3. Tartışma

Plumbagin, bitki kaynaklı bir sekonder metabolittir ve anti-inflamatuar, anti-kanser, anti-alerjik ve antibakteriyel aktiviteler dahil olmak üzere çeşitli biyolojik fonksiyonlar gösterir [8,9]. Bununla birlikte, plumbaginin hiperpigmentasyon ve melanoma bağlı melanogenez üzerinde inhibe edici bir etkisinin olup olmadığı bilinmiyordu. Bu çalışmada, plumbaginin B16F10 melanom hücrelerinde melanogenezi güçlü bir şekilde baskıladığını gösterdik ve bu çalışma, plumbaginin anti-enflamatuar, anti-alerjik, antibakteriyel ve anti-melanogenez aktivitelerine dayanan cilt bakım kozmetiklerinin geliştirilmesi için bir fırsat sağlayabilir.

İlgili araştırmalara göre cistanche, "ömrü uzatan mucizevi bitki" olarak bilinen yaygın bir bitkidir. Ana bileşeni, antioksidan, antienflamatuar ve bağışıklık fonksiyonunun teşviki gibi çeşitli etkilere sahip olan kistanosiddir. Cistanche ve cilt beyazlatma arasındaki mekanizma, cistanche glikozitlerinin antioksidan etkisinde yatmaktadır. İnsan derisindeki melanin, tirozinaz tarafından katalize edilen tirozinin oksidasyonu ile üretilir ve oksidasyon reaksiyonu oksijenin katılımını gerektirir, bu nedenle vücuttaki oksijensiz radikaller melanin üretimini etkileyen önemli bir faktör haline gelir. Cistanche, bir antioksidan olan ve vücuttaki serbest radikallerin oluşumunu azaltabilen ve böylece melanin üretimini engelleyen cistanoside içerir.

Beyazlatma İçin Rou Cong Rong Faydalarına Tıklayın

Daha fazla bilgi için:

david.deng@wecistanche.com WhatsApp:86 13632399501

Melanogenezisin upregülasyonu, tümör dokularının yanı sıra kanda aşırı eksprese edilmiş tirozinaz seviyeleri ile malign melanomda sıklıkla gözlendiğinden, melanogenezin malign melanomların kemoterapisi için potansiyel bir hedef olduğu açıktır [1]. Bu çalışmada, plumbaginin, melanogenez ile ilişkili transkripsiyonel makineden bağımsız olarak tirozinaz aktivitesini doğrudan baskıladığını bulduk (Şekil 6). Bu nedenle, sonuçlarımız, plumbaginin malign melanom tedavisi için önleyici ve terapötik bir stratejinin potansiyel bir bileşeni olabileceğini düşündürmektedir. Gerçekten de, plumbaginin melanom tedavisi üzerindeki anti-melanom, kemo-duyarlılaştırıcı ve radyo-duyarlılaştırıcı etkileri bildirilmiştir [17-21].

Plumbaginin anti-kanser ve anti-inflamatuar etkilerini ele alan önceki çalışmalarda, in vitro modellerde yaklaşık 5–10 µM plumbagin (bu çalışmada kullanılan konsantrasyondan daha yüksek) kullanılmıştır [17,22 ,23]. Bu nedenle, cilt bakım kozmetikleri tarafından zarar görebilen normal keratinositler (HaCaT) ve lens epitel hücreleri (B3) dahil olmak üzere proliferatif hücrelerde plumbaginin toksik etkisini araştırdık. Sonuçlarımız, yaklaşık 0.5–1 µM plumbagin gibi daha düşük konsantrasyonların normal keratinositler ve lens epitel hücreleri için toksik olmadığını, ancak tirozinaz aktivitesini ve melanin sentezini azaltmak için yeterince etkili olduğunu gösterdi. Ek olarak, plumbaginin, iyi bilinen cilt beyazlatma ajanları olan 1 mM arbutin veya 0.2 mM kojik asitten daha etkili bir şekilde melanogenezi baskıladığını da bulduk. Bu sonuçlar, plumbaginin cilt beyazlatıcı kozmetikler geliştirmek için bir bileşen olarak kullanım için güvenli olduğunu göstermektedir.

Bu çalışmada, Plumbaginin tirozinaz enzim reaksiyonu üzerindeki inhibitör etkilerini, L-DOPA oksidasyonuna dayalı hücresel ve hücresiz tirozinaz aktivite analizleri kullanarak inceledik. Yine de, plumbaginin tirozinaz aktivitesini nasıl engellediğine dair kesin bir moleküler mekanizma önermedik. Bu mekanizma, plumbaginin tirozinaz ile doğrudan etkileşip etkileşime girmediğini ve oksidaz aktivitesini inhibe edip etmediğini veya tirozinaz aktivitesinin azalmasına yol açan dolaylı etkilerinin olup olmadığını belirlemek için daha fazla araştırılmalıdır.

