İnsan Derisi İnsan Vücudunun En Büyük Organıdır ve Vücudu Çevresel Toksinlerden Korur

Lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

Soyut:Son zamanlarda, melaninin ciltteki yaşlanmayı geciktirici rolü ve melanin üretiminin inhibisyonu tespit edildiğinden, cilt homeostazını koruyabilen materyallerin geliştirilmesi dikkat çekmektedir. Bu çalışmada fuarther, Codonopsis pilosula özütünün (CPE) anti-melanojenik etkisini ve oksidatif stres altında H2O2'ye maruz kalan Melan-a melanositlerinde sitoprotektif etkisini araştırdık. İlk olarak, CPE tedavisi, MAPK/JNK'nın Melan'da fosforilasyonunun bir sonucu olarak mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü (MITF), tirozinaz ve tirozinazla ilişkili protein 2 (TRP 2) dahil olmak üzere melanogenez ile ilişkili proteinleri inhibe ederek melanin üretimini önemli ölçüde azalttı. -bir hücre. Daha sonra, CPE'nin oksidatif stres kaynaklı cilt hasarı ve moleküler mekanizması üzerindeki koruyucu etkilerini araştırmak için, melanositleri H2O2'ye maruz bırakarak oksidatif stresi indükledikten sonra CPE'nin etkisini belirledik. CPE, Bax proapoptotik proteinini kodlayan genin ekspresyonunu azaltarak hücreleri H2O2-indüklenen sitotoksisiteden korurken, B hücreli lenfoma (Bcl2) ailesini kodlayan genleri ve bir transkripsiyonel düzenleyici olan MITF'yi uyardı. melanosit farklılaşmasını teşvik eder. Ayrıca, sonuçlarımız CPE'nin Beclin-1 ve hafif zincir 3 (LC3)Ⅱ gibi otofaji ile ilgili proteinlerin üretimini arttırdığını göstermektedir; bu, 3-metil adenin (MA, bir otofaji inhibitörü) ön tedavisi ile büyük ölçüde tersine çevrildi. Toplu olarak, bulgularımız, CPE tedavisinin sadece normal melanositlerde anti-melanojenik bir etki değil, aynı zamanda otofaji ve MITF ekspresyonunu indükleyerek oksidatif strese maruz kalan melanositlerde de sitoprotektif bir etki gösterdiğini göstermektedir.cistanche penis boyu,Bu nedenle, CPE'nin melanositlerde hücre bakımı için güçlü bir aday olduğuna inanıyoruz.

Anahtar Kelimeler:Codonopsis pilosula; Melan-a hücreleri; melanogenez; otofaji; oksidatif stres

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

1. Giriş

İnsan derisi, insan vücudunun en büyük organıdır ve vücudu çevresel toksinlerden, alerjenlerden ve oksidatif stresten korur. Esas olarak melanositler tarafından üretilen melaninin cilt hastalıklarının önlenmesinde önemli bir rol oynadığı bilinmektedir ve insan vücudunun çeşitli dokularında bulunur [1,2]. Bununla birlikte, stres, ultraviyole (UV) radyasyonu ve yaşlanma nedeniyle reaktif oksijen türlerinin (ROS) aşırı üretimi ve birikimi, hiperpigmentasyon, melazma ve nihayetinde melanositlerin bozulması gibi birçok cilt bozukluğuna neden olur. Melanogenez tedavisi üzerine yapılan birkaç çalışma, mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörünün (MITF) ve tirozinaz aktivitesinin [3-5] ifadesinin düzenlenmesine odaklanmıştır. Ek olarak, son çalışmalar, cilt melanogenezinin, mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK) sinyali, protein kinaz A(PKA) ve siklik adenosin monofosfat (cAMP) aracılı yol dahil olmak üzere birkaç melanojenik sinyal yolu aracılığıyla aracılık ettiğini göstermiştir [6].

