Soyut:Bu çalışma, sikloheterofilinin melanin sentezi üzerindeki inhibitör etkilerini netleştirmek için yapıldı. Sikloheterofilinin B16F10 hücre hattı üzerindeki inhibitör etkilerini aydınlatmak için hücre canlılığı, haberci ribonükleik asit (mRNA) ekspresyonları, tirozinaz aktivite testi ve melanin üretim testi ölçüldü. Sikloheterofilinin tirozinaz ile ilişkili protein 1 (TYRP1)/TYRP2/tirozinaz (TYR)/mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü (MITF) mRNA ifadeleri ve melanin içeriği üzerindeki etkileri belirlendi. Kantitatif gerçek zamanlı RT-PCR, sikloheterofilinin, -MSH ile muamele edilmiş B16F10 hücrelerine göre TYRP1/TYRP2/TYR/MITF genlerinin mRNA ekspresyon seviyesini ve melanin üretim içeriğini azalttığını gösterdi. Tirosinaz aktivite tahlili, sikloheterofilinin B16F10 hücrelerinde melanin üretimini azalttığını ortaya çıkardı. Bu veriler, sikloheterofilinin B16F10 hücrelerinde beyazlatma etkilerini arttırdığını göstermektedir; bu nedenle sikloheterofilin, cilt beyazlatma için güçlü bir bileşendir. Bu nedenle, fonksiyonel materyallerin geliştirilmesi için sikloheterofilinin etki mekanizması hakkında daha fazla araştırma yapılmalıdır.

İlgili araştırmalara göre cistanche, "ömrü uzatan mucizevi bitki" olarak bilinen yaygın bir bitkidir. Ana bileşeni, antioksidan, antienflamatuar ve bağışıklık fonksiyonunun teşviki gibi çeşitli etkilere sahip olan kistanosiddir. Cistanche ve cilt beyazlatma arasındaki mekanizma, cistanche glikozitlerinin antioksidan etkisinde yatmaktadır. İnsan derisindeki melanin, tirozinaz tarafından katalize edilen tirozinin oksidasyonu ile üretilir ve oksidasyon reaksiyonu oksijenin katılımını gerektirir, bu nedenle vücuttaki oksijensiz radikaller melanin üretimini etkileyen önemli bir faktör haline gelir. Cistanche, bir antioksidan olan ve vücuttaki serbest radikallerin oluşumunu azaltabilen ve böylece melanin üretimini engelleyen cistanoside içerir.

Cistanche Nasıl Kullanılır'a tıklayın

Daha fazla bilgi için:

david.deng@wecistanche.com WhatsApp:86 13632399501

1. Giriş

Derinin rengini kandaki hemoglobin, epidermal tabakadaki melanin pigmenti ve cilt altı dokudaki -karoten belirler. Bunlar arasında derinin rengini esas olarak melanin pigmentinin miktarı ve dağılımı belirlemektedir [1]. Melanin, bazal tabakada bulunan melanosit içindeki melanozomdan sentezlenen bir pigmenttir. Ultraviyole (UV) ışınlarını emer veya saçar ve cilt hücrelerine veya cilt dokularına verilen hasarı bastırmak için faydalı bir işleve sahiptir. Bununla birlikte, aşırı melanin birikimi lekelere, çillere ve pigmentasyona neden olabilir. Hiperpigmentasyona neden olduğu bilinmektedir [2,3].

Melanin pigmenti, eksojen yaşlanmaya neden olan temsili bir tahriş edicidir. UV ışınlarına maruz kalmış melanositlerin melanogeneziyle üretilir ve cilt rengini koyulaştırarak cildi UV ışınlarından koruma gibi yararlı bir işlevi vardır. Melanin pigmenti eumelanin (siyah) ve feomelaninden (kırmızı-kahverengi) oluşur [4,5]. Melanin, substrat olarak bir amino asit türü olan L-tirozin kullanılarak ve L-DOPA (3,4-dihidroksifenilalanin) aracılığıyla üretilir ve ayrıca ana enzimler tirozinaz (TYR) tarafından DOPA-kinona oksitlenir. tirozinaz ile ilişkili protein-1 (TYRP1) ve TYRP2. DOPA-kinon ayrıca sülfidril gruplarının varlığında kırmızı-sarı feomelanine oksitlenir. DOPA-kinon ayrıca sülfidril grupları tükendiğinde dekarboksile edilir, oksitlenir ve ömelanine katalizlenir [4,5]. Tirozinaz enzimi melanin üretiminden sorumlu anahtar enzimdir ve temsili beyazlatıcı maddeler olan meyan kökü ekstresi, Japon meşesi ekstresi, arbutin ve kojik asidin tirozinaz enziminin aktivitesini inhibe ettiği bilinmektedir [6,7]. Özellikle arbutin, melanin için bir hammadde olan L-tirozin ve tirozinazın aktif bölgesine Cu2 plus ile bağlanan kojik asit ile rekabetçi reaksiyona girerek tirozinaz aktivitesinin inhibe edilmesinde rol oynar. Kojik asit ve arbutinin güçlü beyazlatma etkileri olduğu bilinmektedir, ancak cilt tahrişi gibi güvenlik sorunlarının yan etkileri bildirilmiştir [8,9]. Doğal türevli fonksiyonel malzemelerin geliştirilmesi gibi yeni etkili malzemeleri keşfetmek için birçok çalışma yapılmaktadır [8,9].

