Geçici Ön Beyin İskemisinden Sonra Okskarbazepinin Neden Olduğu Hipotermi Gerbillerde Geçici Reseptör Potansiyeli Vanilloid Tip 1 ve 4 Yoluyla Terapötik Nöroproteksiyon Sağlıyor Bölüm 3

4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Deney Hayvanları

Erkek gerbiller (toplam sayı=252) 6 aylıkken (vücut ağırlığı, 63-78 g) kullanıldı. Gerbiller, Kangwon Ulusal Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'nde (Chuncheon, Kore) yetiştirildi.

Gerbiller çok sevimli küçük hayvanlardır. Çöl bölgelerinde yaşarlar, mağara kazmakta ustadırlar ve yiyecek depolamak ve bulmak konusunda güçlü içgüdülere sahiptirler. Bu küçük adamlar arasında erkek gerbillerin özellikle iyi bir hafızası vardır, bu da insanların sırlarını bilmek istemesine neden olur.

Birincisi, erkek gerbiller yiyecek ararken yön belirlemek için yer işaretleri ve arazi gibi bir dizi sinyali kullanırlar. Uzun süreli gözlem ve uygulamalarla kendi "coğrafi bilgi sistemlerini" kurmuşlardır. Buna karşılık dişi gerbillerin, özellikle sürekli değişen bir ortamda, bu sinyaller için daha kötü bir hafızası vardır.

İkincisi, erkek gerbiller doğal düşmanlarla savaşırken de güçlü bir hafıza gösterirler. Bilim adamlarına göre gerbiller tehdit edildiğinde hızla yuvaya girip kaçmaya çalışacaklar. Ancak aynı tehditle karşı karşıya kaldıklarında erkek gerbiller, doğal düşmanlarının saldırı şeklini hatırlayacak ve onlardan kaçınarak hayatta kalma şanslarını artıracaktır.

Son olarak, erkek gerbillerin hafızası aynı zamanda birbirleriyle olan sosyal davranışlarında da yatmaktadır. Her gerbilin kendine özgü bir kokusu vardır. Diğer gerbillerle karşılaştıklarında, birbirlerinin kimliğini ve statüsünü belirlemek için koku alma duyularını kullanacaklar. Bu hafıza yeteneği, gerbillerin nispeten istikrarlı bir sosyal bağlantı kurmasını sağladığı gibi üremeleri için de önemli bir garantidir.

Özetle erkek gerbiller ile hafıza arasındaki ilişki ayrılamaz. Doğada hayatta kalma ve üreme arayışı sürecinde, sürekli çevreye uyum sağlamak ve kendilerini geliştirmek için güçlü hafızalarına güvenirler. İnsanlar olarak bu küçük adamlardan öğrenmeli ve sürekli değişen bu dünyaya daha iyi uyum sağlamak için hafızamızı sürekli geliştirmeliyiz. Belleğimizi geliştirmemiz gerektiği görülebilir ve Cistanche, hafızayı önemli ölçüde geliştirebilir çünkü aynı zamanda hafıza ve öğrenme için çok önemli olan asetilkolin ve büyüme faktörlerinin seviyelerini arttırmak gibi nörotransmitterlerin dengesini de düzenleyebilir. Ayrıca Cistanche kan akışını iyileştirebilir ve oksijen dağıtımını destekleyebilir, bu da beynin yeterli beslenme ve enerji almasını sağlayarak beyin canlılığını ve dayanıklılığını artırır.

Bellek gücünü artırmak için Bil'e tıklayın

Bu çalışma için deney protokolü, Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı (onay no. KW-200113-1; onay tarihi, 18 Şubat 2020).

Araştırma protokolü, The National Academies Press (8. Baskı, 2011) tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzunun "Mevcut Uluslararası Yasalar ve Politikalar"da önerilen yönergelerine uyuldu.

