Kronik Prostatit Tedavisinde Cistanche Bazlı Xian Fang Huo Ming İçeceği Mekanistik Çalışması: Entegre Ağ Farmakolojisi ve PI3K/Akt/NF-κB Yolunu Hedefleyen Deneysel Doğrulama
Oct 27, 2025
2. Yöntemler
2.1 Ağ Farmakolojisi ve Moleküler Yerleştirme Analizi
2.1.1 Aktif Bileşenlerin ve Hastalık Hedeflerinin Belirlenmesi
TCMSP veritabanı kullanılarak, Cistanche bazlı Xian Fang Huo Ming Drink (XFHY) içindeki aktif bileşikler ADME kriterleri ile tarandı: oral biyoyararlanım (OB) %30'dan büyük veya eşit ve ilaca benzerliği (DL) 0,18'den büyük veya eşit. Bu bileşiklerin potansiyel hedefleri SwissTargetPrediction (olasılık 0,1'den büyük veya ona eşit) kullanılarak belirlendi. Cytoscape 3.9.1 kullanılarak bir "bitki-bileşik-hedef" ağı oluşturuldu ve ilk beş bileşik, derece merkeziliğine göre tanımlandı. Eş zamanlı olarak, "kronik prostatit" ve "prostatit" gibi anahtar kelimeler kullanılarak GeneCards, OMIM ve DisGeNET'ten CP/CPPS ile ilişkili hastalık hedefleri toplandı.
Prostat ve Böbrek Sağlığı için Cistanche Ekstresi Takviyeleri PhGs75% Ech 30% Act 12%
2.1.2 Kesişme Hedeflerinin Belirlenmesi
XFHY bileşik hedefleri ile CP/CPPS hastalığı hedefleri arasındaki kesişim, temel potansiyel terapötik hedefleri belirleyen bir Venn diyagramı oluşturmak için Venny 2.1 yazılımı kullanılarak belirlendi.
2.1.3 ÜFE Ağ İnşaatı
Kesişme hedefleri STRING veritabanına aktarıldı (türler: Homo sapiens; etkileşim puanı > 0,9). Ortaya çıkan protein-protein etkileşimi (PPI) ağı Cytoscape'e aktarıldı ve derece, arasındalık ve yakınlık gibi ağ topolojisi parametrelerine dayalı olarak CytoHubba kullanılarak temel hedefler tanımlandı.
2.1.4 "Bitki-Bileşik-Hedef-Yol" Ağının Oluşturulması
Cytoscape 3.9.1 kullanılarak XFHY, aktif bileşikleri, hedefleri ve sinyal yolları arasındaki ilişkiyi görselleştirmek için bir ağ modeli oluşturuldu. Anahtar düğümleri belirlemek için ağ parametreleri analiz edildi.
2.1.5 GO ve KEGG Zenginleştirme Analizi
Kesişme hedefleri, Gen Ontolojisi (GO) ve Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) yol zenginleştirme analizi için DAVID veritabanına yüklendi (P <0.05). Sonuçlar biyoinformatik araçlarla görselleştirildi.
2.1.6 Moleküler Bağlantı
İlk beş bileşik (örneğin, quercetin, kaempferol) ligandlar olarak kullanıldı ve PPI ağındaki ilk on çekirdek hedef, reseptörler olarak kullanıldı. Protein yapıları Protein Veri Bankasından (PDB) elde edildi, AutoDockTools 1.5.6 (dehidrasyon, hidrojenasyon ve yük ekleme dahil) kullanılarak önceden işlendi ve PDBQT formatına dönüştürüldü. MOL2 formatındaki ligand yapıları TCMSP'den elde edildi ve benzer şekilde dönüştürüldü. Moleküler yerleştirme AutoDock kullanılarak gerçekleştirildi ve bağlanma afiniteleri GraphPad Prism 8 kullanılarak görselleştirildi.
