Oksidatif Stres ve İnterlökin‑1 Karşılıklı Konuşmanın EAP Sıçanlarında Kronik Enflamasyon Üzerindeki Etkisi ve Anemone Tomentosa'ya Müdahale

 

 

Soyut

Amaçlar: Deneysel otoimmün prostatit (EAP) sıçanlarında kronik prostat iltihabında oksidatif stres ve interlökin‑1 (IL‑1) çapraz konuşmasının rolünü araştırmak ve Anemone tomentosa'nın EAP sıçanlarını tedavi ettiği mekanizmayı aydınlatmak. Yöntemler: Otuz Wistar sıçanı rastgele beş gruba atandı (her biri n=6): normal, model, düşük doz Anemone tomentosa, orta doz Anemone tomentosa ve yüksek doz Anemone tomentosa. İlaç müdahalesinden sonra prostat dokusunda TLR‑4, IRAK1 ve pNF‑κB p65 proteinlerini tespit etmek için Western blot kullanıldı. Serum süperoksit dismutaz (SOD), glutatyon peroksidaz (GSH‑Px) ve malondialdehit (MDA), test kitleri kullanılarak ölçüldü. İnterlökin-1 ve interlökin-10 dahil inflamatuar sitokinler ELISA ile ölçüldü. Bulgular: Normal grupla karşılaştırıldığında, model grubun prostatında TLR‑4, IRAK1 ve pNF‑κB p65 proteinlerinin ekspresyonu önemli ölçüde arttı (P < 0,01). Serum SOD ve GSH‑Px seviyeleri azalırken (P < 0,01), MDA ve interlökin‑1 seviyeleri arttı (P < 0,01). Model grupla karşılaştırıldığında Anemone tomentosa müdahalesi, EAP sıçanlarının prostatında TLR‑4, IRAK1 ve pNF‑κB p65 protein ekspresyonunu önemli ölçüde azalttı (P < 0.01). Serum SOD, GSH‑Px ve interlökin‑10 önemli ölçüde yukarı doğru düzenlenmiştir (P < 0,01 veya P <0,05), oysa MDA ve interlökin‑1 aşağı doğru düzenlenmiştir (P < 0,01 veya P <0,05). Histoloji, Anemone tomentosa tedavisi sonrasında prostat bezi hasarının ve inflamatuar hücre infiltrasyonunun iyileştiğini gösterdi. Sonuç: IRAK1, EAP sıçanlarında iltihaplanma sırasında oksidatif stres ile IL-1 arasındaki karşılıklı konuşmaya aracılık eden anahtar bir düğüm olabilir. EAP sıçanlarında Anemone tomentosa'nın anti-inflamatuar mekanizması, TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65 sinyal yolunu düzenleyerek oksidatif stresi ve IL‑1'i azaltmayı içerebilir.

Bitki Cistanche Takviyeleri

 

 

 

Daha fazla ayrıntı için tıklayın

 

 

 

Anahtar Kelimeler

Kronik prostatit; deneysel otoimmün prostatit (EAP); oksidatif stres; interlökin-1 (IL-1); IRAK1; TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65 sinyal yolu; SOD; GSH‑Px; MDA; ELISA; Batı lekesi; Anemon tomentosa; Dahuocao (Zhuang ilacı); Geleneksel Çin Tıbbı; Prostatit için TCM otu; Çin etnotıbbı; antienflamatuvar; antioksidan tedavisi

 

 