4.2. Deney Grupları, tFI İndüksiyonu ve HyT ve OXC Tedavileri

Gerbillerde tFI sonrası iskemik hasara karşı OXC'nin koruyucu etkilerini kanıtlamak için gerbiller altı gruba ayrıldı: (1) sahte+araç grubu (n=24);(2) tFI+araç grubu (n {{5) }}); (3) sham+HyT grubu (n=24); (4) tFI+HyT grubu (n=60);(5) sham+OXC (200 mg/kg) grubu (n=24); ve (6) tFI+OXC grubu (n=60).

Üç tFI grubundaki yedi ve beş gerbil, Western blot analizi ve histolojik inceleme için sırasıyla tFI operasyonundan 30 dakika, 12 saat, 1 gün, 2 gün ve 4 gün sonra kullanıldı ve üç sahte grupta yedi ve beş gerbil kullanıldı. Sayıları en aza indirmek için sahte operasyondan 30 dakika ve 4 gün sonra gerbiller kullanıldı. Bu deneyde tFI daha önce anlatıldığı gibi geliştirildi [34].

Kısaca gerbillere %2,5 izofluran (%32 oksijen ve %68 nitröz oksit) ile anestezi uygulandı. Anestezi altında her iki ortak karotis arteri karotis kılıfından izole edildi ve anevrizma klipleri (Yasargil FE 723K) (Aesculap, Tuttlen, Almanya) ile kapatıldı. ) beş dakika boyunca.

Beyne giden kan akışının mükemmel bir şekilde durduğu, Heine Optotechnik'ten (Herrsching, Almanya) bir oftalmoskop (HEINE K180®) kullanılarak her iki retinal arterdeki (iç karotis damarlarının dalları) arteriyel kan akışının gözlemlenmesiyle doğrulandı.

Tüm gruplarda ameliyat öncesi ve ameliyat sırasında vücut ısısı termometrik battaniye kullanılarak normotermide (37 ± 0.2 ◦C) kontrol edildi. Beş dakikalık tıkanıklıktan sonra klipler çıkarıldı.

Bu çalışmada ortak şah damarlarını tıkamadan aynı tFI ameliyatına tabi tutularak sahte operasyon yapıldı. Sham+HyT ve tFI+HyT olmak üzere iki grupta HyT kontrol edildi (tFI+ grubundaki vücut ısısındaki değişime benzer şekilde). OXC grubu) altı saat boyunca tüm vücudu bir buz torbasıyla soğutarak.

İki sham+OXC ve tFI+OXC grubunun vücut sıcaklığı, tFI operasyonundan sonra anında intraperitoneal 200 mg/kg OXC (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) enjeksiyonundan sonra altı saat boyunca kaydedildi.

OXC dozajı, 200 mg/kg OXC'nin beyindeki hücre ölümüne karşı etkili bir şekilde koruduğunu bildiren önceki bir çalışmaya dayanılarak seçilmiştir [36]. Vücut ısısı değişimini kaydetmek için, vücut ısısı tFI'den sonra her bir saatte rektumda ölçülmüştür. ortam oda sıcaklığında (yaklaşık 22 ◦C) 6 saatlik bir süre boyunca.

Gerbiller tFI'den sonra dört günlük bir iyileşme süresine sahip olmuştur çünkü hipokampal CA1 bölgesinde yer alan piramidal hücreler tFI'dan dört gün sonra ölmeye başlamaktadır [30,34,62].

4.3. SMA Testi

Tüm gruplarda hiperaktivitedeki değişiklikleri incelemek için SMA testi yapıldı. Kısaca, daha önce açıklandığı gibi [63], SMA testi tFI'den sonraki 1. Günde yapıldı çünkü lokomotoraktivite tFI'yi takiben iskemik yaralanmadan sonraki 1. Günde en yüksek noktaya ulaştı.

