Kalsiyum, florür kaynaklı böbrek hasarını nasıl tedavi eder?

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Anahtar Kelimeler: Kalsiyum, Böbrek, apoptoz

ÖZ

Uzun süreli aşırı florür (F) alımı kemikli ve kemiksiz hasara neden olabilir. buböbrekvücudun ana florür atılım organıdır. Bu çalışma, diyette olup olmadığını araştırmayı amaçladı.kalsiyumtakviyesi hafifletebilirböbrekFlorozun neden olduğu hasar ve etkilerini daha fazla araştırmak içinKalsiyumhafifletme mekanizması hakkındaböbrekhücreapoptozF. tarafından tetiklenen histopatolojik yapıyı değerlendirdik,böbrekfonksiyon göstergeleri ve ölüm reseptörünün aracılık ettiği gen ve protein ekspresyon seviyeleriapoptozsodyum florür (NaF) ve/veya ile tedavi edilen Sprague Dawley (SD) sıçanlarındakalsiyum120 gün boyunca karbonat (CaCO3). Sonuçlar, 100 mg/L NaF'nin indüklendiğini gösterdi.böbrekhistopatolojik yaralanma veapoptoz, Kreatinin (CRE), ürik asit (UA), kan üre azotu (BUN), potasyum (K), fosfor (P) ve F konsantrasyonlarını arttırdı (p < {{0}}.05)="" ,="" ve="" serum="" magnezyum="" (mg)="" seviyesini="" azaltın="" (p="">< 0.05).="" ayrıca,="" naf,="" fas="" hücre="" yüzeyi="" ölüm="" reseptörünün="" (fas),="" tümör="" nekroz="" faktörü="" (tnf),="" tnf="" ile="" ilişkili="" mrna="" ve="" protein="" ekspresyon="" seviyelerini="">apoptoz-indükleyici ligand (TRAIL), Kaspaz 8, Kaspaz 3 ve poli ADP-riboz polimeraz (PARP) (p < 0.01),="" bu="" da="" nihayet="" ölüm="" reseptörü="" yolunu="" aktive="" etti.="">Kalsiyumtakviyesi, F'nin neden olduğu CRE, BUN, UA, F ve P seviyelerinin düşüşünü tersine çevirdi, histopatolojik hasarı hafifletti veapoptozve ölüm reseptörü yolu ile ilgili belirteçlerin gen ve protein ekspresyon seviyelerini azalttı. Sonuç olarak yüzde 1KalsiyumF kaynaklı hafifletirböbrekapoptozFAS/FASL, TNFR/TNF, DR5/TRAIL sinyal yolları aracılığıyla.

buböbrekvücudun ana florür atılım organıdır,cistanchekoruyabilirböbrekVe geliştirmekböbrekişlev.

giriiş

Flor toprakta, suda ve yiyeceklerde yaygın olarak bulunur. Ancak bazı doğal faktörler (mineral ve kayaçların ayrışması,kalsiyumve magnezyum tuzları, yeraltı suyunun sızması vb.) ve insan faaliyetleri (endüstriyel atık su, zirai kimyasallar, ev ürünleri vb.) çevrede flor kirliliğine neden olur (Daiwile ve diğerleri, 2019). Şu anda, florüre (F) maruz kalmanın en büyük faktörü içme suyudur ve Dünya Sağlık Örgütü tarafından içme suyunda önerilen F konsantrasyonu 1,5 mg/L'den azdır (İçme Suyu Kalitesi Rehberi, 2017). Epidemiyolojik kanıtlar, bu konsantrasyondan daha yüksek değerlerin diş florozu riskini artırdığını ve artan konsantrasyonun iskelet florozu riskini artıracağını göstermektedir (İçme Suyu Kalitesi Rehberi, 2017; Ulusal Araştırma Konseyi, 2006). Yüksek florür konsantrasyonlarına uzun süreli maruz kalma, vücudun solunum yoluyla flor emilimini artırabilir.

ve sindirim yolları. Aşırı F alımı vücudun kemikli ve kemiksiz organlarına zarar verebilir. Kemik dışındaki yumuşak doku hasarına genellikle kemik dışı hasar denir. Şu anda, F'nin neden olduğu kemik dışı doku hasarının sindirim sistemi, karaciğer,böbrek, beyin vb. (Jha ve diğerleri, 2011; Perumal ve diğerleri, 2013).

buböbrekVücudun ana boşaltım organı, vücuttaki toksik maddelerin ve ekzojen toksinlerin metabolizmasından sorumludur. Çalışmalar, vücut tarafından alınan florürün yaklaşık yüzde 50-80'inin florür tarafından filtrelendiğini ve geri emildiğini bildirmiştir.böbreklerve kalan flor diğer doku ve organlarda birikir (Chen ve diğerleri, 2013; Dharmaratne, 2019). Birçok literatür, 50 ve 100 mg/LF maruziyetinin böbrek kapsül boşluğunun genişlemesine, atrofiye yol açabileceğini göstermiştir.böbrektübüller, papiller hücrelerin düzensiz yerleşimi, lümenin daralması,apoptoznın-ninböbrekhücreler ve kreatinin (CRE), ürik asit (UA) gibi biyokimyasal fonksiyonların bozulması,kalsiyum(Ca) ve fosfor (P) (Song ve diğerleri, 2014; HW Wang ve diğerleri, 2020; Wei ve diğerleri, 2018a).

