SARS-CoV-2 Enfeksiyonuna Karşı Umut Veren Antiviral Ajanlar Olarak Flavonoidler: Mekanistik Bir İnceleme

Daha fazla bilgi için. İletişimtina.xiang@wecistanche.com

Soyut: 2019'da yeni teşhis edilen bir koronavirüs(COVID-19) keşfinden bu yana tüm insan faaliyetlerini etkilemiştir.flavonoidlerİnsan beslenmesinde yaygın olarak bulunan, dikkat çekici biyolojik aktiviteleri nedeniyle çok fazla dikkat çekmiştir. Bu makale, COVID-19 hastalığında flavonoidlerin faydalarının kapsamlı bir incelemesini sunmaktadır. Flavonoidlerin, grip, insan immün yetmezlik virüsü (HIV), şiddetli akut solunum sendromu (SARS), Orta Doğu solunum sendromu (MERS) ve Ebola dahil olmak üzere benzer klinik belirtilere ve/veya farmakolojik tedavilere sahip beş RNA virüsü üzerinde daha önce bildirilen etkileri, düşünülen. Flavonoidler doğrudan etki ederantiviralvirüs enfektif döngüsünün farklı aşamalarını ve viral enfeksiyona ve sonraki komplikasyonlara karşı konak tepkilerini modüle ettiklerinde dolaylı etkileri engelledikleri özellikler. Flavonoidler, viral proteaz, RNA polimeraz, mRNA, virüs replikasyonu ve enfektivitenin inhibisyonu yoluyla antiviral aktivite göstermiştir. Bileşikler ayrıca interferonların, proinflamatuar sitokinlerin ve nükleer faktör-kB ve Jun N-terminal kinazlar gibi hücre altı inflamatuar yolların düzenlenmesi için de etkiliydi. Baicalin,kuersetin, ve türevleri, hesperidin ve kateşinler bu konuda en çok çalışılan flavonoidlerdir. Sonuç olarak, diyet flavonoidleri, COVID-19 enfeksiyonuna karşı umut verici tedavi seçenekleridir; bununla birlikte, bu bileşiklerin bu hastalık üzerindeki antiviral özelliklerini değerlendirmek için gelecekteki araştırmalar tavsiye edilmektedir.

anahtar kelimeler: iltihap;akciğer; oksidatif hasar; antiviral; polifenol

Daha fazla ürün öğrenmek için buraya tıklayın

1. Giriş

2019'un sonunda, Çin'den, ciddi akut solunum sendromuna (SARS) neden olan yeni bir koronavirüs (CoV) teşhisi konan ve COVID-19[1,2] olarak adlandırılan olağandışı pnömoni bildirildi. Daha sonra virüs (SARS-CoV-2) diğer ülkelere yayıldı ve 11 Mart 2020'de DSÖ tarafından pandemi ilan edildi [3]. buvirüsçoğunlukla solunum damlacıkları ile bulaşır ve şiddeti hafif ila şiddetli ölümcül semptomlar arasında değişir. Kuluçka dönemindeki asemptomatik olguların önemli bir bulaşma kaynağı olduğu düşünülmektedir [4]. Çoğu durumda, hafif semptomların çözülmesi 1-2 hafta alırken, ciddi vakalar ölüme yol açabilir [5].

SARS-CoV-2, solunum sistemini etkileyerek ateş ve kuru öksürüğe neden olur [4]; ancak virüs, başta kalp ve böbrekler olmak üzere organ yetmezliğine neden olabilir ve ayrıca ölüm oranını daha da artıran sitokin fırtınalarına neden olabilir. SARS-CoV-2'un viral yaşam döngüsü şunları içerir:

bağlanma, penetrasyon, biyosentez, olgunlaşma ve serbest bırakma. Bağlanmadan sonra viral RNA, replikasyon için hücre çekirdeğine girer ve viral mRNA, başak (S), zar (M), zarf (E) ve nükleokapsid (N) proteinleri dahil olmak üzere viral yapısal proteinler üretmeye başlar [6]. Akciğerlerde yüksek oranda eksprese edilen anjiyotensin dönüştürücü enzim 2(ACE2)reseptörünün de SARS-CoV için bir ko-reseptör olarak görev yaptığı gösterilmiştir [7].

SARS, MERS ve SARS-CoV-2, tümü RNA CoV'leridir. SARS-CoV-2 genomu, yarasa kaynaklı şiddetli akut solunum yolu sendromları (SARS) benzeri CoV'ler ile yüzde 88, SARS-CoV ile yüzde 79 ve MERS-CoV ile yüzde 50 benzer [8,9]. SARS-CoV-2 proteinleri, SARS-CoV ile yüzde 90 -100 homologtur; yine de orf10 ve orf8, SARS-CoV-2 arasında farklıdır ve SARS-CoV.Orf8, CoV'ler için bir yardımcı proteindir. Virüsün yayılma yeteneğini artıran altı iplikli bir alfa sarmal proteini oluşturur.SARS-CoV-2 orfla/b, başak, zarf, zar ve nükleoprotein de SARS-CoV'ninkilerle yakından ilişkilidir [10] .

SARS-CoV-2'ya karşı spesifik bir antiviral ajan bulunmadığından, COVID-19 tedavisi için şu anda mevcut antiviral ilaçlar değerlendirilmektedir. Remdesivir, 2015 yılında Ebola virüsü için özel olarak tanıtılan yeni bir antiviral ilaçtır. Viral RNA polimeraz üzerinde engelleyici bir etkiye sahiptir ve son zamanlarda COVID-19 tedavisi için bazı denemelerde kullanılmıştır [11]. Favipiravir, influenza ve Ebola virüsü üzerinde aynı mekanizma ile inhibitör etkiye sahiptir ve ayrıca SARS-CoV-2 [12-14] içinde değerlendirilir. Lopinavir bir viral proteaz inhibitörüdür ve ilk olarak HV tedavisi için geliştirilmiştir. In vitro çalışmalar, CoV ile enfekte olmuş hücrelerde lopinavirin inhibe edici bir etkisi olduğunu göstermiştir [15,16]; ancak sistematik incelemeler SARS-CoV'ye karşı herhangi bir yararlı etki göstermedi-2 [17].