Cistanche yaşlanmayı geciktirebilir

Hücresel otofaji sistemi, hasarlı proteinleri parçalayan veya bir hücredeki işlevsiz organelleri izole eden ve daha sonra hücre homeostazını sürdürmek için bunları lizozomlarda parçalayan hücresel kendi kendine sindirim süreci olarak iyi bilinir [7,8]. Son çalışmalar, otofajinin melanositlerin normal işlevine dahil olduğunu ve melanin oluşturan transkripsiyon faktörü MITF'nin ekspresyonunun düzenlenmesinde rol oynadığını belirlemiştir. Bu nedenle, otofajiyi indükleyen ajanlar, UV ışınlarının ve lipid oksidasyonunun neden olduğu hasarı sınırlama ve melanositlerde ve keratinositlerde homeostazı sürdürme potansiyeline sahiptir [9-11].cistanche tozu,Bununla birlikte, melanositleri oksidatif strese karşı koruyan doğal otofajiyi indükleyen müstahzarların uygulanması hakkında çok az bilgi vardır.

Codonopsis pilosula, Campanula ailesine ait Codonopsis pilosula (Fr.) Dadı'nın köküdür. Kore, Gangwon-do dağlarında yetiştirilir veya yetiştirilir ve ayrıca Guanxi ve Shanxi bölgeleri gibi Çin'in kuzey ve batı bölgelerinde dağıtılır [12]. Halk hekimliğinde, enerji yenileme, bağışıklık sistemini güçlendirme, mide-bağırsak hastalıklarını düşürme ve kan basıncını düzenleme gibi aynı farmakolojik aktivitelere sahip olduğundan, yüzlerce yıldır ginseng'in yerine kullanılmaktadır, ancak daha düşük bir fiyata. Fitokimyasal araştırmalar, C. pilosula'nın büyük miktarlarda sakaroz, polisakkaritler, triterpenler, saponinler, fitosteroller, fenolik glikozitler, alkaloidler ve poliasetilenler içerdiğini göstermektedir [13]. Bunlar arasında, C. pilosula'nın başlıca asetileni olan lobetyolinin, NF-kB'yi aktive ettiği ve bağışıklık uyarıcı bir etkiye sahip olduğu bilinmektedir. C. pilosula, ovalbüminin neden olduğu alerjik reaksiyonları önemli ölçüde engellerken, bir su özütü plazma glikoz seviyesini düşürür ve bir bütanol özütü, sıçan beyni homojenatında serbest radikal süpürücü aktivite ve lipid peroksidasyonu üzerinde engelleyici bir etki gösterir[15-17] .

Daha önce, C.pildsula'nın antioksidan aktivitesinin, kullanılan ekstraksiyon çözücüsüne bağlı olarak polifenol içeriğindeki farklılıklardan dolayı değiştiği bulunmuştu [18]. Bu nedenle, normal koşullar altında C. pilosula özütünün (CPE) mekanik sinyal yolakları yoluyla melanojenik inhibitör etkisini ve ayrıca Melan-a melanositlerinde H2O2-'nun neden olduğu oksidatif strese karşı sitoprotektif etkisini araştırdık.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1.Reaktifler

RPMI 1640 ve fetal sığır serumu (FBS), Welgene'den (Daegu, Kore) satın alındı.cistanche salsa özüPenisilin-streptomisin, GibcoBRL'den (Eggenstein, Almanya) satın alındı. Phorbol 12-miristat 13-asetat (TPA), TOCRIS'ten (Bristol, İngiltere) satın alındı. Hidrojen peroksit (HaO2),3-(4,5-dimetiltiazol{{7} }il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT), 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)ve 3-MA, Sigma'dan satın alındı -Aldrich (St Louis, MO, ABD). Diğer tüm kimyasallar ve reaktifler analitik derecedeydi.

2.2.Codonopsis Pilosula Ekstraktının Hazırlanması

C.pilosula kökü (CP) basitçe doğranmış ve 100 g CP 1 Lof yüzde 50 etanol (a/h) içine daldırılmıştır; daha sonra 30 derecede ultrasonik dalgalar kullanılarak üç kez ekstrakte edilmiştir. Her bir ekstrakt, süpernatanı toplamak için santrifüj edildikten sonra, süpernatan konsantre edildi ve C.pilosula ekstraktını (CPE) hazırlamak için dondurularak kurutuldu.