Bir tür prenilflavon olan sikloheterofilin (C30H30O7), Artocarpus heterophyllus'ta bol miktarda bulunur ve anti-enflamatuar, anti-trombosit aktivite ve antioksidan etkinlik dahil olmak üzere farmakolojik ve biyolojik fonksiyonlara sahip olduğu bildirilmiştir [10-13]. Ayrıca UV-A tarafından indüklenen insan dermal fibroblastları üzerinde antioksidan ve anti-aging etkileri olduğu bildirilmiştir [14,15].

Hal böyle olunca sikloheterofilinin çeşitli hastalıklarda etkili olduğu bildirilmiş ancak sikloheterofilinin melanin üretimine etkisine dair bir araştırma bulunmamaktadır. Bu çalışmada, sikloheterofilinin farelerden türetilen bir melanom hücre dizisi olan B16F10 hücrelerinde melanin üretim mekanizması ile ilgili TYRP1, TYRP2, TYR ve MITF belirteçlerinin ekspresyonu üzerindeki etkilerini inceledim.

2. Sonuçlar ve Tartışma

B16F10 hücre hattında sikloheterofilinin sitotoksisitesini belirlemek için CCK{{0}} testi yapıldı. Hücre yaşayabilirliğini ölçmek için çeşitli konsantrasyonlarda sikloheterofilin eklendi (Şekil 1). 20 µg/mL veya daha yüksek bir konsantrasyonla tedavi edildiğinde, B16F10 hücrelerinin hayatta kalma oranının kontrol grubuna kıyasla önemli ölçüde azaldığı doğrulandı. 10 ug/mL konsantrasyonda sikloheterofilin eklendiğinde, B16F10 hücrelerinin hayatta kalma oranı kontrol grubununkine benzerdi. Bu nedenle ek deneylerde 10, 1 ve 0.1 ug/mL konsantrasyonlarında sikloheterofilin eklendi.

Tirosinaz enzimi L-tirozin ile reaksiyona girerek L-DOPA üretir ve L-DOPA sonunda melanogenezi düzenleyen anahtar bir enzim olarak bilinen tirozinaz tarafından DOPAkinon aracılığıyla melanin pigmenti üretir [4,5]. Bu deneyde, tirozinaz enzim aktivitesinin inhibisyon derecesini değerlendirmek için pozitif kontrol olarak kojik asit kullanıldı. Tirosinaz enzim aktivitesinin inhibisyon derecesi, 10, 1 ve 0,1 µg/mL konsantrasyonlarda sikloheterofilin ile muamele edilerek doğrulandı. Tirosinaz enzim aktivitesinin konsantrasyona bağlı bir şekilde sikloheterofilin tarafından inhibe edildiği doğrulandı (Şekil 2). 10, 1 ve 0,1 µg/mL konsantrasyonlarında sikloheterofilin ile tedavi edilen gruplarda, tirozinaz enziminin inhibitör etkilerinin sırasıyla yüzde 58,0, 27,4 ve 16,9 olduğu doğrulandı.