Şifalı bitkiler, antik çağlardan beri antiviral ajanlar da dahil olmak üzere güvenilir bir doğal ilaç kaynağı olmuştur. Dünyanın her yerindeki farklı ülkelerin geleneksel tıp ve etnofarmakolojik çalışmaları, ilaç keşfi için her zaman yeni yollar açmıştır [18-22]. Konvansiyonel bir antiviral ajan olan oseltamivir, yıldız anasonunun (Illicium verum Hook.f.) ikincil bir metaboliti olan şikimik asidin bir türevidir. SARS-CoV-2 vakasında, in silico çalışmaları, bitkisel bileşenlerin [23-25] olası antiviral özelliklerini ortaya çıkarmıştır. Flavonoidler, insan beslenmesindeki çeşitli gıda ve sebzelerde yaygın olarak bulunan ve antiviral özellikler de dahil olmak üzere çok sayıda değerli farmakolojik aktiviteye sahip geniş bir fitokimyasallar sınıfıdır. Bu bileşiklerin viral yaşam döngüsünün temel aşamalarını hedefleyerek viral patogenezi engelleyebildiği gösterilmiştir [26]. Quercetin, kateşinler, kaempferol ve baicalein, antiviral özellikler sergileyen en önemli flavonoidlerin örnekleridir [18,27,28]. Bu çalışma, bu bileşiklerin benzer klinik belirtilere ve/veya grip, insan immün yetmezlik virüsü (HIV), şiddetli akut solunum sendromu (SARS), Orta Doğu solunum sendromu (MERS) ve Ebola.

2. Sonuçlar

antiviral aktiviteflavonoidlerin miktarı, virüsün flavonoidden doğrudan etkilendiği doğrudan antiviral etkiler ve flavonoidin viral enfeksiyona karşı konak savunma mekanizmalarını geliştirdiği dolaylı etkiler olarak kategorize edilebilir. Burada, flavonoidlerin altında yatan antiviral mekanizmalar, bu mekanizmaları gösteren en önemli flavonoidlere atıfta bulunularak tartışılmaktadır.

2.1.Doğrudan Antiviral Mekanizmalar

2.1.1. Viral Proteazın İnhibisyonu

Viral proteazlar, fonksiyonel proteinleri serbest bırakmak için belirli yerlerde viral poliprotein öncülerini parçalamak için kullanılır. Spesifik viral proteazların, konakçı protein translasyonunu önlemek için HIV'deki translasyon başlatma faktörleri (eF4 ve elF3d) dahil olmak üzere konakçı hücre proteinlerini parçaladığı da gösterilmiştir [29,30]. Koronavirüsler, 3-kimotripsin benzeri sistein(3CLpro), papain benzeri proteaz (PLpro) ve ana proteaz (M pro)[31] dahil olmak üzere üç tür viral proteaz üretir.3CLpro, SARS-CoV yaşamı için önemlidir döngüsü, PLpro, SARS-CoV-2 replikasyonunda rol oynar ve Mopar, SARS-CoV-2'daki fonksiyonel proteinlerin olgunlaşmasından sorumludur [32,33]. Sonuç olarak, bu moleküller, antiviral araştırmalarda ve ilaç keşfinde uygun ilaç hedefleridir [34].

Çeşitli gıdalarda bol miktarda flavonoid olan Kaempferol, 125 μM konsantrasyonda klinik SARS-CoV-2 izolatları ile enfekte olan Vero E6 hücrelerinde CPE'yi yaklaşık yüzde 88 oranında azalttı. Birleştirilmiş bir silico araştırması, SARS-CoV-2 3CLpro enziminin inhibisyonunun ana etki mekanizması olduğunu öne sürüyor [35]. E.coli'de eksprese edilen SARS-CoV ve MERS-CoV'nin 3CLpro ve PLpro'suna kaempferolün eklenmesi, bu enzimlerin inhibisyonu yoluyla antiviral etkilere neden olmuştur [36]. Park ve çalışma arkadaşları (2017), kaempferoldeki hidroksil grubunun varlığının, 3CLpro ve PLpro'nun inhibisyonu yoluyla daha güçlü bir antiviral aktiviteye neden olduğunu gösterdi [37]. Epigallocatechin gallate (EGCG), çayda (Camellia sinensis L.) bulunan antifungal, antibakteriyel ve antiviral özelliklere sahip bir flavonoiddir [38.39]. Çalışmalar, EGCG'nin ters transkriptaz (RT) aktivitesini, proteaz aktivitesini, p24'ü, viral girişi ve HIV ile enfekte olmuş THP-1 ve H9 hücrelerinde viral üretimi-1 inhibe ettiğini ve EGCG'nin lipozom modifikasyonunun onun inhibitörünü güçlendirdiğini göstermiştir. Etkileri. Hücresiz çalışmalar ayrıca EGCG ile tedaviden sonra proteaz kinetiklerinde önemli bir aşağı regülasyon gösterdi. EGCG'deki galloil grubunun antibakteriyel ve antiviral aktivitelerinden sorumlu olduğu düşünülmektedir [40]. Bir kalkon olan isoliquiritigenin, bakteriyel ve viral enfeksiyonlarda terapötik bir ajan olarak kullanılabilir [41]. Bu bileşik, SARS-CoV ve E.coli'de eksprese edilen MERS-CoV 3CLpro ve PLpro üzerinde inhibitör bir etki göstermiştir. Resorsinol halkası üzerinde bir prenil fonksiyonel grubun varlığı, proteazlarla hidrofobik etkileşimlerin oluşmasına izin verir [37]. Theaflavinler, çeşitli çay türlerinde bulunan polifenollerdir [42]. SARS-CoV rekombinant proteaz üzerindeki deneyler, IC50 değeri 9,5 uM olan theaflavin-3,3'-digallat ile tedaviden sonra 3CLpro aktivitesinde önemli bir azalma gösterdi. Bazı theaflavinlerde 3' pozisyonuna bağlanan gallat grubu, 3CL proaktif bölgesi ile etkileşim için gerekli olabilir [43]. Erythrina senegalensis DC'den ekstrakte edilen prenilisoflavonoidler. rekombinant HIV-1 proteaza karşı anti-proteaz aktivitesini değerlendirmek için kullanıldı. Sonuçlar, bileşiklerin HIV-1 rekombinant proteazı in vitro olarak 0,5 ila 30 μMIC50 değerleriyle inhibe edebildiğini gösterdi. Hidroksi ve prenil grupları HIV proteazın inhibisyonundan sorumlu olabilir [44]. Quercetin ve quercetin- -galaktozid, SARS-CoV, MERS-CoV ve HIV'de PLpro, 3CLpro, deubiquitination ve DelSGylation aktivitesini aşağı regüle etti-1. Hidroksil gruplarının konumu, anti-proteaz aktivitesinde etkili olabilir. 3,5,7,3' ve 4' pozisyonlarında beş hidroksil grubuna sahip kuersetin, viral proteazlar üzerinde güçlü bir inhibitör etki sergiledi; 3,7A' pozisyonlarında glikosil grubunun varlığı ise inhibitör etkiyi azaltmıştır [37,45].

