Sepsisli Sıçanlarda Cistanche'nin Akciğer, Karaciğer ve Timüsün Fonksiyonel Hasarı Üzerine Etkileri

Soyut

Amaç: Cistanche ekstraktının akut üzerine etkilerini incelemekkaraciğer, septik şoklu sıçanlarda akciğer ve timus fonksiyon hasarı ve septik şokun tedavisini araştırmak.

Çalışma planı: Septik şok modelini çoğaltmak için çekal ligasyon ve perforasyon (CLP) kullanın, septik şok modelinin patolojik değişikliklerini gözlemleyinkaraciğer, akciğer ve timus dokusunun biyolojik göstergelerini ve akut karaciğer, akciğer ve timus hasarının etkisini ve etkisini belirlerCistanche (Sistanşe)hulâsa.

Bulgular: Sıçanlarda CLP'den sonra, normal salin grubundaki hepatositlerin mitokondriyal durum III, P/O oranı ve solunum kontrol oranı anlamlı olarak azaldı ve mitokondriyal membran sodyum-potasyum kalsiyum magnezyum-ATPaz aktivitesi anlamlı olarak azaldı; akciğer ıslak-kuru ağırlık oranı, alveoler iletişim geçirgenlik indeksi, pulmoner kapiller geçirgenlik ve akciğer dokusunun malondialdehiti anlamlı olarak artmış ve süperoksit dismutaz anlamlı olarak azalmıştır; timosit apoptozu ve DNA fragmantasyonu yüzdesi önemli ölçüde artmıştır. İçindeCistanche (Sistanşe)Uygulama grubunda, yukarıdaki göstergeler normal salin grubuna göre anlamlı derecede iyileşmiş, yapay cerrahi grubunun seviyesine ulaşmış veya bu seviyeye yaklaşmıştır.

Son:Cistanche (Sistanşe)akut üzerinde iyi bir koruyucu etkiye sahiptirkaraciğer, akciğer vetimus yaralanmasıseptik şok sıçanlarında. Mekanizması, oksijen serbest radikallerinin dokulara verdiği zararı azaltmak, hücre zarı fonksiyonunu iyileştirmek ve vücudun bağışıklık fonksiyonunu ve stres yeteneğini geliştirmek olabilir.

Anahtar kelime -ler:

bitki özleri/farmakolojiCistanche (Sistanşe)çölikola / farmakoloji sepsis / komplikasyon şok, sepsis / Çin tıbbı tedavisi sıçanları.

Bu çalışmada gözlemlenen etkilerCistanche (Sistanşe)akut akciğerli septik şok modeli sıçanlarda,karaciğerve timus ve diğer organ hasarlarını, hücre fonksiyonlarını korumaya çalışırken bir atılım olarak, hücre fonksiyonunun etkisini ve mekanizmasını araştırır.Cistanche (Sistanşe)Sepsiste, sepsis için etkili koruyucu tedavi ilaçları geliştirmek amacıyla yararlı araştırmalar yapın.

Daha fazla bilgi için lütfen iletişime geçin:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa böbrek hastalığını önler, örneği almak için buraya tıklayın

1 . Gereç ve yöntemler

1.1 İlaçlar, reaktifler ve alet ilaçları:

Sodyum pentobarbital (Çin Ulusal İlaç Grubu Şangay Kimyasal Reaktif Şirketi), malondialdehit (MDA) kiti, süperoksit dismutaz (SOD) kiti, ATPaz reaktifi (Nanjing Jiancheng Biyoloji Mühendisliği Enstitüsü),Cistanche (Sistanşe)Three Gorges Üniversitesi, Geleneksel Çin Tıbbı Bölümü'nden Dr. Wang Chizhi tarafından değerlendirildi) Su kaynatma, Evans Blue. Cihaz: Hitachi H-600 transmisyon elektron mikroskobu, akış sitometresi (EPICS, Beckman Coulter), 721 tipi spektrofotometre.

1.2 Cistanche deserticola ekstraktının hazırlanması

ÖzüCistanche (Sistanşe)\ Liç yöntemi ile hazırlanmıştır. Kuru ağırlığın 200g'ını alınCistanche (Sistanşe), bir beherin içine koyun, 1: 1O oranında damıtılmış su ekleyin, 30 dakika ila 1 saat bekletin, 1 saat boyunca elektrikli bir ocakta ısıtın, filtreleyin ve işlemi iki kez tekrarlayın. Toplanan filtrat buharlaşmak için ısıtıldı ve 1g / mL'ye konsantre edildi ve daha sonra kullanılmak üzere 4 ° C'de bir buzdolabında kapatıldı ve saklandı.

