Cistanche Deserticola'nın Bağırsak Fonksiyonunu Destekleyen Mekanizması

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Soyut

Feniletanoidglikozitler(PhG'ler), polifenolik bileşiklerin bir sınıfı, başlıca biyoaktif bileşenlerden biri olarak kabul edilir.cistancheçöl çiçeğiÖzü geleneksel Çin tıbbında ağızdan kullanılan YC Ma (CD). Önceki farmakolojik çalışmalar PhG'lerin birçok aktivite sergilediğini bildirmiş olsa da, bağırsak taşıma profilleri açıklığa kavuşturulmamıştır. Bu çalışmada, PhG açısından zengin bir özütün (PRE) bağırsak geçirgenliğini araştırdık.cistancheçölikolbir biyo-tahlil sistemi kullanan Caco-2 hücre tek katmanlı modelinde entegre bir sistem olarak. Sonuçlar, PRE'nin birincil olarak zayıf bir şekilde emilen pasif difüzyon yoluyla dışarı akış olmaksızın bir konsantrasyon gradyanından aşağı taşındığını gösterdi; bu, PhG'lerin klinikte klinik uygulaması için farmakokinetik temeli sağlar.cistanche çölikolası. Ayrıca üç ana bağırsak geçirgenliğini de belirledik.PhG'ler[acteoside (AC), izoacteoside (IS) ve echinacoside (EC)]HLPC tarafından. Ayrıca, AC ve IS'nin akı miktarını doğru bir şekilde belirlemek için yeni bir HPLC-floresan algılama yöntemi geliştirdik. Beklendiği gibi, üçünün taşıma özellikleriPhG'lerPRE'deki aktif bileşen gruplarının (AIG) taşıma özelliklerinin değerlendirilmesi için mevcut biyo-tahlil sisteminin uygun ve güvenilir olduğunu gösteren PRE'ninkilerle tutarlıdır. Ayrıca bu sistem, uygun biyoaktivite verilen diğer bitki özleri için de uygun olabilir.

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche Deserticola'nın birçok etkisi vardır, daha fazlasını öğrenmek için buraya tıklayın

giriiş

İnsan kolon adenokarsinomlarından türetilen Caco-2 hücre dizisi, enterosit benzeri özellikler sergiler. Normal koşullar altında, Caco-2 hücreleri olgun hücrelerden kendiliğinden farklılaşır ve bozulmamış tek tabakalar oluşturur [1]. Bitişik hücreler, epitel tabakası boyunca pasif ve aktif olarak taşınan ilaçları ayırt edebilen tek tabakanın apikal tarafında oluşturulan sıkı bağlantılar yoluyla yapışır [2]. Normal enterositlere morfolojik ve biyokimyasal benzerlik nedeniyle, Caco-2 hücre tek tabakaları, ilaçların bağırsak absorpsiyon potansiyeli ve taşıma özelliklerinin incelenmesi için iyi kabul edilen bir in vitro model olarak hizmet eder [3, 4].

Kimyasalların aksine, bitki özleri (PE), biyolojik aktivitesi ve aktif bileşenleri genellikle iyi tanımlanmayan karışımlardır [5]. Ayrıca, PE'nin bileşenlerinin özelliklerinin aksine bağırsakta taşınım özellikleri klinik kullanımla yakından ilişkilidir. Bir Caco-2 hücre tek tabakası boyunca bir test numunesi için akı ölçümleri genellikle HPLC, LC/MS, vb. gibi kimyasal yöntemleri içerir. Bu yöntemler güçlü araçlar olmasına rağmen, karmaşık, zaman alıcı, pahalı ve bazen gelişmiş ekipman gerektirir. Daha da önemlisi, ne tek bir bileşen ne de azınlık bir bileşen PE'yi bir bütün olarak yansıtamaz. Bu nedenle, PE'nin taşıma özelliklerini belirlemek ve değerlendirmek için bileşenlerin belirlenmesinden bağımsız yeni bir yaklaşımın oluşturulması gerekmektedir.