2.1.2. Viral RNA Polimeraz ve Viral mRNA'nın İnhibisyonu

RNA bağımlı RNA polimeraz (RdRp), bir RNA dizisinden RNA replikasyonunu katalize eden önemli bir enzimdir [46]. Bu enzim tüm RNA virüslerinde ve bazı ökaryotlarda kodlanmıştır [47]. Virüsler zorunlu hücre içi parazitlerdir, yani hücrelerin dışında bağımsız olarak yaşayamazlar. Çoğaltma için gerekli olan protein üretimi için mRNA'ları çevirmek için hücresel çeviri ekipmanı kullanmaları gerekir. Bu nedenle, mRNA translasyonuna herhangi bir müdahale, viral replikasyonu, yayılmasını ve evrimi engelleyecektir [48].

Zandi ve arkadaşları tarafından yakın zamanda yapılan bir araştırma. Baicalin ve baicaleinin, Vero CCL-81 hücre hattında SARS-CoV-2 enfeksiyonuna karşı in vitro antiviral etkisini, baicalein tarafından daha yüksek potens ile RdRp'nin inhibisyonu yoluyla ortaya çıkardı. Ayrıca in silico değerlendirmeleri, bu iki bileşiğin, yeniden teslime kıyasla RdRp'ye daha yüksek bir afiniteye sahip olduğunu gösterdi: Baicalin ve baicalein'in bağlanma bölgesi de remdesivir'inkinden farklı görünüyor; bu nedenle, bu flavonoidler, remdesivir ile birlikte adjuvan tedavi olarak kullanılabilir [49]. Quercetin-7-O-glukozit(Q7G)'nin etkileri, standart antiviral ajan oseltamivir ile karşılaştırıldığında influenza virüsleri A ve B ile enfekte MDCK hücreleri üzerinde bir in vitro çalışmada değerlendirildi. Oseltamivir kontrollü bir ilaç olarak kullanıldı ve 25,4 ila 42,2 ug/mL IC50 değerleri ile orta düzeyde antiviral aktivite gösterdi; Q7G, influenza A ve B virüsünü 3.10 ug/mL ila 8.19 ug/mL IC50 değerleriyle inhibe etti. Oseltamivir ayrıca influenza B'ye karşı influenza A'dan daha zayıf bir aktivite göstermiştir; Q7G ise tüm influenza virüslerine karşı güçlü aktivite göstermiştir. Ek olarak, kantitatif PCR deneyleri, Q7G tedavisinden sonra oseltamivir ile karşılaştırıldığında viral RNA sentezinde daha yüksek bir düşüş bildirdi, bu da Q7G'nin viral RNA polimeraz üzerindeki inhibitör etkisini gösterir. Moleküler yerleştirme analizi, bu etkileşimin, Q7G'nin viral RNA polimerazın PB2 alt birimine bağlanmasından kaynaklandığını ortaya çıkardı [50].

Oroxylin A(OA), Oroxylum Indicum(L.)Kurz'da bulunan bir flavonoiddir. OA'nın MDCK hücrelerinde birkaç influenza A suşunu doza bağlı bir şekilde inhibe edebildiği gösterilmiştir. İnfluenza virüsü H1N1 ile enfekte olmuş farelerin OA ile oral tedavisi, 100 mg/kg günlük dozda yüzde 60.0 hayatta kalma oranı ile virüs kaynaklı ölümü, vücut ağırlığı kaybını ve akciğer hasarını da azalttı. OA'nın antiviral etkilerinin, H1N1 matrix1(M1)mRNA transkripsiyonunun ve protein sentezinin aşağı regülasyonu nedeniyle olduğu rapor edilmiştir (et al. 2018). M1 proteini, viral RNA'ya bağlanan ve RNA nükleoprotein çekirdeklerinin zar zarfı içine kapsüllenmesine aracılık edebilen viral zarf içindeki bir proteindir [51]. OA, protein sentezini inhibe edebilmesine rağmen, konak hücreye viral girişi veya konak hücre çekirdeğine nükleoprotein (NP) girişini engelleyemez [52]. Baicalin ve biochanin A, sırasıyla 18.79 ve 8.92 μM IC50 değerleri ile A549 hücrelerinde influenza H5N1 enfeksiyonunu inhibe edebilir. Bu etkiye, nükleer viral ribonükleoprotein (RNP) ihracatını baskılayarak aracılık etti [53]. Diğer çalışmalar ayrıca baicalinin influenza M1 protein ekspresyonunu aşağı regüle edebildiğini göstermiştir [54,55].