1.3 Hayvanlar ve septisemi hayvan modelleri

Sağlıklı erkek SD sıçanları (Huazhong Bilim ve Teknoloji Üniversitesi Deneysel Hayvan Merkezi tarafından sağlanan, 200 25 og ağırlığında. Hayvanlar rastgele 3 gruba ayrıldı: sahte operasyon grubu (, z-8), normal salin kontrol grubu (, z-8) veCistanche (Sistanşe)çölicolagrup (bir 8). Sahte operasyon grubuna ve kontrol grubuna gavage ile normal salin (1.0 mL/kg), uygulama grubuna ise 1 g/mL (uygulama dozu 200 mg/kg) verildi.Cistanche (Sistanşe)gavage, ld 2 kez ve 15 günlük fizyolojiye kadar beslenir. Salin kontrol grubu veCistanche (Sistanşe) çölicolagrup, sepsis modelini çoğaltmak için çekal ligasyon ve perforasyon kullandı. Ameliyattan önce hayvanlar 12 saat boyunca ücretsiz içme suyuna sahipti ve oruç tutuyorlardı.

1.4 Sıçan karaciğer mitokondriyal ATPaz aktivitesinin ve karaciğer mitokondriyal solunum fonksiyonunun ölçülmesi

Ameliyattan 16 saat sonra, 6g sıçankaraciğerhızlı bir şekilde 0°C ayırma ortamına yerleştirildi (250mmol sakaroz, 2mmol etoksi-etil piperazin 2-etil sülfonik asit, 0.1mmol etilendiamintetraasetik asit, pH 7.4), diferansiyel bir oran kullanılarak Sıçan mitokondrisi düşük sıcaklıkta santrifüjlü ayırma ile hazırlandı. ATPaz aktivitesini ölçmek için fosfor belirleme yöntemini [2] kullanın. JYD-IA çözünmüş oksijen ölçer ile mitokondriyal redoks reaksiyon eğrisini kaydetmek için Clark oksijen elektrodu yöntemi [3] kullanıldı ve evre III ve evre IV'ün solunum hızı, solunum kontrol hızı (RCR) ve fosfor-oksijen oranı (ADlP / 0) hesaplandı.

1.5 Sıçan akciğer histolojisi ve solunum fonksiyon ölçümü

16 saat sonra göğüs açıldı ve akciğerin sol lobu çıkarıldı. Islak ağırlık tartıldıktan sonra, ağırlık sabit olana kadar fırında (80 ° C, 20 saat) pişirildi ve kuru ağırlık hesaplandı. Protein içeriği için, akciğer geçirgenlik indeksini hesaplayın (alveoler lavaj sıvısı proteini / ga plazma proteini, LPI). Zhou ve ark. [4] tarafından tanıtılan intravenöz enjeksiyon Evans mavi yöntemine göre, sıçan pulmoner vasküler geçirgenliğindeki (PVP) değişiklikler ölçülmüştür. Sıçan akciğer dokusunda malondialdehitin (MDA) aktivitesini belirlemek için tiyobarbitürik asit (TBA) yöntemi Ls kullanıldı. SOD aktivitesini belirlemek için ksantin oksidaz yönteminin [6] kullanılması.

1.6 Timus dokusu

Fizik muayene ve hücre apoptoz oranının belirlenmesi Her grupta 2 ila 3 sıçan ameliyattan sonra ilgili zamanda feda edildi, sağlam timus izole edildi ve rutin parafin bölümleri yapıldı, HE boyandı ve ışık mikroskobu altında gözlendi; 2.5 glutaraldehit fiksasyonu, elektron mikroskobu bölümü yapın ve iletim elektron mikroskobu ile gözlemleyin. Timosit süspansiyonunun bir başka preparatı, apoptotik bölgede bulunan hücre sayısının akış sitometrisinin tespiti, apoptotik hücrelerin yüzdesini alır. Burton ve ark.'ya göre. L7] yöntemi (difenilamin yöntemi), mikroplaka okuyucu timosit genomik DNA parçalanmasının yüzdesini tespit eder ve hesaplar.

1.7 İstatistiksel işleme

Deneysel veriler ortalama ± standart sapma ± s) cinsinden ifade edilmektedir. SPSS yazılımı tek yönlü varyans analizi ve korelasyon analizi yapar. P<0.05 indicates="" a="" statistical="">

2. Sonuç

2.1 Karaciğer mitokondrisi III. durumu, RCR ve P/O oranı kontrol grubundaki değişiklikler

Durum III'ün solunum hızı sahte operasyon grubundan anlamlı olarak düşüktü (P<0.01). the="" breathing="" rate="" of="" state="" iv="" was="" not="" significantly="" changed="" compared="" with="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group.="" as="" a="" result,="" the="" rcr="" of="" the="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group=""><0.01). the="" rcr="" in="" the="">Cistanche (Sistanşe)tedavi grubu sahte operasyon grubuna daha yakındı. Kontrol grubundaki ADP/0 oranı azaldı ve Cistanche tedavi grubunun oranı iyileşti. Sahte operasyon grubu ile karşılaştırıldığında anlamlı fark saptandı (P<>