Kronik prostatit (CP)üroloji ve androlojide en sık görülen hastalıklardan biridir. Çin'de bildirilen SP prevalansı %6,0 ila %32,9 arasında değişmektedir [1]. Klinik olarak, temel olarak kronik pelvik ağrı ile karakterizedir ve değişen derecelerde üriner semptomlar ve cinsel işlev bozukluğuna eşlik ederek hastaların yaşam kalitesini ciddi şekilde etkileyebilir. Araştırma raporlarına göre [2], SP'nin patogenezi patojen enfeksiyonu, oksidatif stres, idrar reflü, seks hormonu seviyelerindeki değişiklikler, nöroendokrin dengesizliği ve immün-inflamatuar yanıtlarla ilişkili olabilir. Mevcut çalışmalar prostatın inflamatuar durumunda büyük miktarda reaktif oksijen türünün (ROS) üretildiğini göstermektedir; yüksek ROS mikro ortamı oksidatif stresi indükler ve SP'nin oluşumuna ve gelişimine katkıda bulunur [3]. Sitokinler, SP'nin oluşumunda ve gelişiminde önemli rol oynayan düzenleyici protein polipeptitleridir; hastalığın ciddiyeti, prostat salgılarındaki interlökin‑1 (IL‑1) düzeyi ile ilişkilidir [4] ve bu da potansiyel bir terapötik yaklaşım sağlar. Karmaşık patofizyoloji göz önüne alındığında, SP'ye yönelik modern tıbbi tedavilerin bazı sınırlamaları vardır [5]. Son yıllarda, Geleneksel Çin Tıbbı (TCM), SP'nin tedavisinde, ağrının ve idrar semptomlarının hafifletilmesinde ve karakteristik avantajlar gösterilmesinde olumlu etkinlik göstermiştir.

Geleneksel Çin Tıbbı perspektifinden bakıldığında, bu hastalığın etiyolojisi ve patogenezi böbrek yetmezliği, nem ısısı ve kan stazını içermektedir [6]. Zhuang etnomedikal bitkisi Dahuocao (Anemone tomentosa; keskin, hafif acı, nötr özellikte) ısıyı temizleme ve nemi dağıtma, stranguria'yı hafifletmek için diürezi teşvik etme, qi'yi tonlama ve böbreği güçlendirme işlevlerine sahiptir [7]. Klinik gözlemler, Dahuocao'nun CP semptomlarını iyileştirebileceğini [8] ve CP model sıçanlarda inflamatuar sitokin sekresyonunu düzenleyebileceğini göstermektedir [9]. Mekanizması, prostatik korpora amilaceadan kaynaklanan mikroRNA‑146a/Toll benzeri reseptör‑4 (TLR‑4)/nükleer transkripsiyon faktörü‑κB (NF‑κB) yolu ile ilişkili olabilir [10]. Buna dayanarak mevcut çalışma, deneysel otoimmün prostatit (EAP) sıçan modelinde kronik prostat enflamasyonunda oksidatif stres ile IL-1 arasındaki çapraz etkileşimin rolünü gözlemledi ve Dahuocao kaynatma işleminin müdahale etkisini araştırdı.

Malzemeler

1.1 Deney hayvanları

Changsha Tianqin Bioteknoloji Co., Ltd.'den (lisans numarası: SCXK2019‑0013) 8 haftalık, vücut ağırlığı 200 ± 17 g olan otuz erkek Wistar sıçanı satın alındı. Hayvan etiği onay numarası: DW20220926‑202, Guangxi Çin Tıbbı Üniversitesi. Hayvanlar, Guangxi'deki TCM'de Önleme ve Tedavi için Moleküler Biyolojinin Anahtar Laboratuvarı'na yerleştirildi.

 

1.2 Ana cihazlar ve reaktifler

Elektroforez aparatı (Beijing Liuyi, DYCZ‑24DN), nükleik asit/protein niceleyici (Denovix DS‑11), yarı kuru transfer sistemi (ATTO WSE‑4040, AE6675L). Freund's Adjuvant'ı (Sigma‑Aldrich, F5881) tamamlayın. TLR‑4 antikoru (Affinity, AF7017), interlökin‑1 reseptörüyle ilişkili kinaz‑1 (IRAK1) antikoru (Affinity, AF4742), fosfo‑NF‑κB p65 antikoru (Affinity, AF2006). GSH‑Px kiti (Nanjing Jiancheng, A005‑1), SOD kiti (Nanjing Jiancheng, A001‑1), MDA kiti (Nanjing Jiancheng, A003‑1). IL‑1 ELISA (Lianke Bio, EK301BHS), IL‑10 ELISA (Lianke Bio, EK310).

Yöntemler

 

2.1 EAP sıçan modeli hazırlığı

Saflaştırılmış sıçan prostat proteinlerinin hazırlanmasında önceki yöntemler izlendi [10]. Bağışıklama modellemesi [10-11] belirlenen protokollere göre gerçekleştirildi. Başarılı modelleme, prostat kanalları içindeki mukozal kıvrımların kaybolması, eksik asinus, stromal ödem ve inflamatuar hücre infiltrasyonu ile gösterilmiştir [12].