Konak cdc2-benzeri kinaz 1(CLK1), H1N1 influenza virüsü M2 geninin eklenmesinde kilit bir role sahiptir ve önemli bir anti-grip hedefidir. M2, influenza A virüsünün viral zarfındaki bir proton kanalıdır [56,57]. Pithecellobium clypearia'dan izole edilen gallocatechin-7-gallat'ın, viral M2 mRNA alternatif eklemedeki rolü nedeniyle bir anti-grip hedefi olan konak cdc2-benzeri kinaz 1'in (CLK1) bir inhibitörü olduğu gösterilmiştir. H1N1 virüsü ile enfekte olmuş ICR fareleri üzerinde 30 mg/kg'lık günlük dozda gallocatechin-7-gallat'ın etkisine ilişkin araştırmalar, 8 güne kadar önemli ölçüde daha yüksek bir hayatta kalma gösterdi. Ayrıca virüs kaynaklı akut akciğer hasarını ve kilo kaybını da engelledi. Ek olarak, H1N1-enfekte A549 hücreleri üzerindeki değerlendirmeler, viral NP ve M2 mRNA'larında önemli bir aşağı regülasyonu gösterdi. Ayrıca, virüs M2 gen alternatif ekleme için anahtar faktörler olan SF2/ASF ve SC35'in fosforilasyonu, gallocatechin-7-gallate [58] ile tedaviden sonra önemli ölçüde azaldı. Cirsimaritin (CST), Artemisia scoparia Waldst'tan bir flavonoid. ve Kitam, ribavirin için 3.4 ila 8.9 ug/mL ile karşılaştırıldığında 5.8 ila 11.1 ug/mL arasında değişen IC50 değerleri gösteren üç influenza virüsü suşu ile enfekte olmuş MDCK ve THP-1 hücreleri üzerindeki in vitro antiviral etkileri açısından değerlendirildi. Veriler, CST'nin influenza M2 ve protein ekspresyonunu doza bağımlı bir şekilde etkili bir şekilde azaltabildiğini, böylece CST'nin 20 ug/mL'deki potensinin standart antiviral ribavirin'in 10 uM'sinden daha yüksek olduğunu göstermiştir [59]. Luteolin, M2mRNA ekspresyonu üzerinde inhibitör etkisi olan başka bir flavonoiddir. Farklı influenza suşları ile enfekte olmuş MDCK hücrelerinde, 15 µM luteolin, hem H1N1 hem de H2N3 ile enfekte olmuş hücrelerde 10 µM oseltamivirden daha etkiliydi. Luteolin ayrıca, enfekte hücrelerde virüs girişine ve endositik yola aracılık eden influenza virüsü kaplama proteini I (COPI) ekspresyonunu da aşağı regüle etti [60]. Santin, Artemisia rupestris L.'den ekstrakte edilen bir flavonoiddir ve ayrıca doza bağlı bir şekilde M2 ​​mRNA ekspresyonunun baskılanması yoluyla anti-grip virüsü etkileri olduğu öne sürülmüştür [61].

Quercetin'in enfeksiyonun erken evrelerinde influenza enfeksiyonuna karşı olası bir terapötik ajan olabileceği ve böylece influenza virüsü profilaksisinde kullanılabileceği belirtilmiştir. Quercetin'in influenza virüsü A suşları ile enfekte olmuş MDCK ve A549 hücreleri üzerindeki etkileri üzerine yapılan araştırmalar, viral NP mRNA'yı doza bağlı bir şekilde inhibe edebileceğini ve en yüksek aktivite 50 μM konsantrasyonda 【62】 ortaya çıkarmıştır.

Araştırmalar, trisin(4'5,7-trihidroksi-3',5'-dimetoksiflavon)'un influenza A ve B suşlarına karşı antiviral aktiviteler sergilediğini göstermiştir. RT-PCR testleri, trisinin, influenza virüsü ile enfekte olmuş MDCK hücrelerinde M protein mRNA sentezini baskılayabildiğini gösterdi; nöraminidaz ve hemaglutinin biyosentezi üzerinde önemli bir etkisi yoktur. Viral mRNA sentezini engelleyebilen yüzde 50 etkili trisinin konsantrasyonu 3,4-10 uM idi.

influenza A virüsü suşları için ve influenza B virüsü için 4.9 μM. İnfluenza virüsü ile enfekte olmuş farelerde, 20 ug/kg dozunda trisin, vücut ağırlığı kaybını ve hayatta kalma süresini iyileştirmiştir [63].

2.1.3. Viral Giriş, Replikasyon ve Bulaşıcılık

RNA virüsleri, yaşam döngüleri için konakçı hücresel makineyi kullanan proteinleri kodlar. Bu konak hücre gereksinimlerinin anlaşılması, bize yalnızca virüsün kullandığı moleküler yollar hakkında bilgi vermekle kalmaz, aynı zamanda ilaç geliştirme için ek hedefler de sunar [64].

Bir in vitro çalışma, kuersetin ve isorhamnetinin SARS-CoV-2ACE2h hücrelerine giriş denemesi üzerindeki etkisini değerlendirdi. Akciğer hücrelerinde eksprese edilen ACE2, viral spike proteinin ortak reseptörüdür ve bu nedenle SARS-CoV'a karşı antiviral ajanların ana hedefidir-2. Bu iki flavonoidin ACE2'ye yüksek bağlanma afinitesine sahip olduğu ve daha sonra bu reseptöre spike protein bağlanmasının inhibisyonu yoluyla viral girişi azalttığı gözlendi [65]. Başka bir çalışma, baicaleinin Vero E6 hücrelerinde ve hACE2 transgenik farelerinde SARS-CoV-2 enfeksiyonu üzerindeki etkisini değerlendirdi. Hayvanlarda vücut ağırlığı kaybı ve akciğer hasarının yanı sıra in vitro ve in vivo viral replikasyonda önemli bir azalma gözlendi [66]. Dihidroksi-6'-metoksi-3',5'-dimetilkalkon ve mirisetin-3'5'-dimetil eter 3-O- -D-galaktopiranosid flavonoidlerdir Cleistocalyx operculate(Roxb.) Merry'den türetilmiştir. ve LM Perry. Sitopatik etki (CPE) azaltma tahlili, bu flavonoidlerin, MDCK hücrelerinde influenza virüsü H1N1'in viral replikasyonunu inhibe ettiğini gösterdi. Yapı-aktivite ilişkisi (SAR) çalışmaları, C-7 ve C-4'daki OH gruplarının, C-2 ve C-3 arasında bir çift bağın ve özellikle bir karbonil grubunun olduğunu göstermiştir. C-4 konumunda, flavonoidlerin [67] antiviral özelliklerini önemli ölçüde iyileştiren kritik fonksiyonel gruplardır. H1N1 virüsü ile enfekte olmuş MDCK hücrelerinde viral NP ekspresyonunun inhibisyonu. Eşit bir konsantrasyonda (30 uM), hem ribavirin hem de 3DSC, ribavirin daha güçlü bir etkiye sahip olsa da, NP ekspresyonunda önemli inhibisyon gösterdi [68]. Çalışmalar, biochanin A ve baicaleinin, viral replikasyonda yer alan bir enzim olan kaspaz-3 aktivasyonunu inhibe ettiğini göstermiştir [53,69]. Bu bileşikler ayrıca viral replikasyonda kritik olan viral RNP komplekslerinin nükleer ihracatını da engelleyebilir [53]. Biochanin A, viral replikasyona dahil olduğu gösterilen mitojenle aktive olan p38 ve NF-kB'ye karşı inhibitör bir etki gösterdi. NF kB ve p38, oksidatif stres nedeniyle aktive olur ve influenza A virüs replikasyonunu ve patolojisini etkilediği bilinmektedir [53,70]. İnfluenza virüsü ile enfekte olmuş MDCK hücrelerinin ve A549 hücrelerinin hücre kültürleri üzerinde yapılan araştırmalar, baicaleinin 20-80 ug/mL konsantrasyonlarında viral replikasyonu engelleyebileceğini gösterdi. İlginç bir şekilde baicalin, sırasıyla 40 ug/mL ve 60 ug/mL konsantrasyonlarda ribavirin ve oseltamivire benzer antiviral aktivite göstermiştir. Baicalin ayrıca in vivo olarak farelerin akciğerlerinde viral replikasyonu inhibe etti[71]. CST'nin çekirdekte NF-kB proteinini ve NF-KB fosforilasyonunu aşağı regüle ettiği gösterilmiştir [59]. NF-KB'nin önemli bir rolü olduğu zaten biliniyor.iltihap, oksidatif stresve konak bağışıklığının baskılanması [72]. NF-kB'nin aşağı regülasyonu, influenza virüsü de dahil olmak üzere çeşitli virüs türlerinde replikasyonu da engeller [73].

