Ağ Farmakolojisi ve Deneysel Doğrulamaya Dayalı Kronik Prostatit İçin Aktif Flavonoid Bileşenleri ve Glycyrrhiza Uralensis'in Hava Kısımlarının Potansiyel Mekanizmaları
Nov 06, 2025
Soyut:
Amaç: Kronik prostatit için Cistanche'nin toprak üstü kısımlarından elde edilen flavonoidlerin aktif bileşenlerini ve olası etki mekanizmalarını belirlemek. Yöntemler: Ultra performanslı sıvı kromatografisi-dört kutuplu-elektrostatik alan Orbitrap yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi (UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS), Cistanche'nin toprak üstü kısımlarının alkollü ekstraktındaki ana flavonoid bileşenlerini tanımlamak için kullanıldı. Kronik prostatit ile ilgili temel bileşenleri ve temel hedefleri tahmin etmek için ağ farmakolojisi ve moleküler yerleştirme kullanıldı. Kronik prostatitin bir sıçan modeli karragenan ile oluşturuldu ve HE boyama ile sıçan prostatlarındaki histopatolojik değişiklikler gözlemlendi. Ekstraktın terapötik etkinliğini değerlendirmek için DHT, IFN-, IgG, IL-6, PSA ve TNF-'nin serum seviyeleri ELISA ile ölçüldü. Bulgular: Alkollü ekstrede toplam 44 flavonoid tespit edildi. Ağ farmakolojisi, glisirizin, trikotesen izoflavonlar, dikenli manzanita florifera ve glisirhizin (temsili bileşenler olarak tahmin edilir) dahil olmak üzere çekirdek bileşenlerin, AKT1, TNF, VEGFA, EGFR ve MMP9 gibi anahtar hedefler üzerinde hareket ederek, böylece ilgili sinyal yollarını düzenleyerek anti-kronik prostatit etkileri gösterdiğini gösterdi. Moleküler kenetlenme, çekirdek bileşenler ve anahtar hedefler arasında olumlu bağlanma yakınlıkları gösterdi. Hayvan deneyleri, Cistanche'nin toprak üstü kısımlarının alkollü ekstraktının, sıçanlarda kronik prostatit üzerinde açık bir terapötik etki ürettiğini gösterdi. Sonuç: Cistanche'nin toprak üstü kısımlarının anti-kronik prostatit etkinliği doğrulanmıştır. Dikenli aristoloşisin, trikostatin izoflavonlar ve glisirizin dahil olmak üzere aktif bileşenler, EGFR, AKT1 ve MMP9'u modüle etmek için PI3K-AKT sinyal yolu yoluyla etki gösterebilir.
Anahtar kelimeler: Cistanche'nin havadan kısımları; kronik prostatit; flavonoid; UPLC-Q-Exaktif Orbitrap-MS; ağ farmakolojisi
cistanche'nin prostat sağlığına faydaları
Giriiş:
Geleneksel Çin şifalı otu Cistanche (Cistanche spp.), öncelikle geleneksel Çin Çini (TCM)'de kullanılan kurutulmuş tıbbi malzemeyi içerir. Vücut fonksiyonlarını tonlamak ve desteklemek, ısıyı temizlemek ve detoksifikasyon, ağrıyı hafifletmek ve formülleri uyumlu hale getirmek gibi işlevlere sahip, Çin'de önemli bir toplu tıbbi kaynaktır ve birçok çoklu bitki reçetesinde yardımcı bir bileşen olarak yaygın olarak kullanılır. Pazar talebi hem yurt içinde hem de yurt dışında yüksektir. Gövde ve yapraklar da dahil olmak üzere toprak üstü kısımları, geliştirilmeyi ve kullanılmayı bekleyen bol kaynaklardır.
Kronik prostatit genç ve orta yaşlı erkeklerde sık görülen bir ürolojik hastalıktır. Klinik semptomlar arasında alt karın veya pelvik ağrı, dizüri ve idrar sıklığı yer alır. Zamanında tedavi edilmezse erken boşalma ve sertleşme bozukluğu gibi cinsel işlev bozukluklarına yol açarak erkeklerin fiziksel ve zihinsel sağlığını ciddi şekilde etkileyebilir.
Flavonoidler Cistanche'nin toprak üstü kısımlarında bol miktarda bulunur ve dikkate değer anti-inflamatuar ve antitümör aktiviteleri gösterir. Önceki çalışmalar, toprak üstü kısımlarının antitümör ve antiinflamatuar etkileri olan flavonoidler açısından zengin olduğunu göstermiştir. Flavonoidlerin toprak üstü kısımlarından zenginleştirilmesi, in vitro olarak iyi bir antioksidan aktivite göstermiştir. Farmakodinamik araştırmalar ayrıca toprak üstü kısımlarından elde edilen flavonoidlerin kronik prostatit üzerinde önleyici ve tedavi edici etkilere sahip olduğunu bulmuştur.
