Ekinakozid Diyabetik Karaciğer Hasarını İyileştirir

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Luo Yang, Xiang Zhang, Min Liao, Yarong Hao *

ÖZ

Amaçları:Ekinakozit (ECH), Cistanche Deserticola bitkisinin kökünden ekstrakte edilen doğal bir bileşiktir ve antioksidan, anti-inflamatuar, nöroprotektif, anti-tümör, hepatoprotektif ve immünomodülatör özellikler dahil olmak üzere önemli biyolojik özelliklere sahiptir. Bu çalışmada, DB/DB farelerde ECH'nin diyabetik karaciğer hasarı üzerindeki koruyucu etkilerini ve mekanizmalarını araştırmayı amaçladık.

Ana yöntemler:Genel olarak, 6-haftalık DB/DB fareleri (n=20) rastgele 2 gruba ayrıldı: diyabetik model grubu (DB/DB grubu, normal salinin intragastrik uygulaması, n=10 ) ve ECH ile tedavi edilen grup (DB/DB artı ECH grubu, n=10). Ek olarak, normal kontrol grubu 6-haftalık db/m farelerden (db/m grubu, normal salin intragastrik uygulama, n=10) oluşuyordu. ECH, 10 hafta boyunca günde bir kez uygulandı. Ağırlık ve açlık kan şekeri (AKŞ) iki haftada bir ölçüldü. Karaciğer dokusundaki patolojik değişiklikleri ve lipid birikimini değerlendirmek için sırasıyla HE boyama ve Oil O boyama kullanıldı. AMPK/SIRT1 sinyalleme ekseninin bileşenlerinin ekspresyonunu saptamak için immünofloresan boyama, Western blot ve RT-PCR analizi kullanıldı.

Önemli bulgular:Sonuçlar, 10 hafta boyunca ekinakozid uygulamasının DB/DB farelerinde karaciğer hasarını ve insülin direncini önemli ölçüde iyileştirebileceğini gösterdi (p < 0.01).="" ayrıca,="" ekinakozid="" tedavisi="" kan="" lipidlerini="" ve="" kan="" şekerini="" düşürmeye="" yardımcı="" oldu="" (p="">< 0.01).="" ayrıca,="" ech="" ile="" aktive="" edilmiş="" ampk/sirt1="" sinyali,="" yukarı="" regüle="" edilmiş="" peroksizom="" proliferatörü="" ile="" aktive="" olan="" reseptör="" gama="" koaktivatörü="" 1="" alfa="" (pgc-1="" ),="" proliferatör="" ile="" aktive="" olan="" reseptör-="" (ppar="" ),="" karnitin="" palmitoiltransferaz-1a="" (cpt1a)="" db/db="" farelerinde="" (p=""><>

Önem:ECH'nin etkisi, adipoziteyi, insülin direncini ve dislipidemiyi iyileştirmek için karaciğer AMPK/SIRT1 yolunun ve onun akış aşağı faktörlerinin aktivasyonu ile ortaya çıkarılabilir.

cistanche redditgeliştiriryağlanma, insülin direnci ve dislipidemi.