 

2.2 Dahuocao kaynatma işleminin hazırlanması

Dahuocao (Anemone tomentosa) kaynatma önceki deneysel prosedürlere göre hazırlandı [10].

 

2.3 Gruplandırma ve ilaç uygulaması

Otuz sıçan, rastgele sayı tablosuyla normal, model ve düşük, orta ve yüksek dozlu Dahuocao gruplarına (grup başına n=6) rastgele atandı. Başarılı modellemenin ardından düşük, orta ve yüksek doz gruplarına, sırasıyla 1,46 g/mL, 2,92 g/mL ve 5,84 g/mL (4 mL/kg·gün) konsantrasyonlarda sondayla Dahuocao kaynatma uygulandı. Normal ve model gruplara salin (4 mL/kg·gün) verildi. Tedaviler 4 hafta boyunca günde bir kez uygulandı.

2.4 Prostat histopatolojisi (H&E boyama)

Prostat dokuları sabitlendi, gömüldü ve kesitlere ayrıldı; kesitler hematoksilen-eozin ile boyandı ve asiner yapısal değişiklikleri ve inflamatuar hücre infiltrasyonunu değerlendirmek için ışık mikroskobu ile incelendi.

 

2.5 Serum oksidatif stres belirteçleri: SOD, MDA, GSH‑Px

Serum SOD, MDA ve GSH‑Px seviyeleri, ilgili kit talimatlarına göre sıkı bir şekilde ölçüldü.

 

2.6 Serum IL-1 ve IL-10'un ELISA tespiti

Serum IL‑1 ve IL‑10 konsantrasyonları ELISA kiti protokollerine göre sıkı bir şekilde ölçülmüştür.

 

2.7 Prostatta TLR‑4, IRAK1 ve pNF‑κB p65'in Western blot tespiti

Yaklaşık 50 mg prostat dokusu, sıvı nitrojen içerisinde ince bir toz halinde öğütüldü, bölüntülere ayrıldı ve RIPA tamponu içerisinde parçalandı. Proteinler elektroforez ile ayrıldı, aktarıldı, bloke edildi, birincil antikorlarla inkübe edildi, yıkandı, ikincil antikorlarla inkübe edildi, yıkandı ve görüntülendi. Protein ifadesi, hedef/temizlik bandı gri değerleri olarak ölçüldü.

 

2.8 İstatistiksel analiz

Veriler SPSS 22.0 kullanılarak analiz edildi. Varyansın homojenliğine sahip normal dağılımlı veriler ortalama ± SD olarak sunulur ve LSD‑t post hoc testleri ile tek yönlü ANOVA ile analiz edilir. Normal olmayan veya değişken varyanslı veriler M (QR) olarak sunulur ve parametrik olmayan testlerle analiz edilir. İki taraflı P < 0,05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Sonuçlar (netlik sağlamak için kısa ve öz bir şekilde yeniden ifade edilmiştir)

Normale karşı: Prostatik TLR‑4, IRAK1 ve pNF‑κB p65↑ (P < 0,01); serum SOD ve GSH‑Px↓ (P < 0,01); MDA ve IL‑1 ↑ (P < 0,01).

Karşılaştırma modeli: Anemone tomentosa (Dahuocao), TLR‑4/IRAK1/pNF‑κB p65'i azalttı (P < 0,01); SOD, GSH‑Px ve IL‑10'da artış (P < 0,01 veya P < 0,05); MDA ve IL-1'de azalma (P < 0,01 veya P < 0,05). Histoloji, bez hasarının ve inflamatuar infiltrasyonun hafiflediğini gösterdi.

Çözüm
IRAK1, EAP sıçanlarında kronik prostat iltihabı sırasında oksidatif stres ile IL-1 arasındaki çapraz konuşmada önemli bir düğümü temsil edebilir. Prostatit için bir TCM/Zhuang etnomedikal bitkisi olan Anemone tomentosa (Dahuocao), TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65 sinyal yolunun düzenlenmesi yoluyla oksidatif stresi ve IL‑1'i azaltarak kronik inflamasyonu engelleyebilir.

Yetki ve kaynak notları

Epidemiyoloji ve biyomedikal bağlam ulusal üroloji/androloji literatürüne dayanmaktadır [1-6].