cistancheçöl çiçeğiHoloparazitik bir bitki olan YC Ma (CD), esas olarak böbrek yetmezliği, vücut zayıflığı ve kabızlığı tedavi etmek için kullanılan yaygın bir geleneksel Çin tıbbıdır ve bu kullanımlar Çin Farmakopesinde resmi olarak kaydedilmiştir [6]. Ekinakozit (EC), akteosit (AC), izoakteosit (IS) vb. dahil olmak üzere feniletanoid glikozitler (PhG'ler), bir polifenolik bileşik sınıfıdır [7]. Ana biyoaktif bileşenlerden biri olarak kabul edilirler.cistanchetürler [8]. Farmakolojik çalışmalar, biyoaktivitesininPhG'lerçeşitlidir ve anti-oksidatif [9], anti-yorgunluk [10], hepatoprotektif [11], immünomodülatör [12], anti-inflamatuar [7, 13] ve nöroprotektif etkileri [14] içerir. Bununla birlikte, bağırsak taşıma özellikleriPhG'leraraştırılmamıştır. Bu çalışmada, entegre bir sistem olarak CD'den elde edilen PhG açısından zengin özütün (PRE) bağırsak geçirgenliğini ve farklılaşmış Caco-2 hücrelerinde üç ana PhG'nin (AC, IS ve EC) geçirgenliğini araştırdık. Sonuçlarımız, PRE'nin esas olarak, CD'de PhG'lerin klinik uygulaması için farmakokinetik temeli sağlayan, akış olmadan bir konsantrasyon gradyanından aşağı zayıf emilen pasif difüzyon yoluyla taşındığını gösterdi.

Malzemeler ve yöntemler

Malzemeler

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>yüzde 98) Must Biotechnology Co.'dan (Chengdu, Çin) satın alındı. Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM), fetal sığır serumu (FBS) ve esansiyel olmayan amino asitler (NEAA) Gibco BRL (Grand Island, NY, ABD) tarafından üretildi. 6-kuyulu TranswellTM plakaları (zar büyüme alanı 4.67 cm2 girin) Corning (Costar) Inc.'den (Tewksbury, MA, ABD) elde edildi. Sıçan kuyruğu kollajeni Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) elde edildi. HPLC analizi için tüm reaktifler ve kimyasallar analitik derecedeydi.

Cistanche Deserticola'dan PRE hazırlanması

Havada kurutulan CD malzemesi toz haline getirildi ve yüzde 70 etanol ile süzülerek özü çıkarıldı. PhG açısından zengin fraksiyon daha önce tarif edildiği gibi hazırlandı [10] ve suyla doymuş n-butil alkol ile özü çıkarıldı. Ekstrakt likörü konsantre edildi ve indirgenmiş basınç altında kurutuldu. Büyük gözenekli reçine-UV spektrofotometrisi [15] yüzde 78,4'lük bir PhG içeriği ölçtü. Nihai numune, kuru ağırlığa göre yüzde 1.75'lik bir ham madde verimini temsil ediyordu. Elde edilen numune bir sonraki kullanıma kadar -20 derecede saklandı.

HPLC ile AC, IS ve EC'nin belirlenmesi

PRE'de AC, IS ve EC içeriklerini tahlil etmek için LC solüsyon yazılımı ile donatılmış bir Shimadzu HPLC sistemi kullanıldı. Ters fazlı bir Intersil C18 kolonu (4,6 mm x 250 mm, 5 um) kullanılmış ve oda sıcaklığında tutulmuştur. Mobil fazlar asetonitril ve 1.0 ml/dk akış hızında gradyan elüsyonu (Tablo 1) ile yüzde 0.1 fosforik asit (h/h) içeren suydu. UV spektrofotometre dedektörü 334 nm'ye ayarlandı. AC ve IS akışını doğru bir şekilde belirlemek için yeni bir HPLC-floresan algılama (HPLC-FLD) yöntemi geliştirdik. Yapısal bir analiz ve floresan dalga boyu taramasından sonra (veriler gösterilmemiştir), AC (Örn: 338 nm, Em: 448 nm) ve IS (Örn: 320 nm, Em: 434 nm) için en uygun floresan algılama koşullarını elde ettik.