1. Giriş

Tip 2 diabetes mellitus (T2DM) kronik bir metabolik hastalıktır ve insan fiziksel ve zihinsel sağlığı için ciddi bir tehdittir. Karaciğer hasarı da dahil olmak üzere çoklu organ hasarına neden olabilir. Alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) en yaygın karaciğer hasarıdır [1,2]. Hepatositlerde aşırı lipid birikimi metabolik süreci bozar ve inflamasyona, karaciğer fibrozisine ve hatta karaciğer kanserine neden olur [3,4]. Hastalığın patogenezi belirsizliğini koruyor. T2DM'li hastalarda klinik olarak anlamlı karaciğer komplikasyonlarının yüksek prevalansı olmasına rağmen, tedavi ortamında sıklıkla gözden kaçırılırlar. Diyabet tedavisi için şu anda kullanılan ajanlar arasında metformin, sülfonilüreler, tiazolidindion (TZD'ler) ve dipeptidil peptidaz-4 (DPP-4) inhibitörleri yer alır. Bununla birlikte, bu ajanların çoğu karaciğer fonksiyon bozukluğuna neden olur ve karaciğer yetmezliği olan hastalarda önerilmez, bu da terapötik etkinliği ve düşük yan etki profili olan ajanların araştırılması gerektiğini gösterir. Çalışmalar, Cistanche Deserticola'nın ana bileşeni olan ekinakozitin (ECH) antioksidan, anti-inflamatuar, anti-tümör, hepatoprotektif ve immünomodülatör özelliklerini göstermiştir [5]. Ayrıca, AMP ile aktive olan protein kinaz (AMPK) yolu, karaciğerdeki lipid regülasyonu ile ilişkili ana hücresel enerji metabolizması anahtarı ve NAFLD için terapötik bir hedef olarak kabul edilmiştir. AMPK, hücresel NAD artı seviyelerini artırarak memeli susturma düzenleyici protein-1(SIRT1) aktivitesini arttırır, bu da peroksizom proliferatörü ile aktive olan reseptör-koaktivatör 1'i (PGC{) içeren aşağı akış SIRT1 hedeflerinin aktivitesinin deasetilasyonu ve modülasyonu ile sonuçlanır. {20}} ) [6]. Hem alkolik yağlı karaciğer hastalığında (AFLD) hem de NAFLD'deki birçok pozitif fonksiyon nedeniyle, SIRT1, SIRT ailesi arasında geniş çapta çalışılmıştır. Protein, lipid ve glukoz metabolizmasının önemli bir düzenleyicisidir ve karaciğer ve diğer dokuların insülin duyarlılığını iyileştirebilir ve hepatik steatozu azaltabilir [7]. PPAR-, nükleer hormon reseptörlerinin bir alt ailesi olan PPAR'lara aittir, PPAR-, CPT1A'nın aracılık ettiği mitokondriyal ve peroksidaz yağ asidi beta-oksidasyonu yoluyla lipid metabolizmasını iyileştirir. Db/DB fareleri, spontan obez tip 2 diyabetik farelerdir. Bu fareler yaşlandıkça, bulimia, obezite, bariz hiperglisemi, hiperlipidemi ve insülin direnci gibi diyabetik durumların kademeli bir tezahürü olabilir [8]. Patogenez, T2DM'li hastalarda gözlenene benzer. Bu çalışma, ECH'nin T2DM'nin neden olduğu karaciğer hasarı üzerindeki terapötik etkisini ve bu etkinin AMPK/SIRT1 yolunu ve aşağı akış efektörlerini aktive ederek aracılık ettiğini varsaymıştır. DB/DB fareleri, T2DM karaciğer hasarı modeli olarak kullanıldı ve ECH, intragastrik olarak uygulandı.

2. Malzemeler ve yöntemler

2.1. deney hayvanları

Tip 2 diyabetik DB/DB farelerinin karaciğeri, spontan T2DM karaciğer hasarı için model olarak kabul edildi, kontrol grubu olarak db/m fareleri kullanıldı ve model grubu ve ECH ile tedavi edilen grup olarak diyabetik db/db fareleri kullanıldı (erkek , 6 haftalık, SPF sınıfı) her grupta 10 fare ile. Tüm fareler Nanjing Üniversitesi'nden (Nanjing Biyotıp Enstitüsü, Çin; Hayvansal üretim Sertifika No.: SCKK (Su) 2015–0001) satın alındı. Hayvanlar (kafes başına n=5), standart sıcaklık (22 ◦C ± 2 ◦C), bağıl nem (yüzde 60) koşulları altında Wuhan Üniversitesi Renmin Hastanesi (SPF) Merkez Laboratuvar Hayvan Odasında barındırıldı. ve açık/karanlık (12 saat/12 saat) döngüsü, 10 haftalık deney süresi boyunca içme suyuna ve yemlere ad libitum erişim. Deneyler, Wuhan Üniversitesi Renmin Hastanesi tarafından önerilen deneysel hayvan etiği kurallarına göre yapıldı.