2.3. Hücre Kültürü ve CPE Stok Hazırlanması

Melanosit Melan-a hücreleri, yüzde 10 FBS, penisilin (100 U/mL), streptomisin (100 U/mL) ve 200 nM forbol 12-miristat 13- ile desteklenmiş RPMI 1640'ta büyütüldü ve muhafaza edildi. asetat (TPA) ve yüzde 5 CO2 inkübatöründe 37 derecede muhafaza edildi. Altı oyuklu bir plakada oyuk başına 3 x 105 hücre kültürlendikten sonra, Melan-a hücreleri, ortamın rengi siyaha dönene kadar 48 saat boyunca bir inkübatöre yerleştirildi. CPE'nin stok çözeltileri (100mg/mL) steril su içinde çözüldü ve -20 derecede saklandı.

2.4.Hücre Canlılığının Ölçülmesi

Melan-a hücrelerinde CPE'nin hücre canlılığı, bir MT kolorimetrik tahlil ve akış sitometrisi kullanılarak belirlendi. Hücreler, 96-kuyulu plakalarda yüzde 80 birleşime ulaşana kadar muhafaza edildi ve ardından 24 saat boyunca CPE ve/veya 0,5 mMH2O2 ile işlendi. 10 μL MTT solüsyonu （5 mg/mL） içeren bir hücre ortamı eklendi ve hücreler 4 saat daha inkübe edildi. Hücrelerin inkübasyonundan sonra, çözünmeyen formazan kristalleri, 100 uL dimetil sülfoksit içinde çözündürüldü. 540 nm'de absorbans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak spektrofotometri ile ölçülmüştür. Ölü hücreler, üreticinin protokolüne göre bir PI/Annexin V hücre ölümü saptama kiti (EMD Millipore Corporation, Billerica, MA, ABD) ile belirlendi. Kısaca, hücreler yıkandı ve FITC-Annexin V ve PI içeren karanlıkta oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edildi. Daha sonra ölü hücreler MuselM hücre analizörü ile analiz edildi.

2.5.In Vitro Melanin Tahmini

Altı oyuklu bir plakada yaklaşık 2x105 hücre/kuyu büyütüldü. Daha önce tarif edildiği gibi CPE ve/veya 0.5 mM H-Op ile muameleden sonra [19], PBS ile yıkanmış hücreler hasat edildi, yüzde 1 Triton X-100 içeren 1 x PBS içinde parçalandı ve 13°C'de 4 derecede santrifüjlendi, 15 dakika için 000 rpm. Hücresel melanin içeriği, 1 N NaOH kullanılarak çözündürüldü. 405 nm'de absorbansı ölçerek melanini ölçmek için bir ELISA plaka okuyucusu kullanıldı. Veriler üç deneyden elde edildi ve melanin içeriği hesaplandı ve kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında kat değişimi olarak gösterildi. 2.6.Protein İzolasyonu ve Western Blot Testi

Protein örnekleri, önceki çalışmamızda [20] açıklandığı gibi çıkarıldı. Daha sonra hücre lizatının protein konsantrasyonu, bir BCA protein tahlil kiti (Thermo Scientific, Waltham, MA, ABD) kullanılarak ölçüldü. Denatüre hücre lizatının eşdeğer miktarları (numune başına 30 ug hücre lizatı) yüzde 10 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile ayrıldı ve bir nitroselüloz zara aktarıldı. Zar, gece boyunca 4 derecede yüzde 0.05 Tween 20(PBST) içeren PBS içinde yüzde 5 yağsız süt tozu içinde seyreltilmiş birincil antikor ile inkübe edildi.

Birincil antikor inkübasyonunun ardından, membranlar yıkandı ve oda sıcaklığında 1 saat süreyle PBST içinde yüzde 5 yağsız süt içinde seyreltilmiş HRP-konjuge ikincil antikor içinde inkübe edildi. Protein ekspresyonu, geliştirilmiş kemilüminesans (ECL) algılama sistemi (AI680, GE Healthcare, Uppsala, İsveç) kullanılarak analiz edildi.