apoptoz, endojen olarak bölünmüş genler tarafından kontrol edilen bir tür hücre ölümüapoptozve dışsalapoptoz. Son raporlar gösteriyor kiapoptozyüksek F'nin neden olduğu temel olarak mitokondri aracılı, endoplazmik retikulum stres aracılı ve ölüm reseptörü aracılı yolları içerir (Wei ve diğerleri, 2018a). Grubumuzdaki önceki deneyler, NaF'nin kemik ve karaciğeri indüklediğine dikkat çekti.apoptozhücre içi endoplazmik retikulum (ER) yolu ve mitokondriyal yol yoluyla (Li ve diğerleri, 2021; J. Wang ve diğerleri, 2020; Wang ve diğerleri, 2019). Ek olarak, çalışmalar mitokondriyal yolun NaF ile indüklenenapoptozfareninböbrekler(Wei ve diğerleri, 2018b). Bununla birlikte, F ile indüklenen hastalarda ölüm reseptörü aracılı yolak hakkında sistematik bir çalışma yoktur.böbrekapoptoz. Ölüm reseptörü yolu, ekzojenin her aşamasına hakimdir.apoptozFas hücre yüzeyi ölüm reseptörü (FAS) yolu, tümör nekroz faktörü (TNF) yolu ve TNF ile ilgili dahil olmak üzereapoptoz-indükleyici ligand (TRAIL) yolu (Grunert ve diğerleri, 2012; Lu ve diğerleri, 2017; Wang ve Su, 2018). FAS yolu, aracılık eden ilkel sinyal iletim sistemidir.apoptoz. FAS, bir membran reseptörünün özelliklerine sahiptir ve FAS ligandı (FAS-L) ile bağlandıktan sonra bir trimer oluşturur. Daha sonra trimerin spesifik alanı, ölüme bağlı bir sinyal kompleksi (DISC) oluşturmak için karşılık gelen konneksin molekülü FAS ile ilişkili ölüm alanı proteininin (FADD) ölüm alanı (DD) ile bağlanır (Wang ve Su, 2018). Aşağıdaki biyolojik sinyal iletim sürecinde FADD, Caspase 8 ve Caspase ailesini aynı anda aktive edebilir ve sonundaapoptozCaspase 3 ve poli ADP-riboz polimeraz (PARP) etkisinin katılımıyla (Kischkel ve diğerleri, 2000; Meynier ve Rieux-Laucat, 2019). Son çalışmalar, FAS yolunun aracılık ettiğini göstermiştir.apoptozT hücrelerinde ve sırasındaböbreksisplatinin neden olduğu başarısızlık (Djiadeu ve diğerleri, 2017; Linkermann ve diğerleri, 2011). Ek olarak, bir çalışma NaF'nin indüklediğini de bildirmiştir.apoptozfarelerde FAS yolu yoluyla (Sun ve diğerleri, 2017). TRAIL, TNF süper ailesinde tanınan bir sitokindir. Homolog agonist reseptörlerine, yani ölüm reseptörlerine (DR4 ve DR5) bağlanır. Hücresel bölgesinde bir DD var. DD, uyarlanabilir protein FADD'nin alınması için gereklidir. FADD sırayla Kaspazların sitoplazmaya salınmasını indükler, aktive edilmiş Kaspaz 3 PARP'yi parçalar ve DNA onarım potansiyelini inhibe eder, sonuç olarakapoptoz(Bodmer ve diğerleri, 2000; Micheau, 2018). TRAIL/DR5 yolunun NaF ile indüklenenapoptozfarelerde (Song ve diğerleri, 2021). Osteoprotegerin (OPG), bir transmembran alanı olmayan serbest çözünür bir reseptördür. TRAIL aracılı dizginleyebilirapoptozTRAIL ve diğer ölüm reseptörlerinin bağlanmasını engelleyerek (Duiker ve diğerleri, 2006; Kiraz ve diğerleri, 2016; Micheau, 2018). TNF ve TNF reseptörünün (TNF-R1) bağlanması, DD'si aracılığıyla TNFR ile ilişkili ölüm alanı (TRADD) proteininin alımını aktive edebilir. Bundan sonra, TRADD, FADD ile etkileşime girerek, proteolitik enzimler tarafından aktif Kaspaz 8'e ayrılan pro-Kaspaz 8'in alınmasına yol açar. Kaspaz 8 daha sonra hücreden sorumlu olan Kaspaz 3'ü aktive eder.apoptoz(Kiraz vd., 2016; Sedger ve McDermott, 2014). NaF'nin hepatositleri indüklediği bildirilmektedir.apoptozfarelerde TNF-R1 sinyal yolu yoluyla (Lu ve diğerleri, 2017)