4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Reaktifler ve Antikorlar

Mantarlardan saflaştırılmış Plumbagin, -MSH (M4135), arbutin (A4256), kojik asit (K3125), L-DOPA (333786) ve tirozinaz (T3824) Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) satın alınmıştır. MITF'ye karşı antikorlar (#12590), p-AKTS473 (#4060), p-AKTT308 (#13038), p-CREB (#9198), p-ERK1/2 (#4370), ERK1/2 (#9102), H2AX (#9718), PARP (#5625) ve kaspaz-3 (#9665), Cell Signaling Technology'den (Danvers, MA, ABD) satın alınmıştır. Tirosinaz (sc-7833) ve -tubulin (sc-9104), Santa Cruz Biotechnology'den (Dallas, TX, ABD) satın alınmıştır.

4.2. Hücre Kültürü ve Hücre Canlılığı Testi

4.3. immünoblotlama

4.4. Hücre İçi ve Hücre Dışı Melanin İçeriğinin Ölçümü

Melanin içeriği, daha önce açıklanan bir yöntem kullanılarak hafif modifikasyonla belirlendi ve ölçüldü [2,24]. Melanin içerik analizi için B16F10 hücreleri, yüzde 10 fetal sığır serumu içeren fenol kırmızısı içermeyen DMEM içinde kültürlendi. B16F10 hücreleri, 3 veya 4 gün boyunca plumbagin varlığında veya yokluğunda -MSH tedavisi ile kültürlendi. Kültürlenen hücreler veya ortam toplandı ve peletler, 1 saat boyunca 80°C'de yüzde 10 DMSO içeren İN NaOH içinde çözüldü. Melanin içeriği, 475 nm'de (OD475) bir absorbans okuyucu kullanılarak ölçüldü ve melanin içeriği daha sonra hücresel protein konsantrasyonuna normalleştirildi.

4.5. RNA İzolasyonu ve Kantitatif RT-PCR

4.6. Hücresel Tirozinaz Aktivite Testi

Hücresel tirozinaz aktivitesi, daha önce açıklanan modifikasyonlu bir yöntem [25,26] kullanılarak belirlendi. Kültürlenmiş B16F10 hücreleri, plumbagin varlığında veya yokluğunda -MSH ile inkübe edildi ve hücreler daha sonra yıkandı ve yüzde 1 sodyum deoksikolat ve yüzde 0,5 Triton X içeren PBS ile parçalandı{{8} }. Protein konsantrasyonu belirlendikten sonra, 50 ug protein, 2.0 mM L-DOPA ve 0.1 M PBS (pH 6.8) ile 37°C'de 1 saat süreyle inkübe edildi. L-DOPA'nın oksidasyonu, bir absorbans okuyucu kullanılarak 475 nm'de (OD475) ölçülmüştür. Aktivite aşağıdaki formül kullanılarak ölçülmüştür: tirozinaz aktivitesi (yüzde)=(numunenin OD475'i/kontrolün OD475'i) × 100.

4.7. Hücresiz Tirozinaz Aktivite Testi

4.8. DPPH Radikal Temizleme Aktivitesi Deneyi

4.9. İstatistiksel analiz

5. Sonuçlar 

Bu çalışmanın başlıca bulguları, plumbaginin (i) tirozinaz aktivitesini inhibe ederek -MSH kaynaklı melanin sentezini baskılamasıdır; (ii) melanojenez ile ilişkili AKT ve ERK1/2 aktivasyonu dahil olmak üzere MITF bağlantılı transkripsiyonel makine ve sinyal transdüksiyon kaskadlarını etkilemez; ve (iii) konsantrasyonu 5 uM'den az olduğunda normal keratinositlerde (HaCaT) ve lens epitelyal (B3) hücrelerinde toksisiteye neden olmaz. Birlikte ele alındığında, plumbagin, CREB-MITF transkripsiyonel ekseninden bağımsız olarak tirozinaz aktivitesini inhibe ederek -MSH kaynaklı melanin sentezini iptal eder. Bu nedenle bu sonuçlar, cilt beyazlatıcı kozmetiklerin geliştirilmesinde kullanılarak hiperpigmentasyonu azaltmak için umut verici ve güvenli bir doğal ürün olan plumbagin önermektedir.