2.2. Ana aletler ve reaktifler

OneTouch Ultra kan şekeri ölçüm cihazı ve kan şekeri test şeritleri (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); tavşan anti-insan monoklonal antikoru SIRT-1 (#9475; CST Company of the United States); AMPK (Ab80039),p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934) ve GAPDH (Ab37168; tümü Abcam Company'den); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); BCA protein konsantrasyonu saptama kiti (Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.); SDS-PAGE jel hazırlama kiti (Google Biotechnology Co., Ltd.); ve RT-PCR ters transkripsiyon kiti (Takara, Japonya) deneyler için kullanıldı.

2.3. Hayvan gruplaması ve yönetimi

Deneye başlamadan önce {{0}}haftalık fareler 1 hafta karantinaya alındı ​​ve 1 hafta adapte olarak beslendi. Db/DB fareleri rastgele numaralandırıldı ve diyabetik model grubuna (db/db grubu, n=10) veya ekinakozit ile tedavi edilen gruba (db/db artı ECH grubu, n =10) ayrıldı ve Normal kontrol grubuna (DB/m grubu, n=10) ​​10 db/m fare tahsis edildi. 8 haftalıkken, normal kontrol ve diyabetik model grubu farelerine intragastrik olarak normal salin (0.05 mL/10 g) uygulandı ve ECH ile tedavi edilen grup farelere intragastrik olarak 300 mg/kg/d ECH uygulandı. Bu süre boyunca, farelerin 10 hafta boyunca ad libitum yiyecek ve suya erişmesine izin verildi.

2.4. Genel durum ve açlık kan şekeri

Deney sırasında sağlık koşulları, yiyecek ve içme suyu alımı ve kürkün parlaklığı gözlemlendi. Deneyin ilk haftasından başlayarak, farelerin vücut ağırlığı her 2 haftada bir ölçülmüştür. Açlık kan şekerini test etmek için kan örnekleri kuyruk damarından alındı. 10-hafta ECH tedavisinden sonra oral glukoz tolerans testi (OGTT) yapıldı. Gece boyunca aç bırakıldıktan sonra, farelere glikoz (2 g/kg vücut ağırlığı) verildi ve kan glikoz konsantrasyonları önce (0 dk.) ve 15, 3{9}}, 60 ve 120 dk sonra değerlendirildi. glukoz verilmesi. Eğrinin altındaki alan (AUC), GraphPad Prism 7.0 kullanılarak belirlendi.

2.5. Örnek koleksiyon

10 haftalık müdahaleden sonra, 12 saat boyunca su değil, yiyecek kesildi, hayvanlara retro-orbital pleksustan kan örnekleri almak için anestezi uygulandı. Toplanan kandan alınan serum hızla ayrıldı ve biyokimyasal indeksin belirlenmesi için -80 ◦C'de saklandı. Kan örnekleri alındıktan sonra fareler öldürüldü ve normal salin ile perfüze edildi. Karaciğer diseke edildi ve tartıldı. Karaciğer indeksi (LI) aşağıdaki formül kullanılarak hesaplandı: LI=[karaciğer ağırlığı (g)/vücut ağırlığı (g)] × yüzde 100. Taze karaciğer dokusunun bir kısmı patolojik analiz için tutuldu ve karaciğer dokusunun geri kalanı 1 saat sıvı nitrojene yerleştirildi ve ardından takip protein tespiti ve kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu için -80 ◦C'de saklandı ( PCR).