Kalsiyumkemiklerin ve dişlerin bileşiminde çeşitli roller oynar ve ayrıca sinir iletimini ve materyal salınımını kontrol edebilir (Cao ve ark., 2016), sistemik çalışmalara katılabilir.kalsiyumhomeostaz (Carmeliet ve diğerleri, 2003; Yang ve diğerleri, 2016), membran geçirgenliğini değiştirir (Lappe ve diğerleri, 2017), çeşitli enzim ve hormonların salgılanmasını aktive eder (Kim ve diğerleri, 2012), vb. Daha önceki birçok çalışma, F ve Ca'nın biyolojide antagonistik bir etkiye sahip olduğunu bulmuştur (Dure-Smith ve diğerleri, 1996; Nobrega ve diğerleri, 2019). F vücut tarafından emildiğinde, çözünmeyen CaF2 çökeltileri oluşturmak için kana girer. Diyetteki Ca miktarı yetersizse ve kandaki Ca gerekli seviyeye ulaşmazsa, hipokalsemi ve osteoliz gibi patolojik değişiklikler olacaktır, bu nedenle diyette Ca takviyesi florozun önlenmesinde ve iyileştirilmesinde önemli bir rol oynar (Dure-Smith et al. diğerleri, 1996; Li ve diğerleri, 2021; Yang ve diğerleri, 2021). Grubumuz diyetin doğru olduğunu onayladı.kalsiyumhafifletebilirapoptozPI3K-AKT sinyal yolu, ER yolu ve mitokondriyal yol yoluyla kemik ve karaciğerin kontrolü (Li ve diğerleri, 2021; J. Wang ve diğerleri, 2020; Wang ve diğerleri, 2019; Yang ve diğerleri, 2021). olup olmadığını daha fazla kanıtlamak içinKalsiyumölüm reseptörü aracılı aracılığıyla F'nin nefrotoksisitesini hafifletirapoptozyol, yüksek florür diyeti bir sıçan modeli kurdukkalsiyumve değerlendirdiböbrekyaralanma indeksi, dereceapoptozve ölüm reseptörünün aracılık ettiği hastalıkta belirteç gen ve protein ekspresyonundaki değişikliklerapoptozpatika.

Malzemeler ve yöntemler

Kimyasallar ve aletler

Damıtılmış su, Heal Force su arıtma Sistemi (Şangay, Çin) tarafından hazırlandı. Radyo immünopresipitasyon deneyi (RIPA) liziz tamponu ve Sodyum florür (NaF), Sigma-Aldrich (Şangay, Çin) tarafından sağlandı. Yüzde 10 formalin, Glisin, sodyum dodesil sülfat (SDS), TRIS, Fenilmetilsülfonil florür (PMSF), CaCO3, nitroselüloz (NC) membran, Bisinkoninik Asit (BCA) Kiti ve hematoksilin-eozin (H&E) boyama kiti Solarbio Technology Co'dan temin edilmiştir. ., Ltd. (Pekin, Çin). Trizol reaktifi Takara Biological Engineering Company'den (Dalian, Çin) satın alındı. CRE, UA, kan üre azotu (BUN), magnezyum (Mg), P ve potasyum (K) kitleri Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü'nden (Nanjing, Çin) satın alındı. yerindeapoptozsaptama kiti, FAS Tavşan Poliklonal antikoru (BA0484) ve FAS-L Tavşan Poliklonal antikoru (PB0042), Boster Biotechnology'den (Wuhan, Çin) satın alındı. -aktin Tavşan Poliklonal antikoru (20536-1-AP), FADD Tavşan Poliklonal antikoru (14906-1-AP), Kaspaz 8 Tavşan Poliklonal antikoru (13423-1-AP), Kaspaz 3 Tavşan Poliklonal antikoru ({{9 }}AP) ve HRPkonjuge Affinipure Keçi Anti-Rabbit IgG(H plus L) (SA00001–2) Proteintech Group'tan (Wuhan, Çin) elde edilmiştir. TRAL Tavşan Poliklonal Antikoru (bs-1214R), TNF alpha Tavşan Poliklonal antikoru (bs2081R), PARP Tavşan Poliklonal Antikoru (bs-55164R) Bioss'tan (Pekin, Çin) satın alınmıştır. Elektrokimyasal ışıldama (ECL) ve 3,3'-diaminobenzidin (DAB), KeyGen Biotech'ten (Jiangsu, Çin) satın alındı. PrimeScript® RT Master Mix ve SYBR® Premix Ex Taq™ II Kiti Promega Biotechnology (Pekin, Çin) tarafından sağlandı.

Hayvanlar ve tedaviler

Shanxi Tıp Üniversitesi (Shanxi, Çin) Deney Hayvanları Merkezinden kırk sağlıklı {{0}}haftalık erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanı (120 ± 20 g) elde edildi. Sıçanlar bir hafta boyunca iklime alıştırıldı, rastgele dört gruba ayrıldı (grup başına 10 sıçan): Kontrol grubu (C), NaF grubu (F), NaF artı yüzde 0,5 CaCO3 grubu (F artı yüzde 0,5 Ca), NaF artı yüzde 1 CaCO3 grubu (F artı yüzde 1Kalsiyum) ve Tablo 1 ile muamele edildi. Tüm sıçanlar 22–25 ◦C'de (yüzde 55 ± 5 nem, 12 saat aydınlık/karanlık döngüsü) plastik kafeslerde barındırıldı, diyet ve içme suyuna serbestçe erişilebilir.