SARS-CoV-2 ile enfekte olmuş Vero E6 hücrelerinde naringenin, CPE'yi zamana ve konsantrasyona bağlı bir şekilde inhibe edebilir. Bu etkiye, viral girişi kolaylaştırarak SARS-CoV-2, Ebola ve MERS'in enfektivitesini içeren bir yol olan endo-lizozomal İki Gözenekli Kanalların (TPC'ler) inhibisyonu aracılık etmiştir [74]. EGCG, T hücrelerinde HIV replikasyonu üzerinde doza bağlı bir inhibitör etki （25,50 μM） göstermiştir; bununla birlikte viral replikasyonun inhibisyonu, RT inhibisyonundan doğrudan etkilenmedi. Fassina ve diğerleri, viral partiküllerin paketlenmesinde rol oynayan p24 enzimini analiz ettiler. Sonuçlar, HIV ile enfekte T lenfoblastlarında p24 konsantrasyonunun ve RT aktivitesinin aşağı regülasyonunu gösterdi. Aşağıdaki sonuçlara dayanarak, EGCG'nin viral enfeksiyonun aşağı regülasyonu yoluyla viral replikasyonu inhibe ettiği kaydedildi. EGCGon viral enfeksiyonunun kesin etkisi hakkında henüz kesinlik yoktur [75]. gp120 sinyali, yaygın olarak, önceden enfekte olmuş hücrelerde artan HIV-1 replikasyonu ile ilişkilidir[75]. Çalışmalar, genisteinin gp120 ve ardından HV-1 viral replikasyonu üzerindeki inhibitör etkisini göstermektedir. Uygulamadan sonra viral replikasyonda herhangi bir değişiklik olmadı.

genisteinin {{0}}.5 ug/mL konsantrasyonunda, ancak 5-10 ug/mL aralığında, genistein viral replikasyonu baskılayabilir [76]. Herbacitrin, Drosera peltata Thunb'dan elde edilen bir flavonoiddir. ve daha önce bir antiviral ajan olarak biliniyordu. Herbakitrinin, HIV-1 ile enfekte olmuş MT-4 ve MT-2 hücre kültürlerinde hem RT'yi hem de integrazı inhibe ederek farklı aşamalarda viral replikasyon blokajına neden olduğu gösterilmiştir. 21.5 ug/M'lik bir konsantrasyonda, herbasitrin R aktivitesini baskılayabilirken, 2.15 uM gibi daha düşük bir konsantrasyonda integrazı inhibe edebilir [77]. Erigeron breviscapus'tan saflaştırılan scutellarin, anti-HIV-1 aktivitesi olan bir flavonoiddir. Bu flavonoid, viral replikasyonun ana katılımcıları olarak HIV-1 RT aktivitesini ve hücre füzyonunu inhibe etti [Z8]. Hesperidin ve linarin, A halkasında rutinoz ve B halkasında metoksi (-OCH3) ikamesi olan flavonoidlerdir. İzokuersetin, enfekte MDCK hücrelerinde influenza A ve B virüs replikasyonunu inhibe ettiği gösterilmiştir. İzokuersetin ile amantadin kombinasyonu aynı zamanda influenza A virüsü ile enfekte olmuş MDCK hücrelerinde viral replikasyon üzerinde sadece düşük dozlarda (izokuersetin için 0,5 uM ve amantadin için 1 uM) sinerjistik bir etki göstermiştir. İzokuersetin ve amantadin uygulamasından sonra virüs titre değerleri yaklaşık 7.5 idi; artan izokersetin ve amantadin konsantrasyonları, virüs titreleri üzerindeki sinerjistik etkiyi 5 değerine düşürdü [79]. Houttuynia cordata'dan türetilen Q3R, anti-grip virüsü etkileri uygular. Q3R'nin influenza virüsü A ile enfekte olmuş MDCK hücreleri üzerindeki etkileri oseltamivir ile karşılaştırıldı. Pulmoner lezyonlar ve ödem Q3R tarafından oseltamivirden daha fazla inhibe edildi. Q3R ayrıca oseltamivire kıyasla daha yüksek bir etkinliğe sahipti. Q3R'nin influenza virüsü replikasyonu üzerindeki inhibitör etkisi, dolaylı ve viral partiküllerle etkileşim yoluyla olmuştur. Oseltamivir, 10 ug/mL'nin altındaki dozlarda influenza A virüsüne karşı yaklaşık yüzde 58, orta düzeyde antiviral aktivite ve yüzde 49'dan daha az zayıf antiviral aktivite gösterdi; Q3R ise 100 ug/mL'de yüzde 86 viral inhibisyon ve 10 ug/mL konsantrasyonlarda yüzde 66 inhibisyon gösterdi [80]. Quercetin 3- -OD-Glucoside(Q3G)'nin in vitro Ebola virüs replikasyonunu önlediği gösterilmiştir. Q3G'nin enfeksiyondan 30 dakika önce profilaktik olarak uygulanması, Ebola virüsünün önemli ölçüde önlenmesini gösterdi. Q3G ayrıca erken aşamalarda viral girişi de engelleyebilir. Dolayısıyla O3G, Ebola virüsü profilaksisi için etkili bir flavonoid olabilir [81].