cistanche deneyimiAyıkla

2.6. Karaciğerin histopatolojik incelemesi

Taze karaciğer dokusu hızla ayrıldı ve bir kesit 24 saat boyunca yüzde 4 paraformaldehit içinde sabitlendi, ardından dehidre edildi ve parafine gömüldü. Kesitlerin mumu ksilen ile alınmış ve gradyan etanolden su içinde yeniden hidratlanmıştır. Çekirdek ve sitoplazma, hematoksilen ve eozin (HE) ile boyandı ve dehidrasyondan sonra nötr sakız ile kapatıldı. Dokunun başka bir parçası, Oil Red-O boyaması için optimal kesme sıcaklığı bileşiği (OTC) gömülü dilimler kullandı.

2.7. Serum ve karaciğer dokusunun biyokimyasal indekslerinin tespiti

Serum örnekleri, otomatik biyokimyasal analiz için Wuhan Üniversitesi Renmin Hastanesi Laboratuvar Bölümüne gönderildi. Kan lipid indeksleri arasında trigliserit (TG), toplam kolesterol (TC), yüksek yoğunluklu lipoprotein kolesterol (HDL-C), düşük yoğunluklu lipoprotein kolesterol (LDL-C) bulunur. Karaciğer fonksiyon indeksleri glutamik piruvik transaminazı (ALT) ve glutamik oksaloasetik transaminazı (AST) içeriyordu. Açlık insülin seviyeleri (FINS), ELISA kiti (Meimian Biological Inc. China) kullanılarak belirlendi. Standart numunenin konsantrasyonuna ve optik yoğunluğuna (OD) dayalı olarak bir standart eğri oluşturulmuştur; numune konsantrasyonu daha sonra standart eğriden hesaplandı. Son olarak, insülin duyarlılık indeksi (ISI) ve insülin direnç indeksi (HOMA-IR) şu şekilde hesaplanmıştır: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × FINS/22.5.

2.8. Western blot kullanılarak karaciğer dokusunda AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1 , PPAR- ve CPT1A ifadeleri tespit edildi.

Dondurulmuş karaciğer dokusu bölümlere ayrıldı. Toplam protein ekstraksiyonu için, 50 g'lık bir bölüme 1 mL RIPA lizatı ilave edildi ve 13,{3}} rpm'de 4 °C'de 5 dakika santrifüjlendi, ardından süpernatant alındı. Protein konsantrasyonu, BCA protein konsantrasyonu belirleme kiti kullanılarak belirlendi. Her gruptan yaklaşık 40 ug protein numunesi alındı ​​ve poliviniliden florür (PVDF) zarına aktarıldı. Zarlar, belirtilen ikincil antikorlarla oda sıcaklığında 1 saat etiketlendi ve geliştirildi. Her protein bandının gri değerleri analiz edildi ve GAPDH, yarı kantitatif analiz için dahili referans olarak kullanıldı.

2.9. Karaciğer dokusundaki p-AMPK ve SIRT1 ekspresyonları immünofloresan boyama ile tespit edildi.

Karaciğer dokuları yüzde 4 paraformaldehit içinde sabitlendi, parafine gömüldü ve ardından 10-um kalınlığında karaciğer dilimleri halinde kesildi. 30 dakika boyunca yüzde 3 BSA ekleyin. Slaytları gece boyunca 4 ◦C'de birincil antikorla inkübe edin. Objektif dokuyu ikincil antikorla örtün, karanlık durumda 50 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. Daha sonra DAPI solüsyonu ile oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin, karanlık bir yerde saklayın. 5 dakika inkübe etmek için spontan floresan söndürme reaktifi ekleyin. Floresan Mikroskobu ile mikroskopi algılama ve görüntüleri toplama.