17 haftalık yetiştirmeden sonra, sıçanlar 24 saat aç bırakıldı ve su içmek serbestti. Daha sonra sıçanlara sodyum pentobarbital ile anestezi uygulandı ve göz kürelerinden kan alındıktan sonra servikal dislokasyon ile öldürüldü. BUN testi için antikoagülan heparin sodyum içeren tüplerden bir miktar kan alındı. Kanın bir kısmı ortak test tüplerine konuldu, 2 saat oda sıcaklığında tutuldu ve ardından serumu ayırmak için 3000 rpm/dk'da 10 dakika santrifüjlendi. Serum, CRE, UA, Mg, P, K ve F testleri için ayrıldı. sekiz örnekböbreklerher gruptan rastgele seçilmiş ve hızlı bir şekilde sıvı nitrojen içinde dondurulmuş ve daha sonra qRT-PCR ve western blot deneyleri için -80 ◦C'de saklanmıştır. diğer örnekleriböbreklerhistopatolojik inceleme ve terminal deoksinükleotidil transferaz aracılı dUTP nick end etiketleme (TUNEL) deneyleri için yüzde 10 formalin içinde sabitlendi. Hayvanlarla ilgili tüm deneysel işlemler, Hayvan Bakım Kurumu ve Shanxi Tarım Üniversitesi, Shanxi, Çin Kullanım Komitesi'nin düzenlemeleri altında sıkı bir şekilde uygulandı.

Böbrekkatsayı

Önce sıçanlar tartıldı; sonraböbrekdoku çıkarıldı ve tartıldı. buböbrekkatsayısı aşağıdaki formülle elde edilmiştir.

Böbrekkatsayı=[böbrekıslak ağırlık (g) / vücut ağırlığı (g)] × yüzde 100 .

histopatolojik inceleme

Böbrekörnekler parafine gömüldü. Kesiti (5 μm kalınlık)böbrekH&E tarafından boyandı. Daha sonra slaytlar bir ışık mikroskobu (Olympus, Tokyo, Japonya) kullanılarak gözlendi. ciddiyetiböbrekyaralanma histopatolojik skorla değerlendirildi.Böbrektübüler yaralanma olarak tanımlanırböbrekcisimcikler atrofiye ve deforme olur,böbrekkapsül boşluğu genişler,böbrekbir döküm oluşturan tübüller ve düşen epitel hücreleri. 200 kat büyütmede, karaciğer hasarının derecesini değerlendirmek için aşağıdaki kriterler kullanıldı. 1: yüzde 0-25 hasar; 2: yüzde 25-50 hasar; 3: yüzde 50-75 hasar; 4: yüzde 75-100 hasar (Baranova ve diğerleri, 2016).

belirlenmesiböbrek-ilgili göstergeler

F seviyesi, bir F iyonuna özgü elektrot ile ölçülmüştür (Quadri ve diğerleri, 2018). CRE, UA, BUN, Mg, P ve K seviyeleri ticari olarak temin edilebilen kitler kullanılarak ölçüldü. İlgili tüm prosedürler üreticinin talimatlarına göre yapıldı.

TespitiapoptozTUNEL ile seviye

miktarını ölçmek içinapoptoziçindeböbrekhücreler, bir situ kullanılarak deneysel analiz yapıldıapoptozalgılama kiti. buböbrekkesitler deparafinize edildi ve daha sonra Proteinaz K kullanılarak sindirime tabi tutuldu. Terminal Deoksinükleotidil Transferaz, digoksin etiketli dUTP'yi (DIG-dUTP) 3′-OH ucuna işaretleyebilir ve DIG-dUTP, biyobelirteç anti ile reaksiyona girdikten sonra DNA kırılma noktasına bağlanır. -dig-Biotin. DAB ile kombine gösterime eklendi. görselleştirmek için

tüm çekirdekler, kesitler hematoksilen ile zıt boyandı. Koyu kahverengi sinyaller pozitif hücreleri, mavi ise yanıt vermeyen hücreleri gösterir. buapoptozindeks aşağıdaki formüle göre hesaplanmıştır.

Apoptotik hücrelerin oranı=(düğüm başına apoptotik hücre sayısı / düğüm başına toplam hücre sayısı) × yüzde 100 .

Nicel gerçek zamanlı PCR (qRT-PCR)

Toplam RNAböbrekTrizol reaktifi kullanılarak ekstrakte edildi. RNA'nın kalitesini ve miktarını kontrol etmek için bir ND{{0}} spektrofotometre (nano-damla, ABD) ve agaroz jel elektroforezi kullandık. PrimeScript® RT Master Mix kullanılarak 500 ng toplam RNA üzerinde ters transkripsiyon (RT) yapıldı. -aktin ve FAS, TRAIL, TNF ve diğer genler için spesifik primerler Primer Premier 7.0 yazılımı (Tablo 2) tarafından tasarlandı ve Sangon Biotech (Shanghai, Çin) tarafından sentezlendi. RT-PCR için Quantstudio 7 flex real-time PCR sistemi (thermo-fisher, ABD) ve SYBR® Premix Ex Taq™ II Kiti kullanıldı. PCR reaksiyon hacmi 20 μL ve RT-PCR koşulları: 95 ◦C 10

min, 40 döngü 95 ◦C 15 s, 55 ◦C 30 s, 72 ◦C 30 s ve son olarak 95 ◦C 15 s, 60 ◦C 15 s, 95 ◦C 15 s. Tüm reaksiyonlar üç kez tekrarlandı. Göreceli mRNA ekspresyon seviyelerini hesaplamak için bağıl 2-ΔΔCt yöntemi kullanıldı ve kalibratör olarak -aktin kullanıldı. Bu süreçte verimlilik farkı yüzde 5'ten azdır.