2.2.Dolaylı Antiviral Etkiler

2.2.1. İnterferonlar Üzerindeki Etkisi

İnterferonlar (IFN'ler), virüsler, parazitler, bakteriler ve tümör hücreleri gibi birçok patojene yanıt olarak birkaç bağışıklık hücresi tarafından üretilen bir protein grubunu içerir. Tip I veya aside dayanıklı interferonlar (IFN- alt tipleri, IFN-, IFN-K, IFN-e, IFN-w ve IFN-t), tip II (IFN-y) dahil olmak üzere üç ana IFN sınıfı vardır. ve IFN-λ 【82-84】 olarak bilinen tip III IFN'ler. Doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin aktivasyonu, majör histokompatibilite kompleksi (MHC) moleküllerinin ekspresyonunun arttırılması, anjiyogenezin baskılanması gibi çok çeşitli biyolojik aktiviteler gösterirler. En önemli rolleri viral enfeksiyonlara müdahale etmektir [84,85].

Viral enfeksiyonun erken evrelerinde, IFN'ler doğuştan gelenbağışıklık sistemi. Son çalışmalar, COVID-19 hastalarında [86] tip I ve tip I IFN indüksiyonunda ve sinyalleşmesinde bir azalma olduğunu bildirmiştir. Bu tip IFN, inflamasyon bölgesine nötrofil göçünü azaltarak, antijen sunumunu artırarak, mononükleer makrofaj aracılı pro-inflamasyonu baskılayarak ve antijene özgü B ve T hücre yanıtlarının ilerlemesi için kazanılmış bağışıklığı aktive ederek antiviral etkiler göstermiştir. 86-90]. Bu nedenle, hastalığın erken evresinde IFN kullanımı, viral replikasyonu azaltarak COVID-19 semptomlarını azaltabilir. Araştırmacılar ayrıca ARDS'li COVID-19 hastalarında IFN- düzeylerinin artabileceğini bildirdi. IFN seviyelerindeki hızlı artış, proinflamatuar sitokinleri alveolar dokuya davet edebilir ve pulmoner inflamasyon ve akciğer hasarı ile sonuçlanabilir[90,91]. Bu nedenle, IFN'lerin ve diğer pro-inflamatuar sitokin yanıtlarının yukarı regülasyonu veya düzensizliği veya her ikisinin de SARS-CoV'nin ilerlemesinde ve patolojik özelliklerinde önemli bir rol oynayabileceği görülmektedir-2.

hadi al. Baicaleinin 7-O-glukuronidi olan bir glikosiloksi flavon olan baicalinin anti-grip etkilerini, influenza A virüsü enfeksiyonunun in vitro ve in vivo modelinde araştırmak. TNF reseptörü ile ilişkili faktör 6(TRAF6), IFN üretimi sinyal yolunda etkili bir aracıdır. TRAF6'nın aşırı ekspresyonu, tip I IFN üretiminin artmasına neden olur [54]. MikroRNA'lar (miRNA'lar), transkripsiyon sonrası gen regülasyonunu kontrol eden küçük moleküllerdir [92]. miR-146a'nın inflamasyonda düzenleyici bir rolü olduğu gösterilmiştir [93]. miR-146a, TRAF6'nın aşağı regülasyonu yoluyla H1N1 ve H3N2'nin replikasyonunu artırabilir. Baicalin (20 ug/mL), miR-146a ifadesinde, viral NP'de, Ml protein seviyelerinde, viral titrede önemli bir azalmaya ve ayrıca farelerin hayatta kalma oranında artışa işaret etti [54]. Başka bir çalışmada, Nayak ve meslektaşları, viral protein NS1'i düzenleyerek baicalinin anti-grip virüsü (H1N1-pdm09) aktivitesini temsil etti ve bu da interferon düzenleyici faktör 3（IRF-3）, IFN'nin yukarı regülasyonu ile sonuçlandı. - ve IFN- . Bu IFN yukarı regülasyonu, viral transkriptleri ve IL-8 ve TNF-x [55] dahil olmak üzere proinflamatuar sitokinlerin ekspresyonunu azaltabilen viral replikasyonu azalttı.

Ding et al. erkek sıçanlarda influenza A virüsünün (H1N1) neden olduğu akciğer hasarında bir flavanon glikozit olan hesperidin'in etkilerini araştırmak için bir çalışma tasarladı. Sonuçlar, hesperidinin, MAPK sinyal yolaklarını baskılayarak, IFN-, TNF-x ve IL-6 dahil olmak üzere proinflamatuar sitokin üretimini azaltarak akciğer hasarını hafiflettiğini gösterdi. Hesperidin ayrıca H1N1 ile enfekte pulmoner mikrovasküler endotelyal hücrelerde IFN-'yi azalttı [94]. Kim ve ark. izokersetin, IFN-, iNOS, RANTES, virüs titreleri, viral bronşit ve bronşiyoliti azaltarak farelerde H1N1 virüsünün neden olduğu akciğer hasarını etkili bir şekilde hafifletmiştir [79].

Oroxylum Indicum(L.)Kurz kaynaklı Oroxylin A (OA), IFN- ve IFN- 【52】 yukarı regülasyonu yoluyla farelerde influenza A H1NI virüsünün neden olduğu akciğer hasarını önledi. Scutellaria baicalensis Georgi'den izole edilen başka bir flavonoid olan Wogonin, AMPKyollarının düzenlenmesiyle önemli bir anti-grip aktivitesi sergiledi. Wogonin ayrıca MDCK ve A549 ile enfekte olmuş hücrelerde miksovirüs direnç geni A (MxA) ve 2-5' oligoadenilat sentetaz (OAS) dahil olmak üzere IFN-, IFN-λl ve IFN aşağı akış moleküllerinin düzenlenmesini arttırdı [95].