2.10. Karaciğer dokusunda SIRT-1, PGC-1 , PPAR- ve CPT1A mRNA ifadeleri RT-PCR ile tespit edildi.

Her gruptan -80 ◦C'de saklanan yaklaşık 100 mg karaciğer dokusu kullanıldı. Toplam RNA, Trizol kiti kullanılarak ekstre edildi; RNA kalitesini belirlemek için ultraviyole (UV) absorpsiyon yöntemi kullanıldı ve bu RNA daha sonra cDNA'ya ters kopyalandı. SYBR yeşil qPCR, Bio-Rad CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, ABD) üzerinde çalıştırıldı. SIRT-1, PGC-1, PPAR- ve CPT1A'nın primer sekansları Primer Premier5.0 yazılımı tarafından tasarlandı ve Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd. tarafından kahya geni GAPDH hizmet verecek şekilde sentezlendi. dahili referans olarak. Amplifikasyon koşulları şu şekildeydi: 95 ◦C'de ön denatürasyon, 95 ◦C'de denatürasyon ve 60 ◦C'de (30 s) tavlama, toplam 40 döngü. Reaksiyonun sonunda, PCR amplifikasyonunun özgüllüğü, çözünme eğrisi analizi ile belirlendi, Ct değeri okundu ve hedef gen mRNA'sının bağıl ifadesi 2-ΔΔCt yöntemi ile hesaplandı. Primer dizileri Tablo 1'de gösterilmiştir.

2.11. istatistiksel yöntemler

Veri işleme ve istatistiksel analiz için SPSS22.0 istatistik yazılımı ve çizim için GraphPad Prism7.0 kullanıldı. Normal dağılan veriler ortalama ± standart sapma (varyans x ± s) olarak sunulur. Gruplar arasında ikili karşılaştırma tek faktörlü varyans analizi ile yapılmıştır. Gruplar arasındaki farklılıkların önemi, çoklu karşılaştırmalar için ya En Az Önemli Farklar (LSD) Testi (varyansların homojenliği) ya da Dunnett t-testi (homojen olmayan) ile tanımlandı. Veriler normal dağılıma uymuyorsa, ortanca ve çeyrek fark ile parametrik olmayan test (Kruskal-Wallis testi) kullanıldı. AP değeri<0.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche erkek faydalarıiçinböbrek

3. Sonuçlar

3.1. ECH, db/db farelerin genel sağlık durumunu ve LI'sini iyileştirir

Deney boyunca, db/m grubu fareler sağlıklı ve aktifti ve kaplama parlaklığı sergiledi. db/db grubu fareler aşırı su ve yem alımı, obezite, uyuşukluk ve çömelme ve kaba, koyu saç gösterdi. db/db grubu fareler ile karşılaştırıldığında, db/db artı ECH grubu fareler, tüm çalışmalarda iyileştirilmiş koşullar gösterdi. Ayrıca, vücut ağırlıkları ve karaciğer indeksleri diyabetik model grubu farelerinkinden daha düşüktü (P < 0.05)="" (tablo="">

Tablo 1 RT floresan kantitatif PCR primerleri.

Tablo 2 Her grubun farelerinde vücut ağırlığı, karaciğer ıslak ağırlığı ve karaciğer indeksi.

3.2. ECH, açlık kan şekerini ve insülin direncini azaltır ve db/db farelerde glikoz toleransını ve insülin duyarlılığını artırır

Deney ilerledikçe, db/m grubuyla karşılaştırıldığında, db/db grubundaki açlık kan şekeri önemli ölçüde arttı (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">

3.3. ECH, karaciğer yapısal bozukluğunu iyileştirir ve db/db farelerde lipid birikimi gibi patolojik değişiklikleri hafifletir

