [28]. Bu çalışmada WCD-MD grubunun dalak ve timus indeksinin önemli ölçüde iyileştiğini bulduk (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA ekseni en önemli düzenleyici sistemdir çünkü adrenal korteksin salgı fonksiyonunu sürdürmek için glukokortikoid sekresyonunu ve endokrin sistemi düzenler [32]. Hipotalamus dokusunda CaM mRNA'nın aşırı ekspresyonu böbrek yang eksikliği ile ilişkiliydi. CD ve WCD, kalsiyum kanallarını bloke edebilir, hipotalamusta CaM mRNA ekspresyonunu inhibe edebilir ve kalsiyum akışını azaltarak Ca2+·CaM kompleksi aktivitesini azaltabilir.

Böbrek-yang eksikliğinin oluşumu kronik bir hastalık gelişim sürecidir. Böbrek artık salt anatomik bir kavram değil, nöroendokrin bağışıklık ve genitoüriner sistemler için kullanılan genel bir terimdir. Nöroendokrin-immün (NEI) ağı önemli bir entegre düzenleyici sistemdir [33]. CD ve WCD, HPAT ekseninin işlevini düzenleyebilir ve böbrek-yang eksikliğinin iyileşmesini iyileştirebilir. Bu sonuç, böbrek-yang eksikliğinin klinik önlenmesi ve tedavisi için deneysel temeli sağlar.

CİNSEL FONKSİYONU GELİŞTİREN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%