UV ışınları, epidermisteki keratinositleri uyararak melanositleri uyaran bir hormon olan ve hücre dışına salgılanan - melanosit uyarıcı hormon ( -MSH) ekspresyonunu indükler ve salgılanan -MSH, melanositleri uyarır. Melanokortin 1 reseptörüne (MC1R) bağlanarak hücrede melanin sentezi ile ilgili sinyalleri indükleyerek melanin pigmenti üretimine neden olur [5]. Bu deneyde, B16F10 hücrelerinde melanin üretimini indüklemek için, B16F10 hücrelerinde melanin üretimini indüklemek için 200 nM -MSH kullanıldı [16]. -MSH tedavisi ile artan belirteçler olan TYRP1, TYRP2, TYR ve MITF genlerinin ekspresyon düzeylerinin -MSH ile muamele edilmiş B16F10 hücrelerinde sikloheterofilin tedavisi ile gerçek zamanlı RT-PCR'si belirlendi. B16F10 hücreleri, sikloheterofilin ile muamele edildi ve işaretleyicinin ifadesi, gerçek zamanlı RT-PCR ile doğrulandı. Sonuç olarak, TYRP1, TYRP2, TYR ve MITF ifadelerinin, -MSH ile tedavi edilen gruba kıyasla sikloheterofilin ile tedavi edilen grupta önemli ölçüde azaldığı doğrulandı. Spesifik olarak, 10 µg/mL sikloheterofilin ile tedavi edilen deney grubunda TYRP1, TYRP2, TYR ve MITF genlerinin ifadesi sırasıyla yüzde 53.3, yüzde 26.6, yüzde 58 ve yüzde 34 azaldı (Şekil 3). 1 µg/mL sikloheterofilin ile tedavi edilen deney grubunda, belirteçlerin ekspresyonunun önemli ölçüde azaldığı doğrulandı ve 0,1 µg/mL sikloheterofilin ile tedavi edilen grupta TYRP1 ve TYRP2 genlerinin ekspresyonunun benzer şekilde azaldığı doğrulandı.

Sikloheterofilin tedavisinin melanojenez ile ilgili bir işaretleyicinin mRNA ekspresyon seviyesini azalttığı doğrulandıktan sonra, B16F10 hücrelerinde melanin pigmenti üretiminin önemli ölçüde azalıp azalmadığını belirlemek için melanin pigmenti üretim hızı doğrulandı (Şekil 4) . Sırasıyla 10, 1 ve 0.1 ug/mL konsantrasyonlarda sikloheterofilin ile işlenen B16F10 hücre hatları toplandı ve melanin üretim derecesi doğrulandı. Sonuç olarak, 10 ve 1 µg/mL konsantrasyonlarda sikloheterofilin ile melanin pigmenti üretiminin önemli ölçüde azaldığı doğrulandı (Şekil 4A). Ek olarak, sikloheterofilinle tedavi edilen durumdaki melanin pigmenti üretiminin kontrol grubuna göre azaldığı doğrulandı (Şekil 4B). 10 ve 1 µg/mL sikloheterofilin eklendiğinde, melanin pigmenti üretim hızı sırasıyla yüzde 44,6 ve yüzde 37,8 azaldı ve bu, kontrol grubuna kıyasla önemli ölçüde azaldı (Şekil 4B). Bu sonuçlar, gerçek zamanlı RT-PCR'nin melanogenez ile ilişkili belirteçlerin mRNA ekspresyon seviyeleri üzerindeki deneysel sonuçlarıyla tutarlı olma eğilimindedir.

Askorbik asit gibi antioksidanların, ömelanin üretim sürecinde bir ara madde olan DOPAkinonu L-DOPA'ya indirgeyerek melanin pigmentlerinin sentezini engelleyen önemli bir beyazlatıcı madde olduğu bilinmektedir [16,17]. Sikloheterofilinin de antioksidan etkilere sahip olduğu bildirilmiştir [11,12]. Sikloheterofilinin bu antioksidan etkiye beyazlatmada etkili olabileceği gösterilmiştir. Bu DPPH radikal süpürme testi ile in vitro antioksidan etkisinin doğrulanmasının bir sonucu olarak, yüksek konsantrasyonda sikloheterofilin altında bir pozitif kontrol olan askorbik asidinkiyle karşılaştırılabilir bir antioksidan etkiye sahip olduğu doğrulandı (Şekil 5). Gelecekte, melanositlerde sikloheterofilinin antioksidatif etkileri ve katalaz, SOD1, SOD2 ve SOD3 gibi antioksidatif enzimlerin ekspresyonu hakkında daha fazla araştırma yapılmalıdır.