2.2 Hayvan Deneyi
2.2.1 Model Oluşturma
CP/CPPS'yi modellemek için kimyasal bir indüksiyon yöntemi kullanıldı. Sıçanlara %3 pentobarbital sodyum (50 mg/kg) ile anestezi uygulandı. Alt karın bölgesinde bir orta hat kesisi yapıldı ve prostatın her bir lateral lobuna 80 μL %3 λ-karragenan enjekte edildi (toplam 160 μL). Sahte ameliyat edilen farelere salin enjeksiyonu yapıldı. Ameliyat sonrası bakım topikal antibiyotik uygulamasını içeriyordu. 7. günde, modelleme başarısı prostatın brüt ve histolojik incelemesi (ödem, tıkanıklık, epitelyal dejenerasyon ve inflamatuar infiltrasyon) yoluyla doğrulandı.
2.2.2 Gruplandırma ve Tedavi
Yetmiş erkek SD sıçanı rastgele yedi gruba ayrıldı (n=10):
Normal kontrol
Sahte operasyon
Modeli kontrolü
Düşük, orta ve yüksek doz XFHY grupları
Tamsulosin grubu
Dozlar, insan eşdeğer dozu (7,29 g/kg/gün) temel alınarak hesaplandı. XFHY, 0,3645 g/mL (düşük) ve 1,458 g/mL (yüksek) oranında oral sondayla uygulandı. Tamsulosin 0,0018 mg/kg'da uygulandı. Tüm tedaviler modellemeden 8 gün sonra başlamak üzere 28 gün sürdü.
2.2.3 Histopatolojik Değerlendirme
Sol prostat lobları %4 paraformaldehit içinde sabitlendi, parafine gömüldü, kesitlere ayrıldı ve hematoksilen-eozin ile boyandı. Histolojik değişiklikler ışık mikroskobu altında değerlendirildi.
2.2.4 İnflamatuar Belirteçler için ELISA
Abdominal aort yoluyla toplanan kan santrifüjlendi ve üreticinin talimatlarına göre ELISA kitleri kullanılarak TNF-, IL-1 ve COX-2'nin serum seviyeleri ölçüldü.
2.2.5 Gen İfadesi için qRT-PCR
Toplam RNA, prostat dokusundan ekstre edildi ve cDNA'ya ters kopyalandı. Gerçek zamanlı PCR, PI3K, Akt ve NF-κB p65 için spesifik primerler kullanılarak gerçekleştirildi. GAPDH dahili kontrol olarak kullanıldı. Bağıl ifade, 2^-ΔΔCt yöntemi kullanılarak hesaplandı.
2.2.6 Protein Ekspresyonu için Western Blot
Protein, RIPA tamponu kullanılarak dondurulmuş prostat dokusundan ekstre edildi. Miktar belirlemenin ardından proteinler SDS-PAGE ile ayrıldı, PVDF membranlarına aktarıldı ve PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65 ve p-NF-κB p65'e karşı birincil antikorlarla problandı. HRP-konjuge sekonder antikorlar ve ECL tespiti kullanıldı. Bant yoğunlukları ImageJ kullanılarak ölçüldü.
2.2.7 İstatistiksel Analiz
Tüm deneyler üç kopya halinde gerçekleştirildi. Veriler GraphPad Prism 8 kullanılarak analiz edildi ve ortalama ± standart sapma olarak ifade edildi. Çoklu grup karşılaştırmaları için tek yönlü ANOVA ve ardından LSD veya Dunnett testi kullanıldı. P<0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
3. Sonuçlar
3.1 Ağ Farmakolojisi ve Moleküler Bağlantı
Bileşik-Hedef Kavşağı:912 bileşik hedef ve 2.197 hastalık hedefi, 374 örtüşen hedef verdi.
Tanımlanan En İyi Bileşikler:Quercetin, kaempferol, pelargonidin, naringenin ve byakangelicol; hepsi bilinen antiinflamatuar ve antioksidan etkilere sahiptir.
ÜFE Analizi:Anahtar hedefler arasında TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1 ve NFKB1 yer aldı.