Toplam protein ekstraksiyonu ve western blot analizi

buböbrekdoku PBS ile yıkandı, filtre kağıdı ile kurutuldu ve 12,000 rpm/dk, 4'te RIPA lizizinde (PMSF içeren) ayrıştırıldı^◦C 10 dk. Protein konsantrasyonu Bicinchoninic Acid (BCA) Kiti (Solarbio Science & Technology, Beijing, China) kullanılarak belirlendi. 35 ng protein numunesi başarılı bir şekilde ekstre edildi ve elektroforez ile yüzde 8'lik SDS-poliakrilamid jel üzerinde ayrıldı. Hedef protein, bir NC zarına aktarıldı ve NC zarı, 2 saat boyunca oda sıcaklığında yüzde 5 yağsız süt ile bloke edildi. Bundan sonra, NC zarı -aktin (1:1000), TRAIL (1:500), FAS (1:500), FAS-L (1:100), TNF (1:500), primer antikorları ile inkübe edildi. FADD (1:500), Kaspaz 8 (1:500), Kaspaz 3 (1:500) ve PARP (1:1000) gece boyunca 4 derecede. PBST ile 3 kez yıkandıktan sonra, NC membranı HRP-konjuge ikincil keçi anti-tavşan IgG antikorları (1:2000) ile oda sıcaklığında 2 saat süreyle inkübe edildi. Hedef protein bantlarını görselleştirmek için ECL kullanıldı. Optik yoğunluk, FluorChem Q sistemi (Alpha Innotech, CA, ABD) üzerinde AlphaView yazılımı (sürüm: 3.2.2.0) ile hesaplandı.

istatistiksel analiz

Deneysel verileri düzenlemek ve analiz etmek için GraphPadPrism{{0}} yazılımı kullanıldı ve her bir veri ortalama ± SEM ile temsil edildi. Ortalamalar arasındaki farkın önemi, varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey testiyle belirlendi ve P < 0.05="" anlamlı="" kabul="">

Sonuçlar

Değişikliklerböbrekkatsayı ve biyokimyasal fonksiyon göstergeleri

buböbrekkatsayısı ve F, CRE, BUN, UA, Mg, P, K seviyeleri Şekil 1'de gösterilmiştir. C grubu ile karşılaştırıldığında,böbrekkatsayısı F grubunda anlamlı olarak azaldı (p < 0.05).="" bununla="" birlikte,="" f="" artı="" yüzde="" 1'deki="" böbrek="">Kalsiyumgrubu, F grubuna kıyasla önemli bir artış gösterdi (p < {{0}}.05).="" f="" grubundaki="" f="" seviyesi,="" c="" grubundan="" belirgin="" şekilde="" yüksekti="" (p="">< 0.001).="" ilginç="" bir="" şekilde,="" f="" grubu="" ile="" karşılaştırıldığında,="" f="" artı="" yüzde="" 1="" ca="" grubundaki="" f="" seviyesi="" önemli="" ölçüde="" azaldı="" (p=""><>

CRE, BUN ve UA derecesini yansıtacak şekilde değerlendirildi.böbrekhasar ve fonksiyonel değişiklik. CRE, BUN ve UA seviyeleri, C grubuna kıyasla F grubunda belirgin şekilde arttı (p < 0.05),="" ancak,="" f="" grubuna="" göre,="" yukarıdaki="" üç="" gösterge="" dikkate="" değer="" düzeydeydi.="" f="" artı="" yüzde="" 1="">Kalsiyumgrup (p < 0.05).="" mg,="" p="" ve="" k="" ile="" yakından="" ilişkili="" elektrolit="">böbrekişlev. C grubu ile karşılaştırıldığında, serum Mg düzeyi önemli ölçüde azaldı, P ve K düzeyleri F grubunda çarpıcı biçimde arttı (p < 0.05).="" bununla="" birlikte,="" yüzde="" 1="">kalsiyumdiyete, serum Mg seviyelerini yüzde 15,3 (p < 0.05)="" belirgin="" şekilde="" arttırdı="" ve="" serum="" p="" seviyelerini="" yüzde="" 16,9="" (p="">< 0.05)="" belirgin="" şekilde="" azalttı.="" serum="" k="" içeriği,="" ek="" yüzde="" 1="" ca="" tedavisinden="" sonra="" anlamlı="" olmayan="" bir="" düşüş="" eğilimi="">