2.7.DCFH-DA Boyama ile Hücre İçi ROS Tahmini

Hoo ile muamele edilmiş Melan-a hücrelerindeki hücresel ROS seviyeleri, DCFH-DA floresan mikroskopi yöntemiyle tahmin edildi [21]. Hücre içi DCF floresan seviyeleri, üretilen hücre içi ROS ile orantılıdır. İlk olarak, 2 x 105 hücre/kuyu, 24 saat boyunca bireysel CPE ve/veya H-O2 konsantrasyonları ile işlendi, ardından reaksiyonun bitiminden 2 saat önce DCFH2-DA ilave edildi. Veriler, üç veya daha fazla bağımsız deneyden toplandı. 2.8.İstatistiksel İşleme

Tüm deneysel sonuçlar, üç biyolojik kopyanın ortalama ± standart sapmaları (SD'ler) olarak sunulur.cistanche sapıÇoklu ortalama değerler arasındaki istatistiksel anlamlılık, tek yönlü varyans analizi (ANOVA), ardından SPSS 18 kullanılarak Duncan'ın çoklu karşılaştırma testi ile değerlendirildi.0(SPSS Inc., Chicago, IL, ABD), efsanelerde belirtildiği gibi. bir p-değeri<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

3. Sonuçlar

3.1.Melanositlerde Melanogenezin CPE Tarafından Düşürülmesi

Melanositler, UV ışınlaması gibi dış uyaranlara yanıt olarak melanini sentezler. A-melanosit uyarıcı hormon (-MSH), kök hücre faktörü (SCF) ve endotelin-1(ET-1) gibi ana faktörler melanositlerden salgılanır ve MITF ekspresyonunu artırarak melanogenezi teşvik eder. [22,23]. İlk olarak, CPE tedavisinin melanin üretimini ve melanogenez ile ilgili proteinleri inhibe edip etmediğini inceledik.

100,200 ve 300 ug/mL'de CPE tedavisi, negatif kontrol ile karşılaştırıldığında melanin üretimini önemli ölçüde azalttı. Özellikle, 300 ug/mL CPE ile tedavi, arbutin tedavisi ile indüklenene benzer bir azalma ile sonuçlandı (Şekil 1A, B). Ayrıca, melanogenez proteinleri tirozinaz, TRP-1, TRP{{6'yı araştırdık. }} ve Western blot ile MITF.cistanche tubulosa faydaları ve yan etkileri300 ug/mL konsantrasyonlarda CPE ile tedavi, MITF, TRP-2 ve tirozinaz proteinlerinin seviyelerini önemli ölçüde azalttı (Şekil 1C). CPE'nin MITF ile ilgili proteinlerin ekspresyonunu inhibe ettiği, melanin oluşumunu inhibe ettiği doğrulandığından, CPE'nin MAPK sinyal yolunu etkileyip etkilemediğini de inceledik. CPE, MAPK fosforilasyonunu doza bağlı bir şekilde arttırdı, spesifik olarak JNK fosforilasyonunu indükledi (Şekil 1D). Bu sonuçlar, CPE tarafından melanogenez inhibisyonunun, JNK/MAPK fosforilasyonunun indüklenmesiyle MITF ve tirozinaz ekspresyonunun aşağı regülasyonundan kaynaklandığını göstermektedir.