2.2.2. Proinflamatuar Sitokinler (TNF, IL ve MCP) Üzerindeki Etkisi

CoV'ler, birkaç yardımcı proteini kodlayan bazı açık okuma çerçeveleri içerir. Bu yardımcı proteinlerin, IFN sinyali ve proinflamatuar sitokinler gibi inflamatuar yolakları modüle ettiği gösterilmiştir [96]. COVID-19 prognozunun interlökinler, IFNy ve TNF- [97] dahil olmak üzere proinflamatuar sitokinlerin salgılanmasıyla kötüleşebileceği açıklanmıştır. Blanco-Mello ve arkadaşları, uygun olmayan bağışıklık tepkisinin virüs replikasyonuna ve ciddi COVID tipine bağlı komplikasyonlara yardımcı olabileceğini belirtti-19 [98]. Ruan ve arkadaşları ayrıca IL-6 gibi inflamatuar sitokinlerdeki bir artışın ARDS, solunum yetmezliği ve olumsuz klinik sonuçlarla ilişkili olduğunu gösterdi [99]. Akciğer hasarının neden olduğu solunum yetmezliği, bağışıklık hücrelerinin akciğere infiltrasyonundan sonra proinflamatuar sitokinlerin aşırı üretiminin bir sonucudur [100]. Sitokin fırtınası, enfeksiyonlar ve bazı ilaçlar gibi çok çeşitli faktörlerle ilişkili sistemik bir inflamatuar yanıttır. Birkaç çalışma, COVID-19 hastalarında [101-103] sitokin fırtınası, şiddetli inflamasyon ve çoklu organ yetmezliği arasında önemli bir bağlantı olduğunu gösterdi. Doğuştan ve adaptif bağışıklık sistemleriyle SARS-CoV-2 virüs tanıma, inflamatuar sitokinlerin aktivasyonu ve üretimi ile sonuçlanabilir. Son araştırmalara göre, COVID-19 hastalarında proinflamatuar sitokinlerin plazma seviyeleri artmıştır. TNF- , IL6, IL 2, IL-1 , IL7, IL 10 ve IL-18 gibi bu inflamatuar sitokinlerin yanı sıra monosit kemoatraktan proteini-1(MCP-1 ), viral yük, zatürree, akciğer hasarı, nörolojik bozukluklar ve ölüm oranındaki artış yoluyla COVID-19'in patolojik ilerlemesinde ve ciddiyetinde önemli rollere sahiptir [97,101].

Bu olaylar, SARS-CoV'nin ana komplikasyonu olarak çoklu organ yetmezliğine ve akciğer hasarına yol açabilir-2; bu nedenle proinflamatuar sitokinlerin modülasyonu, COVID-19 için makul bir tedavi hedefi olarak kabul edilebilir. Ayrıca flavonoidlerin önemli anti-inflamatuar etkileri birçok çalışmada gösterilmiştir; bu nedenle, COVID-19 [97]'nin iltihaplanma ile ilgili komplikasyonlarıyla mücadelede umut verici bileşikler olabilirler.

Yang et al. 3-deoxysappanchalcone （30 μM）'nin in vitro influenza H1N1 virüsünün neden olduğu inflamasyon ve apoptoz üzerindeki koruyucu etkisini, IL-1 ve IL-6 düzeylerini azaltarak kanıtladı [68]. Baicalein, bir flavon ve bir O-metillenmiş izoflavon olan biochanin A, A549 hücrelerinde proinflamatuar sitokin ekspresyonunu ve influenza H5N1 virüs suşları ile enfekte olan birincil insan monosit türevli makrofajları (MDM) azalttı, bu da inflamatuar yol aktivasyonunu ve doku hasarlarını önleyebilir [53]. İnfluenza A ile enfekte A549 ve MDCK hücrelerinde, baicalein'in glikosile edilmiş formu olan baicalin (baicalein-7-glukuronid), IFN seviyelerini artırabilir, bu da pro-inflamatuar sitokin üretiminin azalmasına neden olabilir. Bu nedenle, IL-8 ve TNF-, tedavi edilmemiş kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında baicalin ile tedavi edilen hücrelerde önemli ölçüde daha düşüktü [55].

Bir in vitro çalışma, bir dimetoksiflavon olan 2.5, 5 ve 10 ug/mL CST konsantrasyonlarının influenza A ile enfekte olmuş THP-1 hücrelerinde NF-kB sinyal iletim yolunun zayıflaması üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. (H1N1) virüsü. NF-kB inhibisyonunun ardından, I-1 , IL-8, IL-10 ve TNF- dahil proinflamatuar sitokinlerin yanı sıra inflamasyonla ilişkili protein COX{{ üretimi 15}}, CST tarafından doza bağlı bir şekilde baskılanmıştır[59]. Yonekawa ve arkadaşları tarafından hesperidin ve linarin'in antiviral özellikleri üzerine yapılan bir in vitro çalışmada, bu flavonoid glikozitler, üretimi artırarak CD4 artı NKT hücrelerinde R5-HIV-1-NL(AD8)viral replikasyonunu inhibe etti. IL-2, IL-5 ve IL-13 dahil anti-inflamatuar sitokinler. Bu iki flavonoidin uyarıcı etkisinin, aglikonlar (hesperetin ve akasetin) bu tür bir aktivite göstermediği için kritik olarak şeker parçasına bağlı olduğu gözlemlendi. Ayrıca, B halkasındaki metoksi(-OCH3) ikamesi, hesperidin ve linarin'in CD4 artı NKT hücreleri üzerindeki uyarıcı aktivitesi için esastır. Ayrıca V61'den RANTES, MIP-1 ve MIP-1 salgılanmasını indükleyebilirler, ayrıca CD4 artı NKT hücrelerinde viral replikasyonu baskılayan T hücre reseptörlerini eksprese edebilirler[104]. Kang et al. İnfluenza A virüsü enfeksiyonunun in vitro modelinde Pithecellobium clypearia Benth'ten saflaştırılmış flavonoidlerin anti-grip etkileri bildirmiştir. Bu Saflaştırılmış flavonoidler, H1N1-enfekte insan A549 akciğer hücrelerinde[105] IL-6 ve MCP-1 üretimini bastırdı. Mehrbod et al. Glikosile edilmiş bir flavon olan quercetin-3-O- -L-rhamnopyranoside(Q3R)'nin influenza H1N1 virüsü ile enfekte olmuş MDCK hücreleri üzerindeki anti-inflamatuar etkisini araştırdı. 150 ug/mL konsantrasyonunda Q3R, virüs titresini önemli ölçüde azalttı ve IL-27 üretimini artırdı; bu, CD4 artı T hücreleri tarafından IL-10 salgılanmasını daha da yükseltebilir ve antiviral aktivitelerini artırabilir. Öte yandan, O3R, ateşe neden olan ve NF-kB proinflamatuar yolunu tetikleyen önemli inflamatuar aracılardan biri olarak TNF- üretimini baskılayarak hastaların durumunu daha da kötüleştirdi [106]. Trimetoksi flavon Santin, 60 μM konsantrasyonda THP-1 ve MDCK hücrelerinde anti-grip aktivitesi göstermiştir. İnfluenza A（H3N2） virüsü, THP-1 hücrelerinde pro-inflamatuar sitokin üretimini indükleyerek akciğer iltihabı ve yaralanmasına neden olur [61]. İnfluenza virüsü enfeksiyonu sırasında anti-inflamatuar sitokinler de değişebilir. IL-10, influenza virüsü tarafından indüklenebilen bir anti-inflamatuar sitokindir. IL-10, pulmoner monosit türevli dendritik hücreler tarafından IL-12 üretimini aşağı regüle ederek değişmez doğal öldürücü T hücrelerini inhibe eder[107]. IL-6, IL-8, IL-10, IL-1 ve TNF- seviyeleri, MAPK'lerin ve NF-'nin aşağı regülasyonu yoluyla Santin ile tedavi edilen grupta önemli ölçüde azaldı. kB sinyal yolları [61].

Yukarıdakilere ek olarak, gallocatechin-7-gallat, genistein ve theaflavinler, proinflamatuar sitokinlerin üretimi üzerinde modüle edici etkileri olan diğer flavonoidlerdir [58,76,108]; bu nedenle, bu moleküller, viral enfeksiyonla ilişkili inflamasyonun kontrol edilmesinde yardımcı olan, arzu edilen bir anti-inflamatuar etkiye sahip görünmektedir.

2.2.3.Sub-Hücresel Enflamatuar Yollara Etkisi(NF-kB, PI3K/Akt ve MAPK/JNK)

Bir virüs bir konakçı hücreye girdiğinde, konakçı hücre onun replikasyonunu örüntü tanıma reseptörleri (PRR'ler) [109] aracılığıyla tanır. Virüs RNA yapısı, PRR'lerin oligomerizasyonunda ve akış aşağı transkripsiyon faktörlerinin, özellikle interferon düzenleyici faktörler (IRF) ve NF-kB'nin aktivasyonunda rol oynar. NF-kB ve IRF'lerin aktivasyonu, tip I ve I interferonların indüklenmesi ve kemokin salgılanması yoluyla hücresel antiviral savunmanın devreye girmesine yol açar [110].

Chiou ve arkadaşları, influenza A (H1N1) virüsü ile enfekte A549 hücrelerinde 8-prenylkaempferol(8-PK)'nin etkilerini araştırdı. Sonuçlar, PI3K-Akt yoluna müdahalenin, influenza A virüsüne karşı koruyucu etkilere yol açan 8-PK'nın ana mekanizması olduğunu gösterdi.8-PK, NF-kB ve IRF'yi azalttı-3 nükleer translokasyonu Akt fosforilasyonunun ve PI3K aktivitesinin zayıflaması yoluyla. Son olarak, azaltılmış düzenlenmiş aktivasyon üretimi ile, normal T hücreleri eksprese edildi ve salgılandı (RANTES), H1N1-enfekte A549 hücreleri [111] aracılığıyla. Zhu et al. A549 ve Ana-1 ile enfekte olmuş hücrelerde influenza A (H3N2) virüsünün neden olduğu otofajiyi mTOR sinyal yolunu baskılayarak temsil etti. Baicalin, mTOR fosforilasyonunu artırabilir ve H3N2 virüs etkilerini doza bağlı bir şekilde kurtarabilir [112]. Başka bir çalışmada, baicalinin, viral protein NS1 ekspresyonunun modüle edilmesinin neden olduğu PI3k/Akt yolunun aşağı regülasyonu yoluyla anti-influenza virüsü(H1N1-pdm09) aktivitesi uyguladığı bulundu 55]. Ayrıca, bir O-metillenmiş izoflavon olan biochanin A, AKT, ERK1 / 2, JNK ve p38 fosforilasyonunu azaltarak H5N1 influenza A virüsü ile enfekte olmuş hücreler üzerinde koruyucu etkiler göstermiştir. Ayrıca hücresel sinyal yollarını modüle edebilir, IL-6, IL-8, CXCL10(IP-10), TNF-'yi azaltabilir ve IkB seviyelerini iyileştirebilir [53].

CST, NF-kB/p65 sinyal yolunun inhibisyonu yoluyla influenza A virüs enfeksiyonunun in vitro modeli üzerinde önleyici etkileri temsil etti ve proinflamatuar sitokinlerin aşağı regülasyonu ile sonuçlandı. CST ayrıca fosfo-p38 MAPK ve fosfo-JNK düzeylerini de azaltmıştır [59]. Ding ve arkadaşları tarafından yapılan bir başka çalışmada, beş gün boyunca 200 ve 500 mg/kg'lık günlük dozlarda hesperidin uygulanması, sıçanlarda influenza A virüsünün (H1N1) neden olduğu akciğer hasarında pulmoner inflamasyonu önleyebilir. Bu etkiye, IL-6 ve TNF- dahil olmak üzere pro-inflamatuar sitokin üretiminin azaltılması aracılık etti. Hesperidin ayrıca MAPK sinyal yollarının inhibisyonu yoluyla H1N1 ile enfekte pulmoner mikrovasküler endotelyal hücrelerde IL-6 ve TNF ekspresyonunu azaltmıştır [94]. Ayrıca, çalışmalar, MAPK sinyal yolunun ana modülatörü olarak ERK sinyal yolunu önerdi. Bir monometoksi flavon olan Isorham-netin （50 μM）, influenza A(H1N1) virüs enfeksiyonundan sonra MDCK hücrelerinde ERK fosforilasyonunu azaltmıştır [113]. Jeong ve meslektaşları, CHME5 hücrelerinde ve HIV-1-D3 ile enfekte olan birincil insan makrofajlarında piroksilin A ve tectorigenin'in sitotoksik etkilerini araştırdı. Bu flavonoidler, lipopolisakkarit/sikloheksimit ile tedavi edilen hücrelerde PI3K, Akt, mTOR, PDK1, GSK-3 ve Bad'in fosforilasyonunu azaltarak etkilerini gösterirler Santin, MDCK ve THP'de influenza A virüs replikasyonunu bastırdı-1 enfekte hücreler [114]. 60 uM konsantrasyonunda, Santin p38 MAPK, ERK, JNK/SAPK ve NF-kB[61]'in fosforilasyonunu zayıflattı.