Değişikliklerböbrekmorfoloji

morfolojik değişikliklerböbrekdoku H&E tarafından incelendi (Şekil 2I-Ⅳ, ⅰ-ⅳ). C grubunda,böbrektübüler hücreler kompakt bir şekilde düzenlenmişti, morfoloji düzenliydi ve glomerüllerin morfolojisi sağlamdı. Bununla birlikte, hücreler arasındaki sınırlar belirsizdi,böbrekcisimcikler körelmiş ve deforme olmuş,böbrekkapsül boşluğu genişler,böbrektübüller bir döküm oluşturdu ve F grubunda epitel hücreleri ayrıldı. F grubu ile karşılaştırıldığında, artış ileKalsiyumkonsantrasyonu, düzenlenmesiböbrekhücreler yavaş yavaş daha düzenli hale geldi, morfolojisiböbrekcisimcikler yavaş yavaş iyileşti ve yaralanma derecesi yavaş yavaş hafifledi. Ayrıca, hasarı aşağıdakileri kullanarak değerlendirdik:böbrekskor (Şekil 2Ⅴ). F grubunun puanı, C grubununkinden anlamlı derecede yüksekti (p < 0.01);="" yine="" de,="" f'deki="" puan="" artı="" yüzde="">Kalsiyumgrubu, F grubuna kıyasla belirgin şekilde azaldı (p < 0.05).

TUNEL algılarböbrekhücreapoptoz

olup olmadığını tespit etmek ve analiz etmek için TUNEL testini gerçekleştirdik.böbrekhücreler geçtiapoptozbu çalışmada (Şekil 3I-Ⅳ, ⅰ-ⅳ).BöbrekC grubundaki dokular, daha az apoptotik hücre (yüzde 4.67 ± 1.15) ile düzgün bir şekilde düzenlenmiştir. F grubu çok sayıda TUNEL pozitif gösterdiböbrektübüler epitel hücreleri (yüzde 48.17 ± 3.94). Buna karşılık, F artı yüzde 1Kalsiyumgrup, TUNEL pozitif hücre sayısında (yüzde 28.83 ± 4.81) dramatik bir düşüş gösterdi (Şekil 3Ⅴ).

EtkileriKalsiyumölüm reseptörü yolu ile ilgili genlerde F ile indüklenen değişiklikler üzerine

Ölüm reseptörünün aracılık ettiği ölümle ilgili yukarı akış faktörlerinin nispi mRNA ekspresyon seviyeleriapoptozyol (TRAIL, DR5, TNF, TNFR1, TNF-R2, FAS, FAS-L, OPG) Şekil 4a'da ortaya konmuştur. C grubuna göre, TRAIL, DR5, TNF, TNF-R1, TNFR2, FAS ve FAS-L'nin mRNA ekspresyon seviyeleri F ile tedavi edilen sıçanlarda belirgin şekilde arttı (p < 0.01).="" buna="" karşılık,="" trail,="" tnf,="" tnf-r2,="" fas="" ve="" fas-l'nin="" bağıl="" mrna="" ifadeleri="" f="" artı="" yüzde="" 1'de="" belirgin="" şekilde="">Kalsiyumgrubu ile karşılaştırıldığında F grubu (p < {{0}}.05).="" c="" grubu="" ile="" karşılaştırıldığında,="" f="" grubunda="" opg'nin="" mrna="" ekspresyon="" seviyelerinde="" bariz="" bir="" düşüş="" gözlendi="" (p="">< 0.01).="" ancak,="" f="" grubuna="" göre,="" f="" plus'ta="">Kalsiyumgrupları artırıldı. Downstream faktörleri FADD, TRADD, Caspase 8, Caspase 3 ve PARP göreli mRNA ekspresyon seviyeleri Şekil 4b'de gösterilmiştir. FADD, TRADD, Caspase 8, Caspase 3 ve PARP'ın protein ifadeleri, C grubu ile karşılaştırıldığında F grubunda açıkça arttırıldı (p < 0.01),="" ancak="" f="" plus'ta="" açıkça="">Kalsiyumgrupları, F grubu ile karşılaştırıldığında (p < 0.05).

EtkileriKalsiyumF kaynaklı değişikliklerdeapoptozilgili proteinler

TRAIL, FAS, FAS-L, TNF, FADD, Kaspaz 8, Kaspaz 3 ve PARP'ın protein ekspresyonu Western blotlama ile tespit edildi (Şekil 5a, b). C grubu ile karşılaştırıldığında, F grubunda TRAIL, FAS, FAS-L, TNF, FADD, Caspase 8, Caspase 3 ve PARP'ın protein ekspresyonları belirgin şekilde yüksekti (p < 0.01).="" yukarıdaki="" faktörlerin="" hepsinin="" protein="" ifadeleri,="" f="" artı="" yüzde="" 1'de="" önemli="" ölçüde="">Kalsiyumgrubu, F grubuyla karşılaştırıldığında (p < 0.05).