3. Malzemeler ve Yöntemler

3.1. Deneysel Malzemeler ve Hücre Kültürü

B16F10 hücre dizisi, Korean Cell Line Bank'tan (Kore) satın alındı ​​ve hücre kültürü ortamı, Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamında (DMEM) yüzde 10 fetal sığır serumu (FBS, SFBU-0500, Equitech-bio, Kerrville, TX, ABD) idi. , LM 001–05, Welgene, Gyeongsan-si, Kore) ve yüzde 1 penisilin/streptomisin (Gibco, 15140–122, Waltham, MA, ABD) eklendi. Hücreler bir inkübatörde 37 ◦C ve yüzde 5 CO2'de kültürlendi [16]. Bu deneyde kullanılan sikloheterofilin, DMSO kullanılarak Artocarpus heterophyllus'tan çıkarıldı ve ChemFaces Co.'dan satın alındı ​​(CFN97748, Wuhan, Çin, Saflık Büyük veya eşit yüzde 98).

3.2. Hücre Canlılığı Deneyi Hücre

canlılık CCK-8 solüsyonu (Hücre sayma kiti; EZ−3000, EZ-Cytox, Seoul, DoGen) ile değerlendirildi. B16F10 hücre çizgileri, 2 x 104 hücre/96 oyuklu plaka yoğunluğunda bir kültür ortamında tohumlandı. 24 saat sonra sikloheterofilin (CFN97748, Chemfaces) eklendi. Sikloheterofilin ile işlenen B16F10 hücre çizgisi, 24 saat süreyle inkübe edildi ve 37°C'lik bir inkübatörde 30 dakika süreyle CCK-8 solüsyonu eklendi. Absorbans, bir mikroplaka okuyucu (Epoch, Winooski, VT, ABD, BioTek) kullanılarak 450 nm'de ölçüldü ve hücre canlılığı, hücresiz kontrol grubunun absorbansına göre hesaplandı [16].

3.3. DPPH Testi

3.4. In Vitro Mantar Tirozinaz Aktivitesi

3.5. Kantitatif Gerçek Zamanlı Ters Transkripsiyon-Polimeraz Zincir Reaksiyonu (Q-RT-PCR)

Toplam RNA, Trizol (15596018, Carlsbad, CA, ABD, Thermo Fisher Scientific) kullanılarak izole edildi. RNA konsantrasyonu spektrofotometrik olarak belirlendi (BioTek). Dört mikrogram RNA, ReverTra Ace® ters transkripsiyon kiti (Toyobo, FSQ101, Osaka, Japonya) kullanılarak cDNA'ya ters kopyalandı. Ters transkripsiyon, toplam 200 uL cDNA çözeltisine Tris-EDTA tamponu (pH 8.0) eklenerek durduruldu. TaqMan® Gen Ekspresyon Tahlili setleri, Applied Biosystems'ten satın alınmıştır. Q-RT-PCR'ler, üreticinin talimatlarına göre yapıldı. Kısaca, 20 uL Q-PCR karışımı, 10 uL 2× TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, ABD), 1 µL 20× Taqman ekspresyon testi (Applied Biosystems) ve 50 ng cDNA içeriyordu. Q-PCR karışımı 95 ◦C'de 20 saniye ve 40 kez döngüsel reaksiyon (95 ◦C 1 saniye ve 60 ◦C 20 saniye) ile bir StepOnePlus Sistemi (Applied Biosystems) ile reaksiyona sokuldu. Q-RT-PCR analizlerinde kullanılan TaqMan ekspresyon tahlili için gen tanımlama numaraları Tablo 1'de sunulmaktadır. Farklı numunelerden cDNA miktarlarındaki varyasyonu normalleştirmek için insan GAPDH (Applied Biosystems) kullanıldı.

3.6. Melanin Yarışma Testi

Melanin pigmenti miktarını ölçmek için Hosoi'nin yöntemi kısmen modifiye edildi [17]. Toplam 1 × 105 B16F10 hücresi, 60 mm'lik bir doku kültürü kabına aşılandı. Hücreler 24 saat kültürlendikten sonra, her konsantrasyonda 72 saat boyunca 200 nM -melanosit uyarıcı hormon (-MSH; M4135, Sigma-Aldrich) ve sikloheterofilin (10, 1, 0.1 ug/mL) ilave edildi. Kültür ortamı uzaklaştırıldıktan sonra üzerine 200 µL NaOH (İN; S8045, Sigma-Aldrich) solüsyonu eklendi ve melanin çözülmesi için 60 ◦C'de 2 saat inkübe edildi. Absorbans, bir spektrofotometre (405 nm, Epoch) ile ölçüldü. Pozitif kontrol olarak 100 ug/mL arbutin (A4256, Sigma-Aldrich) kullanıldı. Melanin pigmenti üretiminin inhibisyonu, -MSH muamele koşulları altında üretilen melanin miktarının yüzdesi olarak ifade edildi. Bağımsız olarak üç bağımsız deney gerçekleştirerek gerçekleştirildi.

3.7. İstatistiksel analiz

4. Sonuçlar

Günlük hayatta karşılaşılan UV'nin D vitamini sentezi ve sterilizasyon gibi yararlı işlevleri olmakla birlikte, diğer yönlerden reaktif oksijen türlerinin zincirleme reaksiyonu ile cilt elastikiyetinin kaybolmasına, kırışıklıklara, pigmentasyona, eritem, iltihaplanmaya vb. 19]. Ayrıca UV gibi dış etkenlerin neden olduğu eksojen yaşlanma, canlı vücudunu oluşturan hücrelerin azalması ve bozulması nedeniyle doku hasar gördüğünde normal dokuların işlevini ve yenilenmesini engeller [20,21].

Bu çalışma sayesinde, B16F10 hücrelerini tedavi etmek için uygun sikloheterofilin konsantrasyonunu doğrulamak mümkün olmuştur. 10 µg/mL'lik konsantrasyonun, Şekil 1'de gösterildiği gibi hücrelerin canlılığını etkilemediği doğrulandı. Tirosinaz enziminin aktivite inhibe edici etkisinin ölçüm sonuçlarıyla, sikloheterofilin konsantrasyonlarının 10, 1, ve 0,1 µg/mL, tirozinaz enziminin aktivitesini önemli ölçüde azaltmıştır (Şekil 2). Ek olarak, sikloheterofilinin, -MSH ile tedavi edilen duruma kıyasla belirteçlerin (TYRP1, TYRP2, TYR ve MITF geni) ifadesini önemli ölçüde azalttığı doğrulandı (Şekil 3). Ek olarak, sikloheterofilinin B16F10 hücrelerinde melanin sentezi miktarını azalttığı doğrulandı (Şekil 4). Bu sonuçlara dayanarak, sikloheterofilin yeni bir beyazlatma adayı olarak potansiyel göstermektedir.

Bu çalışma, sikloheterofilinin melanin sentezi üzerindeki inhibitör etkisini doğrulayan ve UV ışınlarının neden olduğu cilt yaşlanmasını önleme olasılığını öne süren ilk çalışmadır. Ayrıca B16F10 hücrelerinin sinyal mekanizmaları, beyazlatmada görev alan sinyal sistemleri ve melanositlerde bulunan çeşitli antioksidan enzimler üzerindeki etkilerinin daha derinlemesine araştırılması gerekli görünmektedir.

Referanslar

1. Bonaventure, J.; Domingues, MJ; Larue, L. Melanositlerin ve melanom hücrelerinin göçünü kontrol eden hücresel ve moleküler mekanizmalar. Pigment Hücreli Melanom Res. 2013, 26, 316–325. [CrossRef] [PubMed]

2. Gilchrest, BA; Eller, MS DNA fotohasarı, melanogenezi ve diğer fotokoruyucu tepkileri uyarır. J. Araştırmak. Dermatol. Semptom Proc. 1999, 4, 35–40. [CrossRef] [PubMed]

3. Sugumaran, M. Ömelanojenezin karşılaştırmalı biyokimyası ve böceklerde fenoloksidaz ve melaninin koruyucu rolleri. Pigment Hücresi Çöz. 2002, 15, 2–9. [CrossRef] [PubMed]

4. İto, S.; Wakamatsu, K. İnsanlarda, farelerde ve diğer hayvanlarda eumelanin ve feomelaninin kantitatif analizi: Karşılaştırmalı bir inceleme. Pigment Hücresi Çöz. 2003, 16, 523–531. [ÇaprazRef]

5. Yoon, YM; Bae, SH; An, SK; Choe, YB; Ahn, KJ; An, IS Ultraviyole Radyasyonun Deri ve Deri Hücresi Sinyal Yolları Üzerindeki Etkileri. Kor. J. Estet. kozmetik. 2013, 11, 417–426.