3.2.CPE'nin Melanositlerde H2O2-İndüklenmiş Hücre Ölümü Üzerindeki Etkisi

Keratinositler ve melanositler gibi cilt hücreleri, normal bir durumu korumak için hidrojen peroksit (HzOz) ve süperoksit anyonu gibi ROS'a duyarlı şekilde tepki verir. Bununla birlikte, aşırı hücresel ROS nedeniyle oksidan-antioksidan durumundaki bir dengesizlik, hasarlı proteinlerin veya organellerin birikmesine ve sonunda apoptotik hücre ölümüne yol açabilir [24,25]. Son zamanlarda, melaninin, cildin dış ortamına bağlı olarak melanin oluşumunu uyararak cilt yaşlanmasını desteklediği ve hücre içi melanin içeriğinin tutulmasıyla cilt sağlığının korunduğu bildirilmiştir [26]. Bu nedenle, H2O2 işlemi ile oksidatif strese maruz kalan hücreler üzerinde CPE ekstraktının etkisini araştırdık. HzO2- ile tedavi edilen hücreler, tedavi edilmeyen hücrelere kıyasla hücre canlılığında yüzde 32,8'lik bir düşüş gösterdi. Bununla birlikte, CPE tedavisi, H-O2 tedavisi altında konsantrasyona bağlı bir şekilde hücre canlılığının inhibisyonunu azaltmıştır. Özellikle, 300 ug/mL'deki CPE, hücre canlılığını yüzde 91.9'a geri getirdi (Şekil 2A). Ayrıca, CPE-ve/veya H2O2- ile tedavi edilen hücrelerin apoptotik ölümü, Annexin V- ile çift boyama ile tespit edildi. FITC/PI, ardından akış sitometrik analizi. H2O2 tedavisini takiben, apoptotik hücrelerin yüzdesi, tedavi edilmeyen hücrelerdeki yüzde 14,8'e kıyasla yüzde 34,5'e yükseldi. Bununla birlikte, CPE tedavisi, Annexin V ile boyanmış hücrelerin yüzdesi yüzde 22,2 olmak üzere H2O2-indüklenen apoptotik ölümü önemli ölçüde inhibe etti (Şekil 2B). Bu, ROS içeriğiyle aynı modeli gösterdiğinden, bu sonuçlar, CPE'nin H2O2-indüklenen ROS'a karşı koruyarak hücre ölümünü engelleyerek hücre canlılığını sürdürdüğünü gösterir (Şekil 2C).

3.3.CPE'nin Melanositlerde Hzo2-İndüklenmiş Hücre Ölümü Üzerindeki Etkisi

Daha önce teyit edildiği gibi, CPE, HzO2 tedavisini takiben apoptozdaki artışı engelleyerek hücre canlılığını korur. Bu nedenle, daha sonra CPE'nin hücre ölümünde yer alan proteinlerin ve H2O2 varlığında melanin üretimini düzenleyen MITF proteininin ekspresyonu üzerindeki etkisini araştırdık. Şekil 3'te gösterildiği gibi, H2O2 ile tedavi edilen hücrelerde MITF ekspresyonu, CPE ile tedavi edilen hücrelerde biraz azaldı ve MITF ekspresyonu, tedavi edilmeyen hücrelerdeki ile hemen hemen aynıydı. Ek olarak, H2O2, apoptozu indükleyen Bax proteininin [27,28] ekspresyonunu arttırdı, ancak CPE ile tedavi edilen hücrelerde konsantrasyona bağlı bir şekilde Bax ekspresyonunu azalttı. Buna karşılık, H202, hücrenin hayatta kalmasını destekleyen [28,29] Bcl2 proteininin ekspresyonunu azalttı, ancak Bel2'nin ekspresyonu, konsantrasyona bağlı bir şekilde CPE tedavisi ile arttırıldı. Bax/Bcl2 oranını belirlemek için bu iki proteinin ekspresyonunu hesapladığımızda da aynı eğilim gözlendi. Bu nedenle, H2O2-uyarılmış oksidatif stres altında, hücre ölümünün uyarılmasıyla MITF ifadesi azalırken, CPE, H2Oz kaynaklı hücre ölümünü önleyerek ve MITF ifadesini sürdürerek güçlü bir koruyucu etki sergiledi.