Anemone tomentosa'nın (Dahuocao) kimliği, özellikleri ve TCM belirtileri, yetkili bir kaynak olan TCM Devlet İdaresi'nin Çin Materia Medica özetine [7] atıfta bulunmaktadır.

CP/CNP için Dahuocao'ya ilişkin klinik gözlem ve mekanik hayvan çalışmaları, hakemli Çin dergileri ve standartlaştırılmış deneysel kılavuzlar [8-12] tarafından desteklenmekte ve prostatit için geleneksel Çin tıbbı bitki kullanımının güvenilirliği artırılmaktadır.

 

Referanslar

[1] Mi H, Chen K, Mo ZN. Çin'de kronik prostatitin epidemiyolojik özellikleri. Chin J Androl. 2012;18(7):579‑582.
[2] Zheng XT, Chen SH, Yao WL, ve diğerleri. Kronik prostatitin etiyolojisi ve patogenezindeki gelişmeler. Modern Tanı ve Tedavi. 2019;30(11):1810‑1813.
[3] Paulis G. Prostatitte inflamatuar mekanizmalar ve oksidatif stres: antioksidan tedavinin olası rolü. Res Temsilcisi Urol. 2018;10:75‑87.
[4] Kang SW, Park JH, Seok H, ve diğerleri. Kronik bakteriyel olmayan prostatitin sıçan modelinde Kore Kırmızı Ginseng'in inflamatuar sitokinler ve apoptoz üzerindeki etkileri. Biomed Res Int. 2019;2019:2462561.
[5] Xue Y, Duan Y, Gong X ve diğerleri. Kronik prostatit/kronik pelvik ağrı sendromu için geleneksel Çin tıbbı: sistematik bir inceleme ve meta-analiz. Tıp (Baltimore). 2019;98(26):e16136.
[6] Sun ZX, Li PC. Kronik prostatit için TCM tanı ve tedavi düşüncesi. Liaoning J Tradit Chin Med. 2019;46(2):268‑269.
[7] Chinese Materia Medica Yayın Kurulu, TCM Devlet İdaresi. Çin Materia Medica. Şangay: Şanghay Bilim ve Teknoloji Basını; 1999:1768, 3166.
[8] Lu LX, Wu JY, Huang ZM, ve diğerleri. 60 kronik prostatit vakasında Dahuocao (Zhuang ilacı) ile retansiyon lavmanının klinik gözlemi. Hunan J Tradit Chin Med. 2019;35(6):55‑56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003‑7705.2019.06.024.
[9] Wang WJ, Shi H, Zhang J, ve diğerleri. Dahuocao, bakteriyel olmayan prostatit sıçan modelinde inflamatuar yanıtları inhibe eder. Modern İmmünoloji. 2021;41(6):504‑508. doi:10.35541/cjd.20201030.
[10] Lu LX, Shi H, Huang ZM, ve diğerleri. EAP sıçanlarının kronik inflamasyonunda prostatik corpora amilacea miRNA‑146a/TLR‑4/NF‑κB yolunun rolü ve Dahuocao müdahalesi. Chin Gen Pract. 2023;26(20):2518‑2524.
[11] Qian Y, Qian XQ, Gong DW, ve diğerleri. Sıçan prostatit modelinde prostat dokusunda resveratrolün sitokinlere müdahalesi. Çene J Androl. 2017;31(3):14‑18.
[12] TCM Deneysel Farmakoloji Profesyonel Komitesi, Çin Çin Tıbbı Derneği. Kronik prostatitli hayvan modellerinin hazırlanmasına yönelik taslak şartname. Chin J Exp Tradit Med Formülleri. 2018;24(19):10‑14.

Dizine ekleme için isteğe bağlı yazar anahtar sözcükleri (keşfedilebilirlik için)

Geleneksel Çin Tıbbı; Zhuang etnotıp; Dahuocao; Anemon tomentosa Maxim.; prostatit; kronik pelvik ağrı sendromu; TLR4; IRAK1; NF‑κB; oksidatif stres; antioksidan enzimler; sitokinler; ELISA; Batı lekesi; sıçan modeli; EAP; bitkisel antiinflamatuar; Prostatit için TCM otu.