HPLC analitik yöntemi, aşağıdaki performans özellikleri kullanılarak doğrulanmıştır: kararlılık, doğrusallık, duyarlılık, kesinlik (gün içi ve günler arası değişkenlik) ve doğruluk. Taşıma tamponundaki analitler 24 saat karanlıkta 25 derecede saklandı ve stabiliteleri ölçüldü. Analitler, C vitamini varlığında (yüzde 0.4) oldukça stabildi çünkü pik alanlarındaki göreceli standart sapma (RSD) değerleri < yüzde="" 3.5="" idi.="" ac,="" is="" ve="" ec="" için="" doğrusal="" regresyon="" denklemi,="" korelasyon="" katsayısı,="" doğrusallık="" aralığı,="" lod="" ve="" loq="" tablo="" 2'de="" gösterilmiştir.="" lod'ler="" (18–30="" nm)="" ve="" loq'lar="" (60–100="" nm)="" değerler,="" hplc-fld="" ve="" hplc-uv="" yöntemlerinin="" oldukça="" hassas="" olduğunu="" göstermektedir.="" yöntemin="" kesinliğini="" ifade="" eden="" rsd="" değerlerinin="" tümü,="" gün="" içi="" ve="" günler="" arası="" değişkenlik="" için="">< yüzde="" 2="" idi,="" bu="" da="" iyi="" bir="" kesinliği="" gösterir.="" geri="" kazanım="" değerlendirmesi="" için,="" üç="" (yüksek,="" orta="" ve="" düşük)="" konsantrasyon="" seviyesi="" verecek="" şekilde="" taşıma="" tamponuna="" ac,="" is="" ve="" ec="" ilave="" edildi.="" analitler="" için="" yöntemin="" geri="" kazanım="" değerleri="" tablo="" 3'te="" özetlenmiştir.="" ortalama="" geri="" kazanımlar="" yüzde="" 90.0="" ila="" yüzde="" 96.4="" arasında="" değişmekte="" olup,="" iyi="" bir="" doğruluğu="" göstermektedir.="" sonuç="" olarak,="" yerleşik="" hplc="" yöntemleri,="" taşıma="" tamponunda="" ac,="" is="" ve="" ec'nin="" nicelenmesi="" için="" doğrusallık,="" hassasiyet,="" kesinlik="" ve="" doğruluk="" açısından="" tatmin="">

Biyoassay sistemi ile PRE belirlenmesi

Biyo-tahlil (toplam antioksidatif kapasite), daha önce tanımladığımız [16] FRAP (demirli indirgeyici/antioksidan güç) tahliline dayanıyordu ve doğrusallık ve kesinlik (gün içi ve günler arası değişkenlik) açısından doğrulandı. Biyoassay yönteminin doğrusallığı, kalibrasyon eğrilerine göre belirlendi. Doğrusallığın konsantrasyon aralığı 0 idi.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x artı 0.0968, R2=0.996). Yerleşik biyo-tahlil yönteminin kesinliği, PRE analizi (10.0 ug/ml) için gün içi ve günler arası değişkenlik açısından belirlendi. Yöntemin gün içi tekrarlanabilirliği, aynı gün içinde arka arkaya beş belirlemeye dayalı olarak belirlendi. Günler arası tekrarlanabilirlik, üç farklı günde ardışık beş belirlemeye dayalı olarak ölçülmüştür. Yöntemin kesinliği için RSD değerleri, gün içi ve günler arası değişkenlik için sırasıyla yüzde 1.014 ve yüzde 4.72'dir ve bu da iyi bir kesinliği gösterir. Bu nedenle, yerleşik biyo-tahlil yöntemi, taşıma tamponundaki PRE miktarının belirlenmesi için doğrusallık, kesinlik ve doğruluk açısından tatmin edicidir.