2.2 Cistanche'nin mitokondriyal ATPaz'ın aktivitesi üzerindeki etkisi

Kontrol grubundaki hepatositlerin mitokondriyal membran kalsiyum-ATPaz, sodyum-potasyum ATPaz, magnezyum-ATPaz ve kalsiyum-magnezyum-ATPaz aktiviteleri sahte operasyon grubundakilere göre anlamlı derecede düşüktü. Enzim aktiviteleriCistanche (Sistanşe)Tedavi grubu, ilgili kontrol grubundan anlamlı olarak daha yüksekti ve sahte operasyon grubunun seviyesine ulaştı.

2.3 Cistanche'nin timositlerin apoptozu üzerindeki etkisi

Akım sitometrisinin sonuçları, sahte operasyon grubuyla karşılaştırıldığında, kontrol grubundaki timositlerin apoptozunun operasyondan sonra anlamlı olarak arttığını,Cistanche (Sistanşe)deserticola ekstresi apoptoz oranını etkili bir şekilde azaltabilir ve DNA parçalanma yüzdesi akış sitometrisi ile tespit edilene benzerdi. Sonuçlar temelde aynıdır (Tablo 4).

2.4 Cistanche'nin timüsün histolojik değişiklikleri üzerindeki etkisi

Sahte operasyon grubundaki timusun parafin kesiti gözleminde belirgin patolojik değişiklikler görülmedi. Timositler timik kortekste yoğun bir şekilde dağılmış, çekirdek yuvarlak, koyu mavi lekeli ve daha az sitoplazma; medullaya geçtikten sonra, çekirdek yavaş yavaş büyüdü ve daha hafif lekeli Epitelyal retiküler hücreler baskındır. Kontrol grubunda, hayvanların timik korteksi seyrek olarak hücrelerden oluşuyordu, lenfositler azaldı ve makrofajlar arttı. Fokal nekroz ve dağınık hücre fragmanları lokal olarak görüldü. Timus medulla hücreleri önemli ölçüde azalmadı ve hücreler kortikal alandan daha yoğun bir şekilde dağıldı ve "kortikal-medüller inversiyon" fenomenini oluşturdu. İçindeki hayvanların timosit parçalarıCistanche (Sistanşe)-uygulanan grup anlamlı olarak azaldı ve "korteks ve pulpa inversiyonu" fenomeni de önemli ölçüde iyileşti.

Kontrol grubunun elektron mikroskobik gözlemi, hücre hacminin çoğunun azaldığını, hücre yüzeyinin küçüldüğünü, kabardığını, kromatin aglomere olduğunu, bazı hücrelerin hilal şeklinde olduğunu, apoptotik cisimlerin oluştuğunu ve hücre nekrozu ve lizisin yaygın olduğunu göstermiştir. İçindeCistanche (Sistanşe)Tedavi grubunda, hücre morfolojisindeki değişiklikler anlamlı olarak azalmış, hücre nekrozu ve lizis olgusu anlamlı olarak iyileşmiştir.