Tartışma

En son kanıtlar, F'nin yumuşak dokularda lezyonlara neden olabileceğini ve F hasarının derecesinin F konsantrasyonuna, maruz kalma süresine ve organ tipine bağlı olduğunu kanıtladı (Wei ve diğerleri, 2019). Bu çalışmada, içme suyu subakut NaF maruziyetli hayvan modeli oluşturmak için 17 hafta boyunca 100 mg/L NaF kullanıldı. NaF dozajı, ortamdaki F kirlilik derecesine ve farklı türlerin belirsiz faktörlerine göre seçilir. Yerel yeraltı suyunda ölçülen doğal F- konsantrasyonunun yaklaşık 4,5 mg/L olduğu göz önüne alındığında, bu çalışmada kullanılan 100 mg/L NaF ile damıtılmış su (F- konsantrasyonu yaklaşık 45 mg/L'dir) için belirsiz faktöre göre hesaplanmıştır. 10'da hayvandan insana ekstrapolasyon (İçme Suyu Kalitesi Rehberi, 2017; Mukherjee ve Singh, 2021; Wen ve diğerleri, 2013; Zhang ve diğerleri, 2020). İlk araştırmalar, diyetinkalsiyumflorin emilimini etkileyebilir, vücutta flor atılımını teşvik edebilir, florin emilim oranını azaltabilir ve böylece F'nin toksisitesini azaltabilir (Harrison ve diğerleri, 1984; Larsen ve diğerleri, 1981). Son deneysel çalışmalarımız, Ca2'nin intrinsik yolu inhibe ederek F kaynaklı kemik ve karaciğer hasarını hafiflettiğini göstermiştir.apoptoz(Li ve diğerleri, 2021; J. Wang ve diğerleri, 2020; Wang ve diğerleri, 2019). Bununla birlikte, şimdiye kadar, Ca'nın F kaynaklı nefrotoksisite ve bununla ilgili mekanizma üzerindeki koruyucu etkisi üzerine yapılan araştırmalar emsalsizdir. Burada, Ca'nın F kaynaklıböbrekzarar. Ek olarak, Ca'nın F'nin neden olduğu durumu tersine çevirdiğini de bulduk.böbrekhücreapoptozölüm reseptörü aracılı aracılığıylaapoptozyol (FAS/FASL, TNFR/TNF, DR5/TRAIL yolları). F'nin uzun vadeli birikimiböbrekdoku yapısı ve fonksiyonel hasara yol açabilir. Bu çalışmada, NaF maruziyetinin neden olduğunu bulduk.böbrekhücreapoptozsıçanlarda, glomerüler atrofi ve deformasyonun eşlik ettiği,böbrekkapsül boşluğu genişlemesi,böbrekdöküm oluşturan tübüller ve düşen epitel hücreleri. Yine de,böbrekHasar, yüzde 1 Ca ilavesinden sonra önemli ölçüde hafifletildi. Bu sonuçlar önceki raporlarda elde edilen sonuçlara benzerdi (Cao ve diğerleri, 2015; HW Wang ve diğerleri, 2020).

CRE, kasın metabolitidir, UA, pürin metabolizmasının son ürünüdür ve BUN, glomerüler filtrasyon ile atılan ve genellikle tespit etmek için kullanılan vücudun protein metabolizmasının ana son ürünüdür.böbrek(Myers ve diğerleri, 2006; HW Wang ve diğerleri, 2020). Yüksek F bölgesinin biyokimyasal incelemesi, glomerüler filtrasyon hızlarının önemli ölçüde azaldığını ve F, UA ve BUN'un önemli ölçüde değiştiğini gösterdi (Malin ve diğerleri, 2019). Hayvan testleri, serum CRE'sinin,Kalsiyumve P konsantrasyonları, 100 mg/L NaF'ye maruz bırakılan farelerde önemli ölçüde azaldı, bu da F'nin bozulduğunu düşündürdü.böbrekCa ve P metabolizmasının yanı sıra işlev görür (HW Wang ve diğerleri, 2020). F ile indüklenen nefrotoksisite aşağıdakilerle ilişkilidir:böbrekişlev bozukluğu. Ne zamanböbrekfonksiyonu bozulur, vücutta F atılımı azalır, bu da vücutta aşırı flor birikmesine neden olur.böbrekve ağırlaştırıcı F toksisitesi (Kido ve diğerleri, 2017). Ne zamanböbreklerciddi şekilde bozulmuş,

idrarda F atılımı azalır ve serum F konsantrasyonu daha da artar (Dharmaratne, 2019). Bu çalışmada, 100 mg/L NaF ile tedavi edilen sıçanlarda BUN ve serum CRE, UA, P, K düzeylerinin önemli ölçüde arttığını gözlemledik, bu da yüksek F maruziyetininböbreksıçanlarda biyokimyasal göstergeler ve yol açtıböbrekyetersizlik. Ayrıca, çeşitli göstergelerin olduğuna da dikkat çektik.böbreksonra normal olma eğilimiKalsiyumtakviye. Ca (özellikle yüzde 1Kalsiyum) F ile indüklenen üzerinde önemli bir hafifletici etkiye sahiptirböbreksıçanlarda hasar.

cistancheyardımcı olabilirböbrekzarar.