Hücre kültürü

Caco{{0}} hücreleri, yüzde 5 CO2 içeren bir atmosferde ve DMEM, yüzde 10 FBS, yüzde 1 NEAA, yüzde 1 L-glutamin, penisilin içeren bir ortamda 37 derece ve yüzde 95 bağıl nemde kültürlendi ( 100 U/ml) ve streptomisin (100 ug/ml). Ortam, hücre büyümesi ve farklılaşması sırasında gün aşırı değiştirildi. Hücreler 75-cm2'lik plastik şişelerde büyütüldü ve her 3-5 günde bir yüzde 0,05 EDTA-tripsin ile toplandı. Taşıma deneyleri için hücreler, kolajen ile kaplanmış Transwell ekleri üzerine 1x105 hücre/cm2 yoğunluğunda ekildi. Tohumlamadan yaklaşık 21 gün sonra, taşıma deneyleri için tek tabakalar kullanıldı. Bütünlükleri, ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., ABD) ile donatılmış bir EVOM ile tek tabakalar boyunca trans-epitelyal elektrik direncinin (TEER) ölçülmesiyle belirlendi. Caco-2 hücre tek tabakasının TEER değerlerinin 500 O∙cm2'yi aşması gerekiyordu.

Taşıma deneyleri

Tek tabaka, taşıma tamponu (10 mM HEPES, 1 mM sodyum piruvat, 10 mM glukoz, 3 mM CaCl2 ve 145 mM NaCl, pH 7.4 içeren P-tamponu) ile yıkandı ve daha sonra 20 dakika süreyle önceden inkübe edildi. 37 derece. Taşıma tamponunu çıkardıktan sonra, bazolateral (BL) yönlü çalışmalarda AP'de apikal (AP) odaya (1.5 mi) veya BL'den AP'ye yönlü çalışmalarda BL odasına (2.5 ml) test numuneleri içeren taze taşıma tamponu eklendi. HPLC kullanan AC, IS ve EC deneyleri için, farklı zaman aralıklarında (30, 60, 90 ve 120 dakika) her alıcı odasından bir kısım (300 ul) çıkarıldı. Alıcı odası, her örneklemeden sonra aynı hacimde taze önceden ısıtılmış (37 derece) taşıma tamponu ile dolduruldu. Toplanan örnekler daha sonra kullanılmak üzere -20 derecede saklandı. Biyoanaliz kullanılarak PRE belirlemesi için sadece 120. dakikada numuneler alındı. PRE, AC, IS ve EC'nin kararsızlığı nedeniyle, HPLC ile AC, IS ve EC içeriklerini ve PRE için numuneleri belirlemek amacıyla numuneleri stabilize etmek için yüzde 0,4 (a/h) C vitamini eklenmiştir. bioassay, numune alındıktan hemen sonra test edildi. Her örneğin görünen geçirgenlik katsayısı (Papp veya 'Papp) değeri hesaplandı.

Veri analizi

AC, IS ve EC'nin AP BL veya BLAP yönlerindeki Papp değerleri aşağıdaki denkleme göre hesaplanmıştır: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), burada Papp, HPLC tarafından belirlenen görünür geçirgenlik katsayısıdır (cm/s). (4Q/4t) alıcı tarafta test bileşiğinin (AC, IS veya EC) görünme oranıdır (μmol/s); A, ekin yüzey alanıdır (cm2); C0, verici taraftaki ilk test bileşiği konsantrasyonudur (μmol/ml). Spesifik olarak, 'Papp değerleri hesaplanırken "μmol" yerine kütle birimi "ug" kullanıldı. Veriler, ortalama ± SD olarak ifade edilir.