Tüm grupların gerbilleri iki saat boyunca çevresel adaptasyona tabi tutuldu ve Ugo Basile SRL'den (Gemonio, İtalya) temin edilen, içinde iki paralel yatay olan açık alan kafesine (genişlik, 44 cm; uzunluk, 44 cm; yükseklik, 30) yerleştirildi. Bir saat boyunca yerden 4 × 8 kızılötesi ışınlar yerleştirildi. SMA, San Diego Instruments'tan (San Diego, CA, ABD) bir Photobeam Activity System-Home Cage kullanılarak kaydedildi.

Hareket (yörünge ve kat edilen toplam mesafe), fotosellerin ürettiği kızılötesi ışın dizisinin kesintiye uğraması yoluyla tespit edildi.

SMA bir saat boyunca sürekli olarak izlendi ve veriler, IPC Electronics'ten (Cumbria, İngiltere) bir AMB analizörü kullanılarak toplandı.

Veri toplama işlemi açık alan kafesine alıştırıldıktan 15 dakika sonra başlatıldı. Son olarak elde edilen sonuçlar test süresindeki (bir saat) hareket mesafesi (metre) olarak değerlendirildi.

4.4. Bilişsel İşlev Testleri

4.4.1. RAMT

Tüm gruplar arasında uzamsal hafızayı karşılaştırmak için RAMT önceki çalışmalara göre gerçekleştirildi [38,44]. Bu test için Stoelting Co'dan (Wood Dale, IL, ABD) radyal bir 8-kol labirenti kullanıldı.

Labirent aleti merkezi bir platform ve sekiz koldan (her bir kolun genişliği 5 cm; yüksekliği 9 cm; uzunluğu 35 cm) oluşuyordu. Gerbiller, ekimden önce üç gün boyunca günde bir kez eğitildi.

Yani her kolun uç kısmına DBL Co'dan (Chungbuk, Kore) elde edilen pelet yem yerleştirildi ve her bir gerbil merkezi platforma yerleştirildi. Daha sonra gerbil yemi aradı.

Sahte veya tFI ameliyatından sonra gerçek test, ameliyattan bir gün sonra başlamak üzere dört gün boyunca günde bir kez yapıldı.

Analiz için, gerbilin daha önce ziyaret ettiği bir kola her girdiğinde bir hata meydana gelecek şekilde hataların sayısı değerlendirildi. Gerbil yemi tükettiğinde test sona erdi.

4.4.2. PAT

Gruplar arasında kısa süreli hafızayı karşılaştırmak için PAT, bazı değişikliklerle birlikte daha önce bildirilen yöntemlere [64,65] göre yürütüldü. Kısacası gerbiller, dikey olarak kayan bir kapı aracılığıyla birbirleriyle iletişim kuran iki (karanlık ve aydınlık) bölmeden oluşan, San Diego Instruments'ın (SanDiego, CA, ABD) Gemini Kaçınma Sistemi (GEM 392) kullanılarak test edildi.

Deneysel oturumlar iki aşamada gerçekleştirildi: bir eğitim oturumu ve tFI veya sham operasyonundan bir gün önce ve dört gün sonra gerçekleştirilen gerçek bir test oturumu.

Gerçek test, eğitim seansından 20 dakika sonra, karanlık odada kalış sırasındaki gecikme süresi (saniye) ölçülerek gerçekleştirildi. Yani, eğitim oturumunda, kapı açıkken gerbilin bir dakika boyunca iki bölmeyi serbestçe keşfetmesine izin verildi. .

Daha sonra, gerbil karanlık bölmeye girdiğinde, kapı kapatıldı ve gerbil'e, yerdeki çelik bir ızgaradan beş saniye boyunca elektrikli ayak şoku (0.5 mA) verildi.

Gerçek test oturumunda, tFI'den sonraki 4. günde gerbil, ışık bölmesine yerleştirildi ve karanlık bölmeye girmeden önce ışık bölmesindeki gecikme süresi kaydedildi.

4.5. TRPV1 ve TRPV4 için Western Blot Analizi

Gerbil hipokampal CA1'de TRPV1 ve TRPV4'ün ekspresyon seviyelerini incelemek için daha önce açıklanan yöntemlere göre Western blot tekniği uygulandı [66,67].

Kısaca, belirlenen programa göre (sham veya tFI operasyonundan sonra 30 dakika, 12 saat, 1 gün, 2 gün ve 4 gün), gerbillere (her grup için n=5) intraperitoneal enjeksiyon yoluyla ötenazi için anestezi verildi. 200 mg/kg pentobarbital sodyum (JW Pharm.Co., Ltd., Seul, Kore).

Daha sonra beyinleri toplandı ve 0,1 mM etilen glikol-bis (aminoetil eter)-N, N, N{{ içeren 50 mM fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7,4) ile homojenleştirildi. 11}}, N0-tetraasetik asit (EGTA) (pH 8.0), 10 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA) (pH 8,0), %0,2 Nonidet P{{17 }}, 15 mM sodyum pirofosfat, 100 mM -gliserofosfat, 2 mM sodyum ortovanadat, 50 mM NaF, 150 mM NaCl, 1 mMfenilmetilsülfonil florür (PMSF) ve 1 mM ditiyotreitol (DTT).

Daha sonra numuneler santrifüjlendi ve Pierce Chemical Co'dan (Rockford, IL, ABD) sığır serumu albümini ile Thermo Fisher Scientific Inc'den (Waltham, MA, ABD) bir Mikro BCA tahlil kiti kullanılarak protein seviyelerini belirlemek için süpernatanlar alındı.

20 ug toplam protein içeren kısımlar, %6 sodyumdodesil sülfat (SDS), 3 mM DTT, %0,3 bromofenol mavisi ve %30 gliserol içeren 150 mM Tris (pH 6,8) yükleme tamponunda kaynatıldı.

Numuneler %10 SDS-poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) yoluyla ayrıldı. Daha sonra jeller, Pall Co'dan (East Hills, NY, ABD) nitroselüloz membranlara 350 mA ve 4 ◦C'de 90 dakika süreyle aktarıldı.

Spesifik olmayan boyamayı engellemek için membranlar, oda sıcaklığında 60 dakika boyunca %5 yağı alınmış sütte inkübe edildi. Daha sonra, her bir birincil antikorla immünreaksiyona tabi tutuldular: tavşan anti-TRPV1 (1:1000 seyreltilmiş) (Abcam, Cambridge, UK), tavşan anti-TRPV4 (1:1000 seyreltilmiş) (Abcam) ve tavşan anti- - aktin (1:2000 oranında seyreltilmiş) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) 4 °C'de 7 saat süreyle.

Daha sonra, yaban turpu peroksidaz (HRP)-konjuge eşek anti-tavşan IgG'si (1:4500 seyreltilmiş) (Santa Cruz Bioteknoloji, Santa Cruz, CA, ABD) ile oda sıcaklığında 1 saat boyunca reaksiyona sokuldu.

Son olarak, görselleştirmeyi geliştirmek için Thermo Fisher Scientific Inc'den (Waltham, MA, ABD) alüminol bazlı kemilüminesans kiti kullanıldı.

Daha önce açıklandığı gibi [68], TRPV1 ve TRPV4'ün immünoblotları, Scion Crop'tan (Frederick, MD, ABD) Scion Image yazılımı kullanılarak analiz edildi. Bantlar tarandı ve dansitometrik analiz yapıldı. Protein seviyeleri, karşılık gelen -aktin seviyesine göre normalleştirildi.

4.6. Histolojik Kesitlerin Hazırlanması

İmmünohistokimyasal ve histopatolojik incelemeler için gerbiller (her grup için n=7), belirlenen programa göre (tFI veya sahte operasyondan 30 dakika, 12 saat, 1 gün, 2 gün ve 4 gün sonra) kurban edildi.

Daha önce açıklandığı gibi [34], gerbillere pentobarbital sodyum (200 mg/kg) (JW Pharmaceutical, Seul, Kore) ile derin bir şekilde anestezi uygulandı. Anestezi altında gerbiller, 0,1 M fosfat tamponlu salin (pH 7,4) ile transkardiyal olarak durulandı ve %4 paraformaldehid (0,1 M fosfat tamponu içinde, pH 7,4) ile sabitlendi.

Daha sonra beyinleri alındı ​​ve aynı fiksatif kullanılarak altı saat süreyle sonradan fikse edildi. Daha sonra beyin dokuları akriyostatta (Leica, Wetzlar, Almanya) kesildi (25 µm kalınlığında koronal düzlemler).

4.7. CV Kullanarak Histokimyasal Boyama

Her grubun hipokampüsündeki morfolojik ve nöronal hasarı incelemek için, daha önce tanımladığımız gibi kresil menekşe (CV) boyama yapıldı [69]. Kısaca, kresil menekşe asetat (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD), damıtılmış su ve buzlu asetik asit (0.28) içinde %1.0 (a/h) oranında çözüldü. %) bu çözeltiye eklendi. Kesitler Kanada balsamı (Kanto, Tokyo, Japonya) ile boyandı ve monte edildi.

4.8. FJ B Boyama

Nöronal dejenerasyonu (ölüm veya kayıp) incelemek için FJ B boyama yapıldı. Yayınlanan prosedüre [34] göre, hazırlanan beyin kesitleri %1 sodyum hidroksite batırıldı, hemen 0.0%6 potasyum permanganata aktarıldı ve hemen %0,0004 Fluoro-Jade B (Histochem) ile reaksiyona sokuldu , Jefferson, AR, ABD).

Kesitler kısaca yıkandı ve FJ B ile reaksiyon için bir slayt ısıtıcısına (yaklaşık 50 °C) yerleştirildi. OXC'nin tFI'ye karşı terapötik etkisini değerlendirmek için, CA1 bölgesindeki FJ B+ hücrelerinin sayısı, [1]'de yayınlanan bir yönteme göre sayıldı. 70].

Kısaca, FJ B+ hücrelerinin dijital görüntüleri, 450-490 nm dalga boyunda bir epifloresan mikroskobu (Carl Zeiss) (Oberkochen, Almanya) kullanılarak gerbil başına beş bölümden yakalandı. Hücreler, bir görüntü analiz sistemi (Optimas 6.5) (CyberMetrics, Scottsdale, AZ, ABD) kullanılarak CA1 bölgesinin merkezinde SP'yi içeren 250 µm2'de sayıldı.

4.9. İmmünohistokimya

CA1 bölgesindeki NeuN, TRPV1 ve TRPV4 immünoreaktivitesindeki değişiklikleri araştırmak için genel immünohistokimya yapıldı. Kısaca, yayınlanmış bir yönteme göre [34], hazırlanan beyin bölümleri birincil antikorlar-fare anti-NeuN (seyreltilmiş, 1:1100) (Chemicon, Temecula, CA, ABD), fare anti-TRPV1 (seyreltilmiş, 1:500) (Abcam, Cambridge, Birleşik Krallık) ve tavşan anti-TRPV4 (seyreltilmiş, 1:500) (Abcam, Cambridge, Birleşik Krallık).

Daha sonra, inkübe edilen bu bölümler karşılık gelen ikincil antikorlarda (seyreltilmiş, 1:250) (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, ABD) inkübe edildi ve Vectastain ABC (seyreltilmiş, 1:250) (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA) kullanılarak geliştirildi. , ABD). Son olarak immün reaksiyona giren bu bölümler, 3,3'-diaminobenzidin ile görselleştirildikten sonra renk aldı.

NeuN+ hücrelerinin sayısı aşağıdaki gibi sayıldı. NeuN+ hücrelerinin dijital görüntüleri, bir ışık mikroskobu (AxioM1) (Carl Zeiss, Almanya) kullanılarak gerbil başına beş bölümden elde edildi.

Hücreler, FJ B+ hücre sayımıyla aynı şekilde sayıldı. TRPV1+ ve TRPV4+yapılarının yoğunluğunu değerlendirmek için CA1 bölgesindeki karşılık gelen alanlar, hayvan başına beş bölümde kullanıldı. TRPV1+ ve TRPV4+yapılarının görüntüleri, bir AxioM1 ışık mikroskobu (Carl Zeiss) (Almanya) kullanılarak yakalandı.

TRPV{{0}} ve TRPV4+yapılarının yoğunlukları, bağıl optik yoğunluk (ROD) olarak değerlendirildi. Bu amaçla görüntüler ortalama gri seviyeye dönüştürüldü. ROD, Adobe Photoshop (versiyon 8.0) ve NIH Image J yazılımı (NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD, ABD) kullanılarak yüzde olarak sunuldu.

4.10. İstatistiksel Analiz

Verileri ortalama ± ortalamanın standart hatası (SEM) olarak sunduk. Tüm istatistiksel analizler GraphPad Prism (versiyon 5.0) (GraphPadSoftware, La Jolla, CA, ABD) yardımıyla gerçekleştirildi. Deney grupları arasındaki ortalamalar arasındaki farklılıklar, tüm gruplar arasında tFI ile ilişkili farklılıkları aydınlatmak için post hocBonferroni çoklu karşılaştırma testi ile iki yönlü varyans analizi (ANOVA) ile istatistiksel olarak analiz edildi. İstatistiksel anlamlılık, p < 0 noktasında dikkate alındı. 05.

Yazar Katkıları: Kavramsallaştırma: M.-HW ve T.-KL; Metodoloji, J.-CL ve DWK; Yazılım, H.-IK ve MCS; Doğrulama, JHA, IJK ve JHP; Araştırma, J.-CL, H.-IK ve M.CS; Veri İyileştirme, JHC, IJK ve JHP; Yazılı-Orijinal Taslak Hazırlama, H.-IK ve J.-CL; Yazım-İnceleme ve Düzenleme, M.-HW; Denetim, S.-SL; Proje Yönetimi, M.-HW; Funding Acquisition, S.-SL ve T.-KL Tüm yazarlar makalenin yayınlanmış versiyonunu okudu ve kabul etti.

Finansman: Bu çalışma, Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) tarafından finanse edilen Brain Korea 21 (BK21) Fostering Outstanding Universities for Research (FOUR, 4220200913807) ve Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) aracılığıyla Temel Bilim Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir. Eğitim Bakanlığı (NRF-2020R1I1A1A01070897) tarafından finanse edilmektedir.

Kurumsal İnceleme Kurulu Açıklaması: Gerbiller, Kangwon Ulusal Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'nde (Chuncheon, Kore) yetiştirildi. Bu çalışma için deney protokolü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı (onay No., KW-200113-1; onay tarihi, 18 Şubat 2020).

Araştırma protokolü, The National Academies Press (8. Baskı, 2011) tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzunun "Mevcut Uluslararası Yasalar ve Politikalar" bölümünde önerilen yönergelere uymuştur.

Bilgilendirilmiş Onam Beyanı: Geçerli değil.

Veri Kullanılabilirliği Beyanı: Bu çalışmada sunulan veriler ilgili yazarın talebi üzerine sağlanabilir.

Teşekkür: Yazarlar bu çalışmadaki teknik yardımlarından dolayı Hyun Sook Kim ve Seung Uk Lee'ye teşekkür ederler.

Çıkar Çatışmaları: Yazarlar herhangi bir mali çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.

Kısaltmalar

CA1: Cornu Ammonis 1 alt alanı; CNS, merkezi sinir sistemi; CV, kresil menekşe; DG, dentat girus;FJ B, Floro-Yeşim B; HyT, hipotermi; NeuN, nöron çekirdekleri; OXC, okskarbazepin; PAT, pasif kaçınma testi; ROD, bağıl optik yoğunluk; SMA, spontan motor aktivite; SO, stratum oriens;SP, stratum piramidal; SR, stratum radiatum; tFI, geçici ön beyin iskemisi; TRPV1, geçici reseptör potansiyeli vanilloid tip 1.

Referanslar

1. Busto, R.; Dietrich, WD; Globus, MY; Valdes, I.; Scheinberg, P.; Ginsberg, MD İntraiskemik beyin sıcaklığındaki küçük farklılıklar, iskemik nöron hasarının boyutunu kritik olarak belirler. J. Cereb. Kan Akışı Metab. 1987, 7, 729–738. [CrossRef][PubMed]

2. Maher, J.; Hacinski, V. Serebral iskemi için potansiyel bir tedavi olarak hipotermi. Cerebrovasc. Beyin Metab. Rev. 1993, 5,277–300.

3. Hemşire, S.; Corbett, D. Birkaç gün süren hafif, ilaca bağlı hipoterminin ardından nöroproteksiyon. J. Cereb. Kan Akışı Metab. 1996, 16,474–480. [ÇaprazRef]

4.Fisher, M.; Feuerstein, G.; Howells, DW; Hurn, PD; Kent, TA; Savitz, SI; Lo, EH; Grup, S. İnme tedavisinin güncellenmesiAkademik endüstri yuvarlak masa klinik öncesi önerileri. İnme 2009, 40, 2244–2250. [ÇaprazRef]

5. Liu, L.; Yenari, MA Terapötik hipotermi: Nöroprotektif mekanizmalar. Ön. Biosci. 2007, 12, 816–825. [ÇaprazRef]

6. Lyden, PD; Krieger, D.; Yenari, M.; Dietrich, WD Akut felç için terapötik hipotermi. Uluslararası J. İnme 2006, 1, 9–19. [CrossRef][PubMed]

7. Klassman, L. Akut felçte terapötik hipotermi. J. Neurosci. Nur. 2011, 43, 94–103. [ÇaprazRef]

8. Groysman, LI; Emanuel, BA; Kim-Tenser, MA; Sung, GY; Mack, WJ Akut iskemik felçte terapötik hipotermi. Nöroşirurji. Odak 2011, 30, E17. [CrossRef] [PubMed]

9. Schwab, S.; Georgiadis, D.; Berrouschot, J.; Schellinger, PD; Graffagnino, C.; Mayer, SA Masif hemisferik enfarktüs sonrası orta dereceli hipoterminin fizibilitesi ve güvenliği. İnme 2001, 32, 2033–2035. [ÇaprazRef]

10. Katz, LM; Genç, AS; Frank, JE; Wang, Y.; Park, K. Düzenlenmiş hipotermi, hipoksik iskemiden sonra beyindeki oksidatif stresi azaltır. Beyin Arş. 2004, 1017, 85–91. [ÇaprazRef]

11. Liu, K.; Han, H.; Geng, X.; Zhang, J.; Ding, Y. Farmakolojik hipotermi: Gelecekteki felç tedavisi için bir potansiyel mi? Nörol. Res.2016, 38, 478–490. [ÇaprazRef]

12. Ma, J.; Wang, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Wang, Z.; Chen, G. Merkezi sinir sistemi hastalıklarında ilaca bağlı terapötik hipoterminin nöroprotektif etkileri. Curr. İlaç Hedefleri 2017, 18, 1392–1398. [ÇaprazRef]

13. Calabresi, P.; Cupini, LM; Centonze, D.; Pisani, F.; Bernardi, G. Beyin iskemisinde olası bir nöroprotektif strateji olarak antiepileptik ilaçlar. Ann. Nörol. 2003, 53, 693–702. [ÇaprazRef]

14. Tanaka, T.; Litofsky, NS Pediatrik travmatik beyin hasarında anti-epileptik ilaçlar. Uzman Rev. Neurother. 2016, 16, 1229–1234.[CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com