GO ve KEGG Zenginleştirmesi:Zenginleştirilmiş yollar PI3K/Akt, MAPK, RAS ve inflamasyonla ilişkili biyolojik süreçleri içeriyordu.
Moleküler Yerleştirme:Çekirdek hedefler ve ana bileşikler (bağlanma enerjisi -5,0 kcal/mol'e eşit veya daha az) arasında güçlü bağlanma afiniteleri gözlemlendi, bu da yüksek biyoaktiviteyi işaret ediyor.
3.2 Deneysel Doğrulama
3.2.1 HE Boyama
Model grubu sıçanlarında glandüler epitelyal dejenerasyon, stromal ödem ve yoğun inflamatuar infiltrasyon görüldü. XFHY ile tedavi edilen gruplarda, özellikle orta ve yüksek doz gruplarında inflamasyonun azaldığı görüldü.
3.2.2 Enflamatuar Belirteç Seviyeleri
Model grubuyla karşılaştırıldığında XFHY, serum TNF-, IL-1 ve COX-2 düzeylerini önemli ölçüde azalttı (P < 0,01), bu da anti-inflamatuar etkinliğe işaret ediyor.
3.2.3 Gen İfadesi (qPCR)
XFHY, PI3K, Akt ve NF-κB p65'in mRNA seviyelerini doza bağlı bir şekilde önemli ölçüde azalttı. Yalnızca düşük doz azaltılmış Akt ve p65; orta ve yüksek doz grupları daha geniş bir baskılama gösterdi.
3.2.4 Protein İfadesi (Western Blot)
PI3K, Akt (Ser473, Thr308) ve NF-κB p65'in fosforilasyon seviyeleri model grupta önemli ölçüde yükseldi ve XFHY ile tedavi edilen sıçanlarda özellikle orta ve yüksek dozlarda azaldı.
4. Tartışma
Klinik deneyime dayanan bu çalışma şunu doğrulamaktadır:Cistanche tabanlı XFHYCP/CPPS üzerinde dikkate değer bir antiinflamatuar etkiye sahiptir. Ağ farmakolojisi, özellikle önemli aktif bileşikleri tanımladıkuersetinKanıtlanmış antiinflamatuar ve antioksidan özelliklere sahiptir. ÜFE analizi aşağıdaki gibi hedefleri vurguladı:TNF, IL6, VeAKT1Bunlar prostatitteki iltihaplanmanın merkezinde yer alır.
KEGG analizi aşağıdakilerin katılımını önerdi:PI3K/Akt/NF-κBEnflamasyon ve bağışıklık düzenlemesinde yaygın olarak tanınan sinyal yolu. XFHY, bu yolu inhibe ederek ve böylece proinflamatuar sitokin ekspresyonunu azaltarak terapötik etkiler gösterebilir.
Ayrıca Akt'ın (Ser473 ve Thr308) ikili fosforilasyonunun NF-κB aktivasyonu için kritik olduğu görülmektedir. XFHY, her iki bölgede de fosforilasyonu inhibe etti; bu, NF-κB sinyalinin yukarı akış Akt baskılaması yoluyla inhibe edildiğini düşündürür.
Çözüm
XFHY, PI3K/Akt/NF-κB yolunu bloke ederek CP/CPPS'yi hafifletebilir ve ekspresyonunu azaltabilir.IL-1 , TNF-, VeCOX-2ve prostat dokusundaki inflamatuar yanıtların hafifletilmesi. Yolun katılımı, özellikle Akt'nin Ser473 ve Thr308'deki fosforilasyonu, XFHY'nin etkinliği için potansiyel bir mekanik açıklama sağlar. PI3K/Akt/NF-κB'nin, XFHY'nin terapötik etkisini uyguladığı kesin yol olup olmadığını doğrulamak için daha fazla araştırma yapılması gerekmektedir.
Çıkar Çatışması:
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
İsterseniz bana bildiringrafiksel özet, özet tablosu, veyaPowerPoint sunumubu çalışmaya dayanarak!