Sonuçlar

Cistanche Deserticola'dan PRE'de Acteoside, Isoacteoside ve Echinacoside Bileşimi

AC, IS ve EC, Cistanche türlerinin başlıca biyoaktif PhG'leri olarak kabul edildiğinden [8], içeriklerini HPLC-UV aracılığıyla PRE'de analiz ettik. Temsili kromatogram Şekil 1'de gösterilmektedir. Bu bileşenlerin tanımlanması, alıkonma sürelerinin ve UV spektrumunun, 334 nm dalga boyunda otantik standartlarınkilerle karşılaştırılmasına dayanıyordu. PRE'deki AC, IS ve EC içerikleri sırasıyla yüzde 26.60, yüzde 1.84 ve yüzde 32.83 idi. Böylece, bu üç bileşik PRE'nin yüzde 61,27'sini oluşturur; ayrıca, yukarıdaki sonuçlar, PRE'deki PhG içeriğinin yüzde 78.4 olduğunu göstermektedir. Bu nedenle AC, IS ve EC, PRE'deki PhG'lerin yaklaşık yüzde 80'ini oluşturur.

PRE, AC, IS ve EC'nin toplam anti-oksidatif kapasiteleri

CD'den PhG'lerin anti-oksidatif aktivitesine ilişkin çalışmalar bildirilmiştir [9] ve AC, IS ve EC, PRE'deki PhG'lerin yaklaşık yüzde 80'ini oluşturmaktadır. Böylece PRE, AC, IS ve EC'nin toplam anti-oksidatif kapasiteleri test edildi ve FRAP değerleri (x 10–6 mmol) kullanılarak ifade edildi. Şekil 2'de gösterildiği gibi, FRAP değeri 8 x 106 mmol olduğunda, PRE, AC, IS ve EC'nin nihai konsantrasyonları 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml ve 4.89 ug/ idi. ml, sırasıyla, bu dört örneğin toplam antioksidatif kapasitesinin şu şekilde sıralandığını gösterir: AC > EC > PRE > IS. PRE'nin biyoaktivitesi, aktif bileşen gruplarına (AIG) atfedilir. PRE'nin yaklaşık yüzde 60'ı için AC ve EC, PRE ve IS'den daha güçlü toplam anti-oksidatif aktivite gösterdi. IS (yüzde 1.84), PRE'nin çok küçük bir kısmını oluşturduğundan, zayıf anti-oksidatif IS gibi diğer bileşenler de PRE'de açıkça aktiftir. Şaşırtıcı bir şekilde, toplam anti-oksidatif aktivite, AC ve izomeri IS arasında yaklaşık 7-kat farklılık gösterdi, bu sadece fenolik hidroksil gruplarının sayısını [9] değil, aynı zamanda moleküldeki fenolik hidroksil gruplarının konumunun da anti -oksidatif etki.

Caco-2 tek katmanlarının doğrulanması

Caco-2 hücre tek tabaka sistemini doğrulamak için, propranolol (iyi taşınmış bir işaretleyici) ve Lucifer sarısının (kötü taşınmış bir işaret) Papp değerleri, Caco-2 tek tabakaları boyunca AP'den BL'ye sırasıyla 1.51 × 10–5 cm/s ve 2.8 × 10–7 cm/s olarak belirlendi ve bu değerler önceki raporlarda yayınlananlarla uyumluydu [17, 18]. Alkalin fosfataz aktivite testi ayrıca Caco-2 hücre tek tabakalarının kalitatif olarak ince bağırsak epiteliyle karşılaştırılabilir olduğunu doğruladı [19]

Acteoside, Isoacteoside ve Echinacosit'in geçirgenliği

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), zayıf emilen ilaçlarınki ise düşüktü (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

PRE'nin geçirgenliği

Yukarıdaki sonuçlar, PRE'nin toplam antioksidatif kapasitesinin, PRE'den gelen AIG'nin en azından yüzde 61.27'sinden kaynaklandığını göstermektedir. Böylece, PRE'nin TR'sini toplam antioksidan kapasitesinin konsantrasyon-etki eğrisine dayanarak değerlendirdik ve PRE'nin taşıma özelliklerini yansıtmak için 'Papp değerlerini hesapladık. AP!BL ve BL!AP için PRE'nin Papp değerleri (2.16 ± 0.26) × 10–7 cm/s ve (3.13 ± 0.29) × 10–7 cm/ idi. s, sırasıyla, bu bileşiğin zayıf geçirgen olduğunu gösterir. Ayrıca, 'Papp BL'nin AP'ye / 'Papp AP'nin PRE için BL'ye oranı 1.45 olduğu için dışarı akış veya aktif taşıma belirgin değildi [20]. Ayrıca, PRE'nin çift yönlü TR'si yaklaşık 300 ve 900 ug/ml arasında lineer olarak arttı (Şekil 5). Sonuçların yön tercihinin olmaması, PRE'nin ana taşıma mekanizmasının pasif difüzyon olduğunu göstermektedir.

Tartışma

Yüksek oranda saflaştırılmış ilaç ürünleriyle karşılaştırıldığında, PE genellikle çok farklı fizyokimyasal özelliklere sahip yüzlerce bileşenden oluşan bir karışımdır. Bu nedenle PE, PE'nin taşıma özelliklerinin analizini engelleyen karmaşık AIG'leri [21] nedeniyle sistematik, çok hedefli ve çok kanallı sinerjik eylem uygular. PE'nin taşıma özelliklerini daha bilimsel olarak değerlendirmek için, bazı araştırmacılar PE'de tek bir bileşen yerine birden çok bileşen tanımlamıştır [22-24]. Bununla birlikte, sınırlı sayıda bileşen PE'yi bir bütün olarak yansıtamaz. Ancak PE'deki tüm bileşenlerin belirlenmesi mümkün değildir. Ayrıca, PE'deki çeşitli bileşenler tamamen farklı taşıma özellikleri gösterirse, PE'nin bütünsel taşıma özelliklerini belirlemek zor olacaktır.

1990'larda, antimikrobiyal ajanların TR'sini değerlendirmek için biyo-tahlil sistemleri kullanıldı [25]. 2005 yılına kadar, Eguchi ve meslektaşları [26], farklılaşmış Caco-2 hücrelerinden BL ortamı kullanarak havuç ekstraktının anti-oksidatif aktivitesini değerlendirdi; bu yaklaşım, in vivo durumları yansıtmak için daha uygundur.

PhG'lerin aktivitesine ilişkin önceki bir rapora [9] ve sonuçlarımıza (Şekil 2) dayanarak, PRE'deki AIG'nin TR'si, alıcı odadaki ortamın toplam antioksidatif kapasitesi belirlenerek değerlendirilebilir. Taşıma deneylerinden sonra, PRE'nin TR'sinin her iki yönde de benzer olduğunu ve bu taşınımın doymamış olduğunu ve zayıf bir şekilde emildiğini bulduk ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3]="" ve="" bu,="" bir="" konsantrasyon="" gradyanından="" aşağı="" pasif="" difüzyonun="" pre'nin="" ana="" taşıma="" mekanizması="" olduğunu="" öne="" sürerek="" dışa="" akışı="" göstermedi="" (şekil="" 5).="" ayrıca,="" pre'nin="" taşıma="" özellikleri,="" pre'de="" anti-oksidatif="" aktivite="" sergileyen="" etkili="" bileşenler="" olan="" ac,="" is="" ve="" ec'ninkilerle="" uyumludur="" (şekil="" 4="" ve="" tablo="" 4).="" bu="" sonuç="" bekleniyordu="" ve="" mevcut="" biyo-tahlil="" sisteminin,="" farklılaşmış="" caco{11}}="" hücrelerinde="" pre'de="" aig'nin="" taşıma="" özelliklerinin="" değerlendirilmesi="" için="" uygun="" ve="" güvenilir="" olduğunu="">