Kısaltmalar

Referanslar

1. Riley, PA Melanogenesis ve melanom. Pigment Hücresi Çöz. 2003, 16, 548–552. [CrossRef] [PubMed]

2. Bae, JS; Han, M.; Yao, C.; Chung, JH Chaetocin, ERK aktivasyonu yoluyla B16F10 fare melanom hücrelerinde IBMX kaynaklı melanogenezi inhibe eder. kimya Biol. Etkileşime girmek. 2016, 245, 66–71. [CrossRef] [PubMed]

3. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, M.Ö. Askarian-Amiri, ME Melanogenezde sinyal yolları. uluslararası J. Mol. bilim 2016. [CrossRef] [PubMed]

4. Kim, HJ; Yonezawa, T.; Teruya, T.; Woo, JT; Cha, BY Nobiletin, bir polietoksi flavonoid, insan melanositlerinde endotelin-1 artı SCF kaynaklı pigmentasyonu azalttı. Fotokim. Fotobiyol. 2015, 91, 379–386. [CrossRef] [PubMed]

5. Kang, SJ; Choi, BR; Lee, EK; Kim SH; Yi, HY; park, insan kaynakları; Şarkı, CH; Lee, YJ; Ku, SK Kurutulmuş nar konsantre tozunun B16F10 melanom hücrelerinde melanogenez üzerindeki inhibitör etkisi; p38 ve PKA sinyal yollarının katılımı. uluslararası J. Mol. bilim 2015, 16, 24219–24242. [CrossRef] [PubMed]

6. Kim, JW; Kim Merhaba; Kim, JH; Kwon, OK; Oğul ES; Lee, CS; Park, YJ Şifalı mantar Ganoderma lucidum'dan yeni bir melanogenez inhibitörü olan ganodermanondiol'ün etkileri. uluslararası J. Mol. bilim 2016, 17, 1798. [CrossRef] [PubMed]

7. Tsao, YT; Huang, YF; Kuo, CY; Lin, YÇ; Çan, WC; Wang, WK; Hsu, CW; Lee, CH Hinokitiol, B16F10 fare melanom hücrelerinde AKT/mTOR sinyali yoluyla melanogenezi inhibe eder. uluslararası J. Mol. bilim 2016, 17, 248. [CrossRef] [PubMed]

8. Padhye, S.; Dandawate, P.; Yusufifi, M.; Ahmed, A.; Sarkar, FH Plumbagin ve analoglarının tıbbi özellikleri üzerine bakış açıları. Med. Res. Rev. 2012, 32, 1131–1158. [CrossRef] [PubMed]

9. Gupta, SC; Kim, JH; Prasad, S.; Aggarwal, BB Nutrasötikler tarafından enflamatuar yolların modülasyonu yoluyla tümör hücrelerinin hayatta kalma, çoğalma, istila, anjiyogenez ve metastazının düzenlenmesi. Kanser Metastaz Rev. 2010, 29, 405–434. [CrossRef] [PubMed]

10.Jackson, JK; Higo, T.; Avcı, WL; Burt, anti-artritik maddeler olarak HM Topoizomeraz inhibitörleri. İltihap Res. 2008, 57, 126–134. [CrossRef] [PubMed]

11. Ahmed, A.; Banerjee, S.; Wang, Z.; Kong, D.; Sarkar, insan göğüs kanseri hücrelerinin FH Plumbagin ile indüklenen apoptozuna, NF-κB ve Bcl-2'nin etkisizleştirilmesi aracılık eder. J. Hücre. biyokimya 2008, 105, 1461–1471. [CrossRef] [PubMed]

12. Aziz, MH; Dreckschmidt, NE; Verma, AK Tıbbi bir bitkiden türetilen naftokinon olan Plumbagin, hormona dirençli prostat kanserinin büyümesinin ve istilasının yeni bir inhibitörüdür. Kanser Arş. 2008, 68, 9024–9032. [CrossRef] [PubMed]

13. Tasni, KA; Rakesh, S.; Rojini, G.; Ratheeshkumar, T.; Srinivas, G.; Priya, S. BRCA'da östrojene bağımlı hücre sinyali ve apoptoz1-plumbagin ve diğer kemoterapötik ajanlara yanıt olarak BG1 yumurtalık kanseri hücrelerini bloke etti. Ann. Oncol. 2008, 19, 696–705. [CrossRef] [PubMed]

14. Gomathinayagam, R.; Sowmyalakshmi, S.; Mardhatillah, F.; Kumar, R.; Ekberşa, MA; Damodaran, C. Küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücreleri üzerinde doğal bir bileşik olan plumbaginin antikanser mekanizması. Antikanser Res. 2008, 28, 785–792. [PubMed]

15. Wang, CC; Çan, YM; Sung, SC; Hsu, YL; Chang, JK; Kuo, PL Plumbagin, insan melanomu A375.S2 hücrelerinde reaktif oksijen türleri/c-Jun N-terminal kinaz yolları yoluyla hücre döngüsü durmasını ve apoptozu indükler. kanser Letonya 2008, 259, 82–98. [CrossRef] [PubMed]

16. Shih, YW; Lee, YÇ; Wu, PF; Lee, YB; Chiang, TA Plumbagin, matriks metalloproteinaz-2 ve ürokinaz-plazminojen aktivatörü üretimlerini azaltarak karaciğer kanseri HepG2 hücrelerinin istilasını ve göçünü engeller. Hepatol. Res. 2009, 39, 998–1009. [CrossRef] [PubMed]

17. Anuf, AR; Ramachandran, R.; Krishnasamy, R.; Gandi, PS; Periyasamy, S. Plumbago rosea ve onun saflaştırılmış bileşeni olan plumbaginin SK-MEL 28 melanom hücre hatları üzerindeki çoğalmaya karşı etkileri. Eczacılık. Res. 2014, 6, 312–319.

18. Gowda, R.; Şarma, A.; Robertson, GP Selekoksib ve plumbaginin melanom tümör büyümesi üzerindeki sinerjistik inhibitör etkileri. kanser Letonya 2017, 385, 243–250. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, J.; Şen, S.; Peng, R.; Chen, R.; Jiang, P.; Li, Y.; Zhang, L.; Lu, J. Plumbagin, insan melanom A375 hücrelerinde ölüm reseptörünün yukarı regülasyonu yoluyla TRAIL aracılı apoptozu geliştirir. J. Huazhong Üniv. bilim Teknoloji Med. bilim 2010, 30, 458–463. [CrossRef] [PubMed]

20. Nair, S.; Nair, RR; Srinivas, P.; Srinivas, G.; Pillai, MR Plumbaginin rahim ağzı kanseri hücrelerinde radyosensitize edici etkileri, apoptotik yolun modülasyonu yoluyla olur. Mol. Kanserojen. 2008, 47, 22–33. [CrossRef] [PubMed]

21. Prasad, VS; Devi, PU; Rao, B.S; Kamath, R. Plumbaginin in vitro yetiştirilen fare melanom hücreleri üzerindeki radyo-duyarlılaştırıcı etkisi. Hintli J. Uzm. Biol. 1996, 34, 857–858. [PubMed]

22. Li, YC; O, SM; O, ZX; Li, M.; Yang, Y.; Pang, JX; Zhang, X.; Chow, K.; Zhou, S.; Duan, W.; et al. Plumbagin, insan küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücrelerinde PI3K/Akt/mTOR yolunun inhibisyonu yoluyla apoptotik ve otofajik hücre ölümüne neden olur. kanser Letonya 2014, 344, 239–259. [CrossRef] [PubMed]

23. Dama, R.; Şarma, D.; Sandur, SK; Khanam, S.; Poduval, TB Plumbaginin anti-enflamatuar etkilerine, lenfositlerde NF-κB aktivasyonunun inhibisyonu aracılık eder. uluslararası İmmünofarmakol. 2009, 9, 949–958. [CrossRef] [PubMed]

24. Kim, B.; Lee, SH; Choi, KY; Kim, Yeni bir niasinamid türevi olan HS N-Nikotinoil tiramin, MITF gen ekspresyonunu baskılayarak melanogenezi inhibe eder. Avro. J. Pharmacol. 2015, 764, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

25. Lee, HY; Jang, EJ; Bae, SY; Jeon, JE; Park, HJ; Shin, J; Lee, SK Deniz süngeri Phorbas sp.'den elde edilen oldukça oksijenli bir diterpenoid olan Gauguin D'nin tirozinaz ekspresyonunu ve bozunmasını modüle ederek anti-melanojenik aktivitesi. Mart Uyuşturucu 2016, 14, 212. [CrossRef] [PubMed]

26. Sarıcı, AJ; Harris, H. Tirozinazın tirozin hidroksilaz ve DOPA oksidaz aktiviteleri için yeni deneyler. Avro. J. Biochem. 1991, 198, 317–326. [CrossRef] [PubMed]

Daha fazla bilgi için: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501