HE boyamasında db/m grubunda hepatositlerin boyut ve morfolojisinin normal olduğu, hepatik lobüllerin ve sinüzoidlerin yapılarının temiz olduğu görüldü. db/db grubunda yaygın hepatosit dejenerasyonu, hepatosit hacminde artış, değişen nükleer boyut, fokal hücre nekrozu ve portal alanda inflamatuar hücre infiltrasyonu mevcuttu. db/db plus ECH grubunda lipid damlacıkları ve inflamatuar hücreler önemli ölçüde azalmış, nekrotik hücre hasarı hafiflemiştir (Şekil 2A). Yağ kırmızısı O boyanan karaciğer dokusunun mikroskobik analizi, db/m grubunda lipid damlacıkları veya patolojik değişiklikler olmaksızın düzgün bir hücre düzenini ortaya çıkardı. db/db grubunda hücreler düzensiz bir dizilime sahipti ve sitoplazmada çok sayıda farklı boyutlarda yağ partikülleri mevcuttu. db/db grubu ile karşılaştırıldığında, db/db artı ECH grubundaki lipid damlacıklarının sayısı önemli ölçüde daha düşüktü, bu da ECH'nin karaciğer üzerindeki olası koruyucu etkisini ortaya koyuyor (Şekil 2B, C).

Şekil 1. ECH, db/db farelerinin glukoz toleransını ve zayıflatılmış insülin direncini iyileştirdi.

3.4. ECH, db/db farelerde lipid metabolizmasını ve karaciğer fonksiyonunu iyileştirir

db/m grubuyla karşılaştırıldığında, TC, TG ve LDL'nin kan lipid seviyeleri önemli ölçüde arttı ve db/db grubunda HDL önemli ölçüde azaldı (P < {{0}}).{{4}="" }1).="" ancak="" db/db="" grubuna="" kıyasla="" db/db="" plus="" ech="" grubunda="" tc,="" tg="" ve="" ldl="" seviyeleri="" azalmış="" ve="" hdl="" seviyesi="" yükselmiştir="" (p="">< 0.05,="" p)="">< 0.01)="" (şekil="" 3a).="" db/m="" grubu="" ile="" karşılaştırıldığında,="" alt="" ve="" ast="" seviyeleri="" db/db="" grubunda="" önemli="" ölçüde="" arttı="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01).="" ast="" ve="" alt="" seviyeleri,="" db/db="" artı="" ech="" grubunda="" db/="" db="" grubuna="" göre="" önemli="" ölçüde="" daha="" düşüktü="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (şekil="" 3b,="">

Şekil 2. NAFLD'li farelerde ECH zayıflatılmış karaciğer dokusu yapısal bozukluğu ve lipid birikimi.

3.5. Farklı grup farelerde ECH'nin AMPK/SIRT1 yolunun aktivasyonuna etkisi

Western blot sonuçlarına göre, db/m grubu ile karşılaştırıldığında, karaciğer dokusundaki p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR- ve CPT1A protein seviyeleri db/db grubunda anlamlı olarak daha düşüktü ( P < 0.01).="" bununla="" birlikte,="" protein="" seviyeleri="" db/db="" artı="" ech="" grubunda="" db/db="" grubuna="" göre="" önemli="" ölçüde="" daha="" yüksekti="" (p="">< 0.01)="" (şekil="" 4a,="" b).="" ayrıca,="" immünofloresan="" boyama,="" p-ampk="" ve="" sirt1="" ekspresyonunun="" ech="" ile="" tedavi="" edilen="" farelerin="" karaciğer="" dokusunda="" db/db="" grubuna="" göre="" açık="" bir="" şekilde="" bulunduğunu="" gösterdi="" (şekil="">

3.6. Farklı grup farelerin karaciğerlerinde SIRT1 yolu mRNA'sının ekspresyonu üzerine ekinakozidin etkisi

RT-PCR sonuçlarına göre SIRT1, PGC-1 , PPAR- ve CPT1A seviyeleri db/db grubunda db/m grubuna göre anlamlı olarak azaldı. Ancak, bu seviyeler db/db artı ECH grubunda db/db grubuna kıyasla önemli ölçüde arttı (Şekil 5).

Şekil 3. Her grubun farelerindeki serumla ilgili indeksler.