Tek bir bileşiğin taşınmasını yansıtmak için yaygın olarak kullanılan kanonik Papp değerinin aksine, konsantrasyon-etki eğrisine dayalı TR'den elde edilen Papp değeri, sadece sağlam bir yapıya sahip tek tabakalara nüfuz eden bileşenleri değil, aynı zamanda bileşenlerin metabolitleri, kimyasal olarak bozulmuş ürünler ve hatta hedef biyoaktiviteyi etkileyebilecek stimülasyona yanıt olarak Caco-2 hücrelerinden salgılanan bazı sitokinler gibi hedef aktivite ile ilgili diğer faktörleri de içerir. Bu nedenle, yalnızca taşınan bozulmamış bileşenler yerine yukarıda belirtilen çok faktörlü 'Papp değerini' belirler. Bu nedenle, 'Papp, Vivo durumlarında kanonik Papp değerinden [26] daha güçlü korelasyon gösterebilir. Bu çalışmada, PRE'nin 'Papp değerine göre pasif olarak dağılmış ve zayıf bir şekilde emilen yapısını açıkladık ve bu yapı, CD'nin yüksek dozu ve uzun klinik tedavi süresi ile ilişkili olabilir [27]. Bununla birlikte, sadece PhG'ler değil, CD'deki çoğu AIG'nin taşıma özellikleri tanımlandığında, bu bulgular CD uygulamasında klinisyenler için daha sistematik rehberlik sağlayacaktır.

Bununla birlikte, seçilen biyoaktivite öğesi, PE'nin taşıma özelliklerini değerlendirmek için bir biyo-tahlil sisteminin kurulması için bir zorluk teşkil eden alıcı odasının ortamında tespit edilmek üzere yeterince hassas olmalıdır. Ayrıca, biyoaktivite mümkün olduğu kadar çok bileşene bağlı olmalıdır. Çalışmamızda, toplam anti-oksidatif kapasite tahlili diğer birkaç yöntemden daha uygundu (S1 Şekil). Ancak buna rağmen, testimiz PRE'nin TR'sini yalnızca 120 dakikada saptayabilir.

Toplu olarak, bu çalışma, farklılaşmış Caco-2 hücrelerinde PRE'nin bağırsak geçirgenliğini değerlendirmek için yeni bir biyo-tahlil sistemi kurdu. Elde edilen sonuçlar, dışarı akış olmaksızın bir konsantrasyon gradyanından aşağı doğru zayıf emilen pasif difüzyonun, CH'de PhG'lerin klinik uygulaması için farmakokinetik temeli sağlayan PRE'nin ana taşıma mekanizması olduğunu gösterdi (Şekil 5). TR'yi değerlendirmek ve böylece PE'lerde AIG'nin bağırsak taşıma özelliğini değerlendirmek için 'Papp değerlerini hesaplamak için yeni bir biyo-tahlil sisteminin kullanılması açıkça mümkündür. Bu yaklaşım, uygun biyoaktivite verilen diğer PE için de uygun olabilir.

Destek Bilgisi

S1 Şekil PRE'nin (A) süperoksit anyonu, (B) hidroksil radikali, (C) lipid peroksidasyon ürünü ve (D) DPPH radikali üzerindeki etkileri. Tahlil prosedürleri, taşıma tamponu kullanılmadan önceki raporlara [1, 2] göre yapıldı. IC50 (yüzde 50 engelleme konsantrasyonu) ve SC50 (yüzde 50 temizleme konsantrasyonu) değerleri, standart konsantrasyon-tepki eğrilerine göre hesaplandı. (DOCX)

Yazar Katkıları

Deneyleri tasarladı ve tasarladı: YG XC YQ. Deneyleri gerçekleştirdi: YG CZ FL LF RC YS. Verileri analiz etti: CZ YG YQ. Katkıda bulunan reaktifler/malzemeler/analiz araçları: RC. Makaleyi yazdı: YG YQ

Farmakoloji ve Toksikoloji Araştırma Merkezi Departmanı, Tıbbi Bitki Geliştirme Enstitüsü, Çin Tıp Bilimleri Akademisi ve Pekin Birliği Tıp Fakültesi, Pekin, Çin Halk Cumhuriyeti,

Heilongjiang Çin Tıbbı Üniversitesi, Harbin, Heilongjiang, Çin Halk Cumhuriyeti