6. Baek, YS; Ryu, YB; Curtis-Long, MJ; Ha, TJ; Rengasamy, R.; Yang MS; Park, Broussonetia Kozinski'den 1,3- difenil propanın KH Tirosinaz inhibitör etkileri. Biorg. Med. kimya 2009, 17, 35–41. [ÇaprazRef]

7. Kim, HJ; Seo, SH; Lee, BG; Lee, YS Glycyrrhiza uralensis kaynaklı tirozinaz inhibitörlerinin tanımlanması. Bitki Med. 2005, 71, 785–787. [ÇaprazRef]

8. Han, NK; Park, CM; Kwon, JC; Joung, MS; Choi, JW Fagopyrum tataricum özütünün Beyazlatıcı etkisi. J. Soc. kozmetik bilim Kore 2014, 40, 179–186.

9. Kim, BY; Park, SH; Park, BJ; Kim, JJ Androsace şemsiye özünün beyazlatıcı etkisi. J. Soc. kozmetik bilim Kore 2015, 41, 21–26.

10.Lin, CN; Lu, CM; Lin, HC; Diş, SC; Shieh, BJ; Hsu, MF Formosan moraceous bitkilerinden yeni antiplatelet bileşenleri. J. Nat. Üretim 1996, 59, 834–838. [ÇaprazRef]

11. Wang, JP; Raung, SL; Tsao, LT; Hsu, MF; Lin, CN Protein kinaz C'nin blokajı, nötrofil süperoksit anyon oluşumunun siklometresfilin tarafından inhibisyonunda yer alır. Naunyn. Schmiedeberg Kemeri. eczane 1997, 355, 551–558. [ÇaprazRef]

12. Ko, FN; Cheng, ZJ; Lin, CN; Teng, CM Artocarpus heterophyllus'tan izole edilen prenilflavonların çöpçü ve antioksidan özellikleri. Serbest Radikal. Biol. Med. 1998, 25, 160–168. [ÇaprazRef]

13. Cantan, İ.; Yasin, YH; Cemil, S.; Sırat, H.; Basar, N. Artocarpus türlerinden izole edilen prenillenmiş flavonoidlerin ve kalkonların insan tam kanında trombosit agregasyonu üzerindeki etkisi. J. Nat. Med. 2010, 64, 365–369. [ÇaprazRef]

14. Huang, CH; Li, HJ; Wu, NL; Siao, CY; Lin, CN; Chang, HH; Hung, CF Cycloheterophyllin'in İnsan Dermal Fibroblastlarında UVA Kaynaklı Hasara ve Oksidatif Strese Karşı Fotokoruyucu Etkileri. PLoS BİR 2016, 11, e0161767. [ÇaprazRef]

15. Shim, JH UVA ışınlı dermal fibroblastlarda sikloheterofilinin yaşlanma karşıtı etkileri. Kor. J. Eczacılık. 2019, 50, 285–290.

16. Tomita, Y.; Seiji, M. Fare melanomunda tirozinazın inaktivasyon mekanizması. J. Dermatol. 1977, 4, 245–249. [ÇaprazRef]

17. Panzella, L.; Ebato, A.; Napolitano, A.; Koike, K. Melanogenezin geç aşamaları: Kimyasal yönleri ve uygulama fırsatlarını keşfetmek. uluslararası J. Mol. bilim 2018, 19, 1753. [CrossRef]

18. Talvar, HS; Griffiths, CE; Balıkçı, GJ; Hamilton, TA; Voorhees, JJ Fotohasarlı yetişkin insan derisinde azaltılmış tip I ve tip III prokollajenler. J. Invest. Dermatol. 1995, 105, 285–290. [ÇaprazRef]

19. Kim, J.; Lee, CW; Kim, EK; Lee, SJ; Park, NH; Kim, H.S; Kim, HK; Char, K.; Jang, Y; Kim, JW Gynura procumbens ekstraktının insan dermal fibroblastlarında UV-B kaynaklı matris-metalloproteinaz ekspresyonu üzerindeki inhibisyon etkisi. J. Enthnopharmacol. 2011, 137, 427–433. [ÇaprazRef]

20. Kirkwood, TB Yaşlanmanın tuhaf bilimini anlamak. Hücre 2005, 120, 437–447. [ÇaprazRef]

21. Jones, DL; Rando, TA Gelişen modeller ve kök hücre yaşlanması için paradigmalar. Nat. Hücre Biol. 2011, 13, 506–512. [CrossRef] [PubMed]

Daha fazla bilgi için: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501