3. Tartışma

Multipl organ disfonksiyon sendromları, septik şokun geç evresinde geri dönüşümsüz durumun ve yüksek mortalitenin temel nedenidir. Organ fonksiyonunun korunması, septik şokun yüksek klinik mortalitesini azaltmak için büyük önem taşımaktadır. Cistanche, ülkemizin geleneksel bir Çin bitkisel ilacıdır. İlk olarak "Shenlong Materia Medica" da yayınlandı. Özü ve kanı beslemek, böbreği beslemek ve yang'ı güçlendirmek için ünlü geleneksel Çin ilaçlarından biridir. Modern farmakolojik çalışmalar, vücudun bağışıklık fonksiyonunu ve stresini iyileştirebileceğini, DNA sentezini teşvik edebileceğini, 7 radyasyona direnebileceğini, yaşlanmaya direnebileceğini, hücresel DNA sentezi oranını artırabileceğini ve doku hücrelerini koruyabileceğini göstermiştir. İçinde bulunan ana bileşenler, serbest radikalleri etkili bir şekilde uzaklaştırabilen Cistanche Polysaccharid (cDPS) ve D-mannitol'ü içerir.Cistanche (Sistanşe)polisakkaritler ayrıca T ve B lenfositlerinin proliferasyonunu teşvik edebilir ve fare timositlerinin ConA ve PHA ile proliferasyonunu sinerjik olarak uyarabilir. Bu deney, septik şokta önemli hayati organların işlevini iyileştirme ve koruma temel noktasına ve TCM'nin vücudu güçlendirme fikrine, objektif ve hassas tespit yöntemlerini kullanarak etkisini gözlemlemeye dayanmaktadır.Cistanche (Sistanşe)III. Durumu hakkındakaraciğerseptik şok sıçanlarında mitokondri, solunum kontrol hızı (RCR), P/O oranı, membran ATPaz ve akciğer geçirgenlik indeksi, pulmoner vasküler geçirgenlik, akciğer dokusu MDA, SOD aktivitesi, timosit apoptozisi. Deneysel sonuçlar şunu gösteriyor:Cistanche (Sistanşe)artabilirkaraciğermitokondriyal RCR, P / O oranı, arttırmakkaraciğermitokondriyal solunum fonksiyonu, mitokondriyal solunum zincirinde elektron transferini hızlandırır, oksidatif fosforilasyon ve membran ATPaz aktivitesinin bağlanma derecesini arttırır ve hücre içi ATP sentezini arttırır. Cistanche uygulama grubunda, akciğer geçirgenlik indeksi ve pulmoner vasküler geçirgenlik önemli ölçüde azaldı, akciğer dokusunun malondialdehit aktivitesi azaldı ve süperoksit dismutaz anlamlı olarak arttı. Cistanche'nin antioksidan etkisi sayesinde oksijen serbest radikallerinin akciğer doku hücrelerine verdiği zararı azaltabileceği ve akciğer hasarı üzerinde iyi bir koruyucu etkiye sahip olduğu öne sürülmektedir. Septik şokta, timositler, özellikle olgunlaşmamış T-lenfositler, çok sayıda apoptoz, olgun lenfositlerin periferik lenfoid organlara salınımının azalmasına neden olabilir ve daha sonra doğrudan veya dolaylı olarak vücudun bağışıklık fonksiyonuna zarar verebilir. Septik şokta anormal timosit apoptozunun düzeltilmesi, vücudun bağışıklığını arttırmak için faydalıdır. Bu deneysel çalışma,Cistanche (Sistanşe)ekstrakt, timositlerin apoptozunu önemli ölçüde artırabilir ve septisemi hayvanlarının timositleri üzerinde önemli bir koruyucu etkiye sahiptir. Ayrıca, enfeksiyon sürecinde vücudun bağışıklığını arttırır ve yabancı toksinlerin önemli organlara verdiği zararı azaltır. Ayrıca, ilaç grubunun kan basıncının önemli ölçüde iyileştiğini ve ölüm oranının önemli ölçüde azaldığını bulduk. Cistanche ve Cistanche, karaciğer ve akciğer hücrelerinin işlevini arttırdı ve timositlerin apoptozunu azalttı. Anlamlı bir pozitif korelasyon vardır, bu da şunu gösterir:Cistanche (Sistanşe)Vücudun hayati organlarının işlevlerini iyileştirebilir ve vücudun bağışıklığını artırabilir, septik şok tedavisinde Cistanche için önemli bir farmakolojik temel olabilir.

Cistanche (Sistanşe)akut organ hasarı üzerinde önemli bir koruyucu etkiye sahiptir ve mekanizması şunlar olabilir: (1) membran ester peroksidasyonuna direnir, membran stabilitesini arttırır ve serbest radikallerin membran yapısına verdiği zararı azaltır. (2) Doku nükleik asit sentezini teşvik eder ve nükleik asidin ayrışmasını ve yok edilmesini yavaşlatır, protein sentezini teşvik eder ve doku hücrelerinin onarımını ve yenilenmesini hızlandırır. (3) Vücudun bağışıklık fonksiyonunu güçlendirir ve patojenik faktörlerin neden olduğu vücuda verilen hasarı azaltır. (4) Doku hücrelerinin aşırı apoptozunu inhibe eder. (5) Vücudun mikrosirkülasyonunu iyileştirmek ve hayati organların kan akışını sağlamak.

Başvuru

[1] Jin Huiming, çekal ligasyon ve perforasyondan sonra sepsis modeli [J]. Çin Hastalığı Fizyoloji Dergisi, 1990, 6(2):126.

[2]3 Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Modern tıp deney yöntemleri [M]. Kuzey Pekin: Halk Sağlığı Yayınevi, l997:342.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Modern tıp deney yöntemleri [M3. Kuzey Pekin: Halk Sağlığı Yayınları, 1997: 508-510.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing, vb. Modern klinik biyokimyasal inceleme

[5]. Pekin: Halk Ordusu Tıp Yayınları, 2001: 896-899.

[6] He Weijing, Li Wei, Bi Zheng, vb. Lösemi hücrelerinde apoptozun saptanması Difenilamin yöntemi [J]. Şangay Tıbbi Test Dergisi, 2001, 16 (3): 160.