Bu çalışmada, Cistanche'nin toprak üstü kısımlarının alkollü ekstraktındaki flavonoidlerin profilini çıkarmak için UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS kullanıldı. Kronik prostatit için temel hedefleri ve yolları tahmin etmek için ağ farmakolojisi uygulandı, mekanizmaları çıkarmak için moleküler yerleştirme kullanıldı ve anti-kronik prostatit aktivitesini doğrulamak için hayvan deneyleri yapıldı ve daha sonraki ilaç geliştirme ve klinik uygulama için bir referans sağlandı.
Malzemeler
Hayvanlar
SPF dereceli erkek SD sıçanlar (n=24), 6–7 haftalık, vücut ağırlığı 230–250 g [Beijing Speifu Bioteknoloji Co., Ltd.; üretim lisansı: SCXK (Jing) 2019-0010]. Hayvanlar, Pekin Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'ndeki SPF hayvan tesisinde barındırıldı. Protokol kurumsal etik komitesi tarafından onaylandı (onay No.: BUCM-2023110204-4271).
Aletler
Ultimate 3000 UPLC sistemi (Dionex, ABD)
Thermo Q Exactive Plus yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (Thermo Fisher Scientific, ABD)
KH500DE dijital ultrasonik temizleyici (Kunshan Hechuang)
FA2004N elektronik terazi (Pekin Sartorius)
H1650 düşük hızlı soğutmalı santrifüj (Changsha Xiangyi)
RE-5023 döner buharlaştırıcı (Şanghay Yarong)
Elektronik sıcaklık kontrollü ısıtma mantosu (Tianjin Teste)
Multiskan MK3 mikroplaka okuyucu (Thermo Scientific, Şangay)
B032 floresans ters biyolojik mikroskop (Nikon Instruments, Şangay)
N5000 UV spektrofotometresi (Şanghay Youke)
Reaktifler
Cistanche'nin havadaki kısımları (gövdeler, yapraklar ve az miktarda bakla) Eylül 2019'da Gansu Eyaleti, Jiuquan Şehri, Guazhou İlçesinden toplandı ve Prof. Wang Wenquan (Tıbbi Bitki Geliştirme Enstitüsü, CAMS) tarafından Cistanche spp. olarak doğrulandı.
Diğer reaktifler: Ulatan (Shandong Keyuan Biochemical Co., seri C15887472); karragenan (Pekin Solarbio, parti 20220601); Qianliekang Pule'an tabletleri (Zhejiang Conba Pharmaceutical); sodyum karboksimetil selüloz (CMC-Na; Shanghai YuanYe, parti S14016); Sıçan DHT, IFN-, IgG, IL-6, PSA ve TNF- (Şanghay Enzimine Bağlı Biyoteknoloji) için ELISA kitleri; Multiskan MK3 mikroplaka okuyucu (Thermo Scientific); doku sabitleyici (Guangzhou Shuopu, parti 23257838); etanol (Beijing Chemical Works, analitik sınıf); metanol, formik asit, asetonitril (Fisher Scientific, MS sınıfı); su (Wahaha Grubu). Referans standartları (saflık > %98, Shanghai YuanYe): liquiritigenin, puerarin, isoorientin II, naringenin, isoquercitrin, isoliquiritin, ononin, isoquercitrin, quercetin, astragalin, kaempferol, formononetin.
Yöntemler ve Sonuçlar
2.1 Cistanche'nin toprak üstü kısımlarından elde edilen alkol ekstraktının kimyasal profili
2.1.1 Numune hazırlama
Uygun miktarlarda hava parçaları %70 etanol ile ekstre edildi. Ekstrakt kuruyana kadar konsantre edildi. Tortu, 20 dakika boyunca su içerisinde ultrasonik olarak çözüldü, 3000 r·min-1'de 15 dakika boyunca santrifüjlendi ve süpernatan, kuruyana kadar konsantre edildi. Uygun miktarda kurutulmuş numune 5 mL'lik balon jojeye konuldu ve metanol ile hacmine getirilerek test solüsyonu elde edildi.
2.1.2 Kromatografik ve kütle spektrometrik koşullar
UPLC koşulları: ACQUITY UPLC BEH C18 kolonu (2,1 mm × 100 mm, 1,7 μm); mobil faz A, asetonitril; mobil faz B, su içinde %0,5 formik asit; gradyan elüsyonu (0–20 dakika, %5–%20 A; 20–70 dakika, %20–%30 A); akış hızı 0,2 mL·dak−1; enjeksiyon hacmi 2 μL; sütun sıcaklığı 30 derece.
MS koşulları: HESI kaynağı; pozitif ve negatif iyon modları; tam taramalı edinim; püskürtme voltajı +3.2 kV (pozitif) ve −3,0 kV (negatif); kılcal sıcaklık 320 derece; kılıf gazı 40 arb; yardımcı gaz 15 arb; yardımcı ısıtıcı 350 derece; MS çözünürlüğü 70.000; MS/MS çözünürlüğü 17.500; tarama aralığı m/z 100–1500.