apoptozgenler tarafından kontrol edilen, belirgin hücre lizizi olmaksızın DNA degradasyonu ile karakterize edilen, otonom ve düzenli bir hücre ölümüdür. Bu çalışma, florozun neden olduğunu gözlemlediböbrekhücreapoptozsıçanlarda. FAS oluşumunda önemli bir rol oynar.apoptozve çeşitli hastalıklar. Son literatür, FAS'ın aracılık ettiğini ortaya koyduapoptoziçindeböbrekiskemi-reperfüzyon ve insan lökositleri tarafından indüklenenapoptozN-nitrosodimetilamin tarafından indüklenen (Iwaniuk ve diğerleri, 2019; Xu

ve diğerleri, 2019). FAS ve FAS-L bir trimer oluşturmak üzere birleştiğinde, pro-apoptotik sinyal tetiklenir. Yakın tarihli bir çalışma, F'nin hücreyi indüklediğini göstermiştir.apoptozFAS/FAS-L yolu aracılığıyla (Xu ve diğerleri, 2011). Bu çalışmada F, FAS ve FAS-L'nin mRNA ve protein ekspresyonunu önemli ölçüde arttırdı.böbrek. FAS ve FAS-L seviyelerinin yukarı regülasyonu, FAS/FAS-L ile ilişkili apoptotik yolların F ile indüklenenapoptoz. FADD'nin FAS/FAS-L trimer alımı, Pro-Caspase 8'in aktif Kaspaz 8 üretmek için bölünmesine yol açar, bu da sırasıyla Kaspaz 3'ü etkinleştirir ve ardındanapoptoz(Li ve diğerleri, 2011; Xu ve diğerleri, 2011). Bu çalışma, 100 mg/L NaF'nin indüklendiğini doğruladı.apoptozsıçandaböbreklerFAS/FAS-L yolu ile. En önemli sonuç, diyet Ca takviyesininapoptozFAS/FAS-L aktivasyonunun aşağı regülasyonu ve Kaspazların ikincil aktivasyonuna atfedilen F'nin indükleyici etkisi.

TNF, farklılaşma, çoğalma, iltihaplanma ve hücre ölümü dahil olmak üzere çok çeşitli hücresel tepkilere katılan bir pleiotropik sitokindir. TNF sinyali her ikisini de tetiklerapoptozve anti-apoptotik yollar. Birçok literatür, TNF'nin lipopolisakkarit kaynaklıböbrekhasar ve sisplatin kaynaklı akutböbrekyaralanma (Lee ve diğerleri, 2016; Li ve diğerleri, 2018). TNF, TNF-R1'e bağlanır, DD'si TRADD'i alır ve ardından TRADD, FADD ile etkileşime girerek DISC'nin oluşumuna yol açar (Kiraz ve diğerleri, 2016; Sun ve diğerleri, 2003). Çalışmalar, F'nin karaciğer, nöron veböbreklökositapoptozTNF sinyal yolu aracılığıyla (Lu ve diğerleri, 2017; Singh ve diğerleri, 2017; Yan ve diğerleri, 2016). Bu raporların sonuçlarına benzer şekilde, bu deneyde F grubundaki TNF, TNF-R1, TNF-R2 ve TRADD'nin nispi ifadeleri önemli ölçüde artmıştır. Buna karşılık, bu genlerin ifadesi yüzde 1'den sonra önemli ölçüde azaldı.Kalsiyummüdahalesini öneren ekKalsiyumTNF yolunda.

TRAIL, aşağıdakilerin düzenlenmesinde yer almaktadır:apoptoz, proliferasyon, immün-inflamatuar yanıt vb. Şu anda, TRAIL'in oluşumu ve prognozu ile yakından ilişkili olduğuna inanılmaktadır.böbrekhastalığı (Candido, 2014). Giderek daha fazla literatür, TRAIL'inapoptoznın-ninböbrekHBV ile ilişkili glomerülonefritte tübüler epitel hücreleri veböbrekapoptozÜromodülin ile ilişkiliböbrekhastalığı (Johnson ve diğerleri, 2017; Yang ve diğerleri, 2018). Ayrıca, bir çalışma, TRAIL ekspresyonunun genellikle homeostaz sırasında değiştiğini ve çeşitliböbrekyaralanmalar (Devarapu ve ark., 2017). TRAIL, ölüm reseptörü DR5'e bağlanır ve DD'nin etkileşimi yoluyla FADD'yi alır ve daha sonra bir DISC oluşturmak için FADD'de bulunan ölüm etkisi alanı aracılığıyla Kaspaz yanlısı 8'e bağlanır (Yuan ve diğerleri, 2018). Bu çalışma, F grubunda TRAIL ve DR5 ekspresyonunun önemli ölçüde arttığını gösterdi. ile takviye ettikten sonraKalsiyum, TRAIL ve DR5'in ifadesi inhibe edildi. öneriliyorKalsiyumF kaynaklı azaltmak için TRAIL yolunu inhibe ederapoptoz.

Çözüm

100 mg/L NaF maruziyeti aktive edilmiş ölüm reseptörü aracılıapoptozyolu (FAS/FASL, TNFR/TNF, DR5/TRAIL yolları) ve ardından indüklenenböbrekhücreapoptozsıçanlarda neden olurböbrekMetabolik bozukluklar veböbrekyetersizliğine neden olanböbrekcisimcikler körelmiş ve deforme olmuş,böbrekkapsül boşluğu genişler,böbrektübüller bir döküm oluşturdu. Ancak yüzde 1 ilaveKalsiyumdiyete kan florür içeriğini azalttı, daha da hafiflettiböbrekmetabolik bozukluk veböbrekölüm reseptörü aracılı yol boyunca yetersizlik ve önemli ölçüde azalttıböbrekyaralanma (bileşen Şekil 6).

Referanslar

Kaynak Haojie Li, Veterinerlik Fakültesi, Shanxi Tarım Üniversitesi, Taigu 030801, Shanxi, Çin Halkla İlişkiler vb.