4. Tartışma

Diyabet dünyada önemli bir tıbbi sorundur ve diyabetli insan sayısının 2035 yılına kadar yaklaşık 592 milyona çıkması beklenmektedir [9]. Çin'de ağırlıklı olarak T2DM olmak üzere diyabetin yaygınlık oranı önemli ölçüde artan bir eğilim göstermektedir [10,11]. T2DM ile karaciğer hastalığı arasında karmaşık bir ilişki vardır ve karaciğerde aşırı yağ birikimi ile karakterize NAYKH, T2DM'nin neden olduğu en yaygın karaciğer hasarı ve dünyada en sık görülen kronik karaciğer hastalığıdır [12,13]. Klinik genetik test araştırmaları, T2DM ile ilişkili genin artmış BMI, hiperkolesterolemi ve azalmış HDL-C ile ilişkili olduğunu ve bunun da daha yüksek NAYKH riski oluşturduğunu göstermektedir [14]. NAFLD, insülin direnci ve dislipidemi ile yakından ilişkilidir ve bu nedenle T2DM ve/veya obezitesi olan hastalarda oldukça yaygındır. Birkaç metabolik faktör NAYKH gelişimi ile ilişkili görünse de, patogenezi büyük ölçüde belirsiz ve karmaşıktır [15]. Cistanche Deserticola, kumlama bitkilerinin köklerinde yetişen çok yıllık bir parazit bitkidir. Çin Farmakopesi'ne göre, Cistanche Deserticola, böbrek hastalığı ve kısırlığı tedavi etmek için geleneksel bir ilaç olarak kullanılmaktadır [16,17]. Son yıllarda yapılan çalışmalar, Cistanche Deserticola'nın diyabetik farelerde açlık ve tokluk kan şekeri düzeylerinin artışını önemli ölçüde engelleyebileceğini, insülin direncini ve dislipidemiyi iyileştirebileceğini ve kilo kaybına yardımcı olabileceğini doğrulamıştır [18]. Cistanche Deserticola'nın ana bileşeni olarak ECH'nin DM ile ilişkili karaciğer hasarının iyileştirilmesine daha fazla katkıda bulunması beklenmektedir. Deneysel sonuçlarımız, obezite ve diyabetin, serum ALT ve AST seviyelerinde önemli artışlar ve tipik histopatolojik değişiklikler ile karakterize edilen farelerde karaciğer hasarına neden olabileceğini ortaya koydu. ECH, LI ve kan şekerini önemli ölçüde azalttı, TC, TG ve LDL seviyelerini azalttı, HDL seviyelerini arttırdı ve insülin duyarlılığını iyileştirdi. Histopatolojik inceleme, ECH ile tedavi edilen farelerde hepatosit steatoz dejenerasyonunun ve enflamatuar hücre infiltrasyonunun azaldığını ortaya çıkardı ve bu, maddenin obez, diyabetik farelerde karaciğer hasarını iyileştirebileceğini doğruladı.

AMPK, organizmalarda yaygın olarak dağılmış, yüksek oranda korunmuş bir protein kinazdır ve bir enerji metabolizması reseptörü olarak adlandırılır. Oksidatif stres, inflamasyon, proliferasyon ve apoptozun hafifletilmesinde rol oynar [19]. Enzimin indirekt aktivatörler tarafından aktivasyonu, diyabet, obezite, kanser ve diğer ilgili metabolik bozuklukların tedavisinde bilimsel ilgiyi çekmektedir [20,21]. Yağ asidi ve trigliserit sentezini inhibe etmek, kolesterol sentezini inhibe etmek ve yağ asidi oksidasyonunu ve ayrışmasını teşvik etmek gibi çeşitli yaklaşımlarla lipit metabolizmasını düzenleyebilir [22]. Karaciğerde AMPK, fosforilasyon yoluyla lipid metabolizmasını düzenler.