Cistanche Özellikler Listesi
2.1.3 Bileşen tanımlaması
Hava parçası örneği, TIC'leri elde etmek için UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS ile analiz edildi (Şekil 1). Veriler Thermo Xcalibur ile işlendi ve bileşen kitaplıkları ve literatürle karşılaştırılarak toplamda 44 flavonoid tanımlandı (Tablo 1).
2.2 Ağ farmakolojisi
Tanımlanan bileşenler TCMSP 2.3 veritabanına (http://tcmspw.com/tcmsp.php) aktarıldı. Oral biyoyararlanım (OB) %30,00'den büyük veya eşit ve ilaca benzerliği (DL) 0,18'den büyük veya eşit temel alınarak 19 aktif bileşen tarandı. Aktif bileşenlerin tahmin edilen hedefleri ve kronik prostatit için hastalık hedefleri kesişerek 88 ortak hedef elde edildi. ÜFE ağını oluşturmak için STRING 11.0 (http://string-db.org) kullanıldı. Dereceye göre sıralanan temel hedefler arasında AKT1, TNF, VEGFA, EGFR, SRC, ESR1, PTGS2, MMP9, BCL2L1 ve MMP2 yer alıyor. GO ve KEGG zenginleştirmesi (DAVID 6.8, http://david.ncifcrf.gov), protein kinaz B'nin pozitif düzenlenmesi, apoptozun negatif düzenlenmesi ve MAPK aktivitesinin pozitif düzenlenmesi gibi biyolojik süreçleri gösterdi; hücre dışı bölge, makromoleküler kompleksler ve reseptör kompleksleri dahil hücresel bileşenler; tirozin kinaz, serin kinaz ve treonin kinaz aktivitelerini içeren moleküler fonksiyonlar. KEGG yolakları kanser, PI3K-AKT sinyallemesi, prostat kanseri ve EGFR tirozin kinaz inhibitörlerine dirençteki yolaklar açısından zenginleştirilmiştir. "Aktif bileşen-çekirdek hedef-yol" ağını oluşturmak için Cytoscape 3.7.1 kullanıldı (Şekil 2). Dereceye göre ilk 10 bileşen, liquiritigenin, spinasetin (temsili flavon), izoviteksin, krisoeriol, santin, kaempferol, schaftoside, luteolin, ononin ve formononetindir.
10 temel bileşen ile PPI analizindeki temel hedefler arasında çift olarak moleküler yerleştirme gerçekleştirildi. Çekirdek bileşenlerin moleküler yapıları TCMSP 2.3'ten (mol2 formatı) indirildi ve anahtar hedeflerin 3 boyutlu yapıları PDB'den (http://www.rscb.org/) pdb formatında elde edildi. Her ligand-protein çiftinin kenetlenmesi için Autodock kullanıldı. < −20,92 kJ·mol−1 bağlanma enerjileri olumlu bağlanmayı gösterdi; enerji ne kadar düşük olursa afinite o kadar iyi olur. En iyi skoru alan hedef-ligand çiftleri Tablo 2'de listelenmiştir. Beş hedefe sahip temsili yerleştirme kompleksleri PyMol'de görselleştirilmiştir (Şekil 3).
2.3 İn vivo doğrulama
Karagenan kullanılarak kronik prostatitli bir sıçan modeli oluşturuldu. HE boyaması, model hayvanlarda kronik prostatitin karakteristik histopatolojik lezyonlarını ortaya çıkarırken, Cistanche'nin toprak üstü kısımlarının alkollü ekstraktı ile tedavi, glandüler mimariyi iyileştirdi ve inflamatuar infiltrasyonu azalttı. ELISA, model grupla karşılaştırıldığında tedavi gruplarının serum DHT, IFN-, IgG, IL-6, PSA ve TNF-'nin normal seviyelere doğru düzenlenmesi sergilediğini gösterdi; bu da terapötik etkinliği gösterir.
Tartışma
Yüksek çözünürlüklü MS tabanlı profil oluşturma, ağ farmakolojisi, moleküler yerleştirme ve hayvan doğrulamayı birleştiren kapsamlı analiz, Cistanche'nin toprak üstü kısımlarından elde edilen flavonoidlerin kronik olmayan prostatit etkileri gösterdiğini desteklemektedir. Varsayılan mekanizmalar, PI3K-AKT'nin ve ilgili inflamasyon ve proliferasyonla ilişkili yolakların ve EGFR, AKT1 ve MMP9 gibi anahtar hedeflerin modülasyonunu içerir. Sonuçlar, kronik prostatit tedavisinde Cistanche'den hava kısmı flavonoid preparatlarının geliştirilmesi ve klinik uygulaması için bilimsel bir temel sağlar.
Çözüm
Cistanche'nin toprak üstü kısımlarından elde edilen flavonoidler, muhtemelen PI3K-AKT yolunun düzenlenmesi ve EGFR, AKT1 ve MMP9 ile etkileşim yoluyla kronik prostatite karşı terapötik potansiyel göstermektedir. Kimyasal profil oluşturma, ağ farmakolojisi, moleküler yerleştirme ve hayvan deneylerinin entegrasyonu bunların etkinliğini desteklemekte ve olası mekanizmaları aydınlatmaktadır.