3.4. CPE'nin Oksidatif Strese Bağlı Melanositlerde Otofaji Aktivasyonu Üzerindeki Etkisi

Son çalışmalar, otofajinin ve düzenleyicisinin, insan hücrelerinde ROS ile indüklenen oksidatif strese karşı antioksidatif yanıtta çok önemli bir rol oynadığını ortaya koymuştur [26,30]. Feng ve diğerleri[31] Apocymum venetum yaprağı ekstresinin, ROS ile indüklenen otofaji aktivasyonunu azaltarak yaralı nöronları H2O2-indüklenen apoptoza karşı koruduğunu gösterdi. Otofaji modülasyonu ve anti-melanogenez arasındaki ilişki kurulduğundan, CPE'nin H-Oz kaynaklı oksidatif strese karşı koruyucu etkisinde otofajinin rolü Melan-a hücrelerinde araştırıldı. Bir otofagozom proteini olan LC3 seviyeleri, otofajinin bir göstergesi olarak kullanıldı. Western blot verileri, CPE'nin, ekspresyonu H2O2 tedavisi ile azaltılan pro-otofajik LC3-Ⅱ ve Beclin proteinlerinin ekspresyonunu önemli ölçüde yukarı regüle ettiğini gösterdi. Bu, CPE'nin otofaji aktivasyon sırası hücre içi oksidatif stres yoluyla sitoprotektif bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir (Şekil 4A). Daha sonra, HzOz ile muamele edilmiş Melan-a hücrelerinde CPE'nin sitoprotektif etkisi ile otofajisi arasındaki iç ilişki ayrıca güçlü bir otofajik inhibitör,3-MA kullanılarak analiz edildi. Önceki verilerle karşılaştırıldığında, 3-MA ve CPE ile ön işleme tabi tutulan ve H2O2 ile uyarılan hücreler, azalmış LC3-II ekspresyon seviyeleri gösterdi (Şekil 4B). Genel olarak, bu veriler, otofajinin inhibe edilmesinin, HzO2- ile tedavi edilen hücrelerde CPE'nin sitoprotektif etkinliğini olumsuz yönde etkilediğini ima eder, bu da otofajinin CPE'nin sitoprotektif etkileri için gerekli olduğunu gösterir.

4. Tartışma

Polifenol içeriğinin yanı sıra en yüksek antioksidan aktivite ile sonuçlanan optimal ekstraksiyon yöntemini daha önce oluşturmuştuk [18]. Bu çalışmada, yüksek verimli ultrasonik ekstraksiyon yöntemini uyguladık ve ekstraktın oksidatif stres koşulları altında otofajiyi aktive ederek ve ayrıca Melan-a hücrelerinde melanogenezi inhibe ederek sitoprotektif bir etki gösterdiğini bulduk.

İlk olarak, MITF, tirozinaz ve TRP-2 gibi melanogenez ile ilgili genlerin ekspresyonunu azaltarak CPE.CPE'nin melanogenezi aşağı regüle ettiği anti-melanojenik etkisini daha da araştırdık. Birkaç çalışma, enzim ekspresyonu ile ilgili melanogenezin biyosentetik mekanizmalarına, mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK), protein kinaz A (PKA) ve PI3K/Akt [32] dahil olmak üzere çeşitli sinyal yollarının aracılık ettiğini göstermiştir. Bunlar arasında, MAPK sinyal yolunun aktivasyonu, insan primer melanositlerinde protein stabilitesi seviyesinde ve ayrıca transkripsiyonel seviyede MITF'yi baskılamıştır [33,34]. MAPK'nın fosforilasyonu ve hücre dışı yanıt veren kinazın (ERK), c-Jun N-terminal kinazın (JNK) ve p38'in sinyal basamakları da melanin üretimini düzenler. Bunların arasında, JNK aktivatörü, CREB tarafından düzenlenen transkripsiyon koaktivatörü 3(CRTC3)'e bağlı MITF ekspresyonunun fosfo-inhibisyonu yoluyla melanogenezi baskılar [35,36]. Sonuçlarımız, MAPK'nın, özellikle JNK'nin fosforilasyonunun, kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında, CPE tedavisini takiben etkin bir şekilde arttığını göstermektedir. Bu bulgular, Melan-a melanositlerinde CPE ile indüklenen depigmentasyonun MITF/JNK tarafından düzenlenen sinyal yollarıyla meydana gelebileceğini düşündürmektedir.

Melanositler, melanin pigmentini üretir ve onu, pigmentlerin cildi hava kirleticiler, kimyasal ürünler ve UV hasarı [37-39] gibi oksidatif çevresel stres faktörlerinden korumaya yardımcı olduğu keratinositlere aktarır. MITF, melanosit gelişimini ve farklılaşmasını destekleyen ve aynı zamanda melanogenezi düzenleyen anahtar genlerden sorumlu ana transkripsiyonel düzenleyicilerden biridir. Ayrıca, MITF, proliferasyon (örn., CDK2) ve apoptoz (örn., Bcl2)[40-42] ile ilgili proteinleri kodlayanlar da dahil olmak üzere hücre homeostazını koruyan belirli genlerin ekspresyonunu düzenler. Stein-Grimson ve arkadaşları[43] MITF mutant farelerinin, melanosit kaybının yanı sıra hatalı osteoklastlar ve mast hücrelerinin bir sonucu olarak işitme kaybı ve pigment bozukluklarından etkilendiğini belirlediler. Bu, MITF'nin bu hücre tiplerinin gelişiminde önemli bir rol oynadığını göstermektedir.

CPE, anti-aging ve anti-alerjik etkileri nedeniyle gastrointestinal ve alerjik hastalıkların tedavisinde kullanılan bitkisel ilaçların bir türevidir[15,44]. Bununla birlikte, CPE'nin melanositleri oksidatif stresten koruyup koruyamayacağı bilinmemektedir. Oksidatif strese yanıt olarak CPE'nin melanosit sağkalımı üzerindeki etkisini tahmin etmek için önce H-O2'ye maruz kalan melanositlerde hücre ölümünü gözlemledik. 0.5 mM H-O2 ile 24 saat tedaviyi takiben, hücre canlılığı, tedavi edilmeyen hücrelere kıyasla azaldı. Bununla birlikte, CPE ile muamele edilmiş hücrelerin canlılığı, ROS içeriği azaltılarak restore edilmiştir; daha sonra H2O2- ile tedavi edilen hücrelerin aksine Bax/Bcl2 oranı ve MITF ifadesi arttı.

Otofaji, lizozomların hasarının onların bozulmasıyla sonuçlandığı ana hücre içi bozunma sistemidir. Mizushima et al. [45] açlık, iltihaplanma veya oksidatif stres koşulları altında, otofajik sürecin hücrelerdeki hasarlı proteinlerin ve organellerin bozulmasını düzenleyebileceğini, böylece hücresel yenilenme ve homeostazın sağlanabileceğini gösterdi. Mikrotübül ilişkili protein 1 hafif zincir 3 (LC3) ve Beclin-1 memeli otofajisinde önemli roller oynar. LC3, sitozolik form (LC3 I) ve büyüyen otofagozomun hem iç hem de dış zarlarına yerleştirilen lipid fosfatidiletanolamin-konjuge form (LC3 III) olmak üzere iki formda bulunur[46,47]Zhang ve ark.[ 48] melanositlerdeki otofajinin durumunu analiz etmek için bir biyokimyasal belirteç olarak LC3Ito LC3II'nin dönüşümünü kullandı. Daha ileri araştırmalar, LC3'ün nihai otofagozom oluşumunun bir belirteci olduğunu, oysa Beclin-1'in otofajiyi aktive ederek otofagozom oluşumunun ilk adımında yer aldığını göstermiştir [49]. Yapısal otofajik aktivite, melanositlerde oksidatif hasarın önlenmesinde kilit bir rol oynar, ancak oksidatif stres altında melanositlerde otofajiyi düzenleyen moleküler mekanizmalar hakkında az sayıda çalışma yapılmıştır.

Sonuç olarak, oksidatif strese maruz kalan melanositlerde hücre sağkalımı için CPE aracılı otofajinin etkisini araştırdık. Sonuçlarımız, CPE tedavisinden sonra, Beclin-1 ifadesinin artması ve LC3I'nin LC3 II'ye dönüşümünün indüklenmesi yoluyla otofajinin etkinleştirildiğini göstermektedir. Bu, CPE'nin oksidatif strese maruz kalan melanositlerde otofaji aktivasyonu yoluyla sitoprotektif bir etki uyguladığını göstermektedir.

Sonuç olarak, bu çalışma, CPE tedavisinin sadece normal melanositlerde MITF/JNK yolu aracılığıyla bir anti-melanojenik etkiye sahip olmadığını, aynı zamanda HzOg'nin neden olduğu oksidatif stres altında, hücrenin hayatta kalmasını sürdürdüğünü ve MITF yoluyla sitoproteksiyon uyguladığını ve bunun da sürekli aktivasyon ile sonuçlandığını göstermiştir. Melan-a hücrelerinde otofaji.

Bu makale Cosmetics 2021, 8, 67'den alınmıştır. https://doi.org/10.3390/cosmetics8030067 https://www.mdpi.com/journal/cosmetics