Hücre içi AMP-ATP oranı arttığında, AMPK aktive olur, p-AMPK/AMPK'yi arttırır ve hücresel NAD artı seviyelerini artırarak SIRT1 ekspresyonunun yukarı regülasyonunu arttırır [23,24]. NAD'a bağımlı bir deasetilaz olan SIRT1'in yakın zamanda NAYKH patofizyolojisi ile ilişkili olduğu gösterilmiştir [25]. Enzim, lipid ve glukoz homeostazı ve insülin duyarlılığı gibi çeşitli hücresel fizyolojik süreçlerde yer alır ve metabolizmanın anahtar düzenleyicisidir [26]. Obez hastalarda, özellikle de insülin direnci, diyabet ve NAYKH olanlar, daha düşük SIRT1 seviyelerine sahiptir [27,28]. Fiyat et al. SIRT1'in hepatik steatozun önlenmesindeki rolünü incelemişler ve NAYKH olan hastalarda SIRT1 ekspresyonunun azaldığını bulmuşlardır [29]. Diğer çalışmalar, SIRT1'in hepatosit spesifik nakavtının yağ asidi oksidasyonunu azaltabileceğini ve karaciğerde steatoz ve inflamasyonu indükleyebileceğini, buna karşın SIRT1'in aşırı ekspresyonunun PGC-1 yolu yoluyla lipid metabolizmasını iyileştirebileceğini göstermiştir [30]. SIRT1, PGC-1'nin aktivitesini düzenler ve her ikisi de hücresel enerji homeostazını sürdürmek için çok önemlidir. Bu nedenle, SIRT1 ve aşağı akış faktörleri PGC-1, karaciğer hasarının ana hedefi olabilir. PGC koaktivatörü, transkripsiyonel aktiviteyi arttırmak için transkripsiyon faktörlerine veya nükleer reseptörlere bağlanabilen bir proteindir [31]. Çoğu transkripsiyon faktörünün, özellikle karaciğer, miyokard ve iskelet kası gibi oksitlenmiş dokularda, özellikle PPAR- koaktivatörlere ihtiyacı vardır. Yağ asidi taşınmasını ve oksidasyonunu, keton üretimini ve glukoneogenezi destekleyen gen transkripsiyonunu aktive edebilir [32,33]. CPT1A, yağ asidi oksidasyonunda hız sınırlayıcı anahtar bir enzimdir. İfadesi, SIRT1, PGC-1 ve PPAR [34] dahil olmak üzere çeşitli transkripsiyon faktörleri ve koaktivatörleri içeren karmaşık transkripsiyonel mekanizmalar tarafından düzenlenir. Bu çalışmada, db/db grubundaki yüksek kan şekeri konsantrasyonu altında, hepatositlerdeki lipid birikiminin, AMPK/SIRT1 sinyal yolu ekspresyonunun aşağı akış faktörlerinin aşağı doğru düzenlenmesiyle arttığını bulduk; ECH ile tedavi edilen grupta, p AMPK/AMPK, SIRT1 ve PGC-1 ifadeleri önemli ölçüde arttı ve aşağı akış faktörleri PPAR ve CPT1A'nın ifadeleri önemli ölçüde arttı, bu da AMPK/SIRT1 sinyal ekseninin ve aşağı akış faktörlerinin olduğunu gösterir. diyabetik karaciğer hasarının tedavisinde faydalı bir rol oynar(Şekil 6). Ancak burada sağlanan veriler in-vivo deneylere dayanmaktadır; bu nedenle, ECH'nin AMPK/SIRT1 sinyal yolları ve efektör proteinleri üzerindeki etkisini doğrulamak için ek in vitro çalışmalara ihtiyaç vardır.

Genel olarak, ECH, AMPK/SIRT1 ekspresyonunu ve aşağı akış faktörlerini düzenleyerek kan şekeri ve lipid metabolizmasını düzenleyebilir, böylece diyabetik karaciğer hasarını iyileştirebilir.

ECH cistancheYapabilmekkan şekerini düzenlerveLipid metabolizması.

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın.