Gıda Antioksidan Bileşiklerinin Koruyucu Etkilerini Test Etmek İçin Bir Model Olarak Zebra Balığı Embriyonu

E-postatina.xiang@wecistanche.comdaha fazla bilgi için.

Soyut:antioksidanGıda bileşiklerinin aktivitesi, sağlık yararları ve kronik hastalıkların önlenmesi ile korelasyonu nedeniyle en çok ilgi çeken özelliklerden biridir. Bu aktivite genellikle, in vivo etkileri veya etki mekanizmalarını tahmin edemeyen in vitro testler kullanılarak ölçülür. Bu çalışmanın amacı, gıdalarda doğal olarak bulunan altı fenolik bileşiğin (naringenin, apigenin, rutin, oleuropein, klorojenik asit ve kurkumin) ve üç karotenoidin (likopen B, -karoten ve astaksantin) in vivo koruyucu etkilerini değerlendirmektir. bir zebra balığı embriyo modeli. Zebra balığı embriyosu, dokuz antioksidan bileşiğin her biri ile ön işleme tabi tutuldu ve daha sonra bilinen bir indükleyici olan tertbütil hidroperoksite (tBOOH) maruz bırakıldı.oksidatif streszebra balığı içinde. Ön işleme tabi tutulmuş embriyolara karşı tBOOH ile indüklenen ölümcüllük ve dismorfojenezin konsantrasyon-tepki karşılaştırılmasıyla önemli farklılıklar belirlendi.antioksidanBileşikler. Oksidatif stres kaynaklı öldürücülüğe karşı -karoten hariç her bileşiğin koruyucu etkisi bulundu. Ayrıca apigenin, rutin ve kurkumin de dismorfojeneze karşı koruyucu etkiler göstermiştir. Öte yandan, -karoten, tek başına tBOOH tedavisine kıyasla artan öldürücülük ve dismorfojenez sergilemiştir.

anahtar kelimeler: oksidatif stres; zebra balığı embriyosu; antioksidan etki; polifenoller; karotenoidler

1. Giriş

Reaktif oksijen türleri (ROS) ve reaktif nitrojen türleri (RNS) hücre metabolizması sırasında ortaya çıkar. Normal bir fizyolojik durum için gereklidirler, ancak aşırı olduğunda patolojik süreçlere katılırlar [1]. Aerobik organizmalar, ROS'un neden olduğu oksidatif hasarı önlemek için savunmalara sahiptir.antioksidanendojen olarak üretilen antioksidan bileşikler veya antioksidanların diyetle alınması dahil olmak üzere enzimler ve/veya enzimatik olmayan mekanizmalar [2].
Dengesizlik, reaktif türlerin konsantrasyonununantioksidanorganizmanın savunması deniroksidatif stres(İS) [3]. OS'nin sonuçları arasında makrofaj alımı; lipidlerin ve proteinlerin normal işleyişinin inhibisyonu; ve mitokondriyal, zar ve DNA hasarı [4-7]. Bu değişiklikler, diğerleri arasında kanser, yaşlanma, diyabet, romatoid artrit ve kardiyovasküler ve nörodejeneratif hastalıklar gibi çeşitli patolojilerle ilişkilendirilmiştir [8-11].

Çeşitli araştırmalar, bir organizmanın aşırı ROS üreten fizyopatolojik durumlarda (UV maruziyeti, sigara içme, kirli hava, vb. nedeniyle) oksidatif hasarı [12] azaltmak için diyet yoluyla antioksidan alımını gerektirdiğini bulmuştur. Fenolik bileşikler, vitaminler, karotenoidler gibi çeşitli antioksidanlar diyet yoluyla alınır.flavonoidler. "Fenolik bileşikler" terimi, aromatik veya alifatik yapılara bağlı bir fenol grubuna sahip herhangi bir maddeyi belirtir. Fenolik bileşikler bitkilerden gelir ve en önemli ikincil metabolitler arasındadır; hayvanlar alemindeki varlıkları, diyet yoluyla tüketilmelerinden kaynaklanmaktadır. Bu bileşikler arasında,flavonoidleren çok çalışılan ve bol olan; kimyasal yapıları birflavonoidüç halkada (C6–C3–C6) düzenlenmiş 15 karbon atomundan oluşan çekirdek [13]. Antioksidan mekanizmaları, enzimlerin inhibisyonunu veya serbest radikallerin üretilmesinde, ROS alımında ve endojen antioksidan savunmaların korunmasında rol oynayan eser elementlerin şelasyonunu içerir [14]. Ortalamaflavonoidalımının 23 mg/gün olduğu tahmin edilmektedir [15,16] ve birincil kaynaklar siyah çay, kırmızı şarap, soğan, elma ve biradır [17,18].

Antioksidan aktivitelerinden dolayı incelenen diğer bir grup bileşik ise karotenoidlerdir. Yapıları, serbest radikallerle etkileşime girmelerine izin veren bir dizi konjuge C=C bağını (polien) içeren pigmentlerdir; bu nedenle, etkili antioksidanlar olarak hareket edebilirler [19]. Karotenoidler doğal sistemlerde geniş bir dağılıma sahiptir ve farklı hastalıkları önlemedeki rolleri, özellikle -karoten, lutein ve likopen gibi diyette bulunan bileşikler için incelenmiştir [18,20,21].

rollerinin belirlenmesiantioksidanlaroksidatif süreçlerle ilişkili hastalıklar ve bozukluklarda, in vivo koruyucu etkilerin analiz edilmesi için gereklidir. Bu nedenle laboratuvarımız, bu türlerin koruyucu etkilerini değerlendirmek için bir zebra balığı (ZF) embriyo modeli geliştirmiştir.antioksidanbileşikler [22].Oksidatif strestertbütil hidroperoksit (tBOOH) kullanılarak indüklenir. tBOOH, Fenton reaksiyonu yoluyla bütoksil radikalleri üretir [23]. Oluşan radikaller, tiyol gruplarının ve glutatyon rezervlerinin hücre içi tükenmesini destekleyerek, maruz kalan zebra balığı embriyolarında öldürücülük ve dismorfojenezde önemli bir artış sağlar. Bu model, tBOOH'ye maruz bırakılan zebra balığı embriyoları için ölümcüllük ve dismorfojenezin konsantrasyon-etki eğrileri ile antioksidanlarla ön işleme tabi tutulmuş embriyoların eğrileri arasında bir karşılaştırmaya izin verir; analiz edilen antioksidan bileşiğin koruyucu etkisini araştırmak için istatistiksel analiz yapılabilir.

Bu çalışmanın amacı, zebra balığı embriyolarında oksidan kaynaklı gelişimsel toksisiteye karşı antioksidan aktiviteye sahip gıda bileşiklerinin in vivo koruyucu etkilerini değerlendirmektir.

2. Sonuçlar

2.1. Zebra Balığı Embriyolarında tBOOH için Konsantrasyon Etkisi Eğrileri

Araştırma grubumuz daha önce bir ZF embriyosu geliştirdi ve onayladıoksidatif streskoruyucu aktivitesini değerlendirmek için bir modelantioksidanmaddeler (22).

Zebra balığı embriyoları, öldürücülük ve dismorfojenez eğrileri elde etmek için tertbütil hidroperoksite (tBOOH) maruz bırakılır. Zebra balığı embriyoları, 1 ila 3.5 mM arasında değişen farklı konsantrasyonlarda döllenmeden 24 ila 48 saat sonra (hpf) tBOOH'ye maruz bırakılır (Şekil 1). Ölümcül konsantrasyon 50'nin (LC50) 2,1 mM olduğu keşfedilirken, dismorfojenez (EC50) için etkili konsantrasyon 50'nin 1.7 mM olduğu keşfedildi. Yukarıda bahsedilen eğriler, daha önce antioksidan bileşiklere maruz bırakılan veya edilmeyen zebra balığı embriyolarını karşılaştırmak için kullanıldı, ardından tBOOH'ye maruz bırakıldılar.

2.2. Zebra Balığı Embriyolarında Antioksidan Bileşiklerin Koruyucu Etkilerinin Belirlenmesi

Daha önce açıklanan zebra balığı modeli, gıdalarda bulunan altı polifenol ve üç karotenoidin koruyucu etkilerini değerlendirmek için kullanıldı.

Altı polifenolden üçüflavonoidler: naringenin (20 uM), apigenin (10 uM) ve rutin(10 uM). Üçflavonoidlerölümcüllük için konsantrasyon-tepki eğrilerinde önemli bir kayma yarattı. Ayrıca apigenin ve rutin dismorfogeneze karşı koruyucu etki gösterirken naringenin dismorfogeneze karşı koruyucu etki göstermedi (Şekil 2).

Oleuropein（15 μM）, klorojenik asit （20 uM） ve kurkumin（15 μM） de analiz edildi. Bu polifenoller, ölümcüllük için konsantrasyon-tepki eğrilerinde önemli bir kayma ile sonuçlandı. Sadece kurkumin dismorfogeneze karşı koruyucu etki göstermiştir (Şekil 3).

Ayrıca karotenoidler olan likopen（20 μM）, astaksantin（20 μM） ve -karoten（25 μM） değerlendirildi. Likopen ve astaksantin, ölümcüllük için konsantrasyon-tepki eğrilerinde önemli bir kayma ile sonuçlandı. Buna karşılık karotenoidlerin hiçbiri dismorfojeneze karşı koruyucu bir etki göstermedi (Şekil 4). Ayrıca, -karoten, olası bir prooksidan etkiyi gösterebilecek ölümcüllük ve dismorfojenez eğrilerinde sola doğru bir kayma ile sonuçlanmıştır.

3. Tartışma

Oksijen insan yaşamı için gereklidir; ancak aynı zamanda serbest radikaller ve reaktif oksijen türleri (ROS) gibi toksik maddeler üretir; bu maddeler oksitleyici, kararsız ve reaktiftir. Ayrıca herhangi bir makromolekül ile reaksiyona girebilir ve hücre hasarına neden olabilirler [24]. Bu oksitleyici maddelere karşı koymak için vücut, süperoksit dismutaz ve glutatyon peroksidaz gibi antioksidan enzimleri ve diyetten elde edilen antioksidan bileşikleri kullanır. Bu nedenle, bileşiklerin antioksidan kapasitesinin incelenmesi, son birkaç yılda ilgi toplamaktadır. Antioksidan aktiviteyi belirlemek için birkaç in vitro teknik vardır, ancak bunların hiçbiri fizyolojik bir durumu yeniden üretmediğinden beslenme açısından sınırlamaları vardır [25]. Bu nedenle, in vivo teknikleri içeren bir yöntem, daha etkili sonuçlara yol açacaktır, çünkü oksidatif stres, birçok sistem koşuluna, özellikle reaksiyonların kinetik kısımlarına bağlı mekanizmaları ifade eder. Ekibimiz, in vitro olarak geniş çapta incelenen dokuz antioksidan bileşiğin koruyucu etkilerini test etmek için değerli bir in vivo yöntem olabilecek bir ZF embriyo modelini [22] kullandı. Altı fenolik bileşik ve üç karotenoidi değerlendirdik. Fenolik bileşikler, insan diyetinin antioksidan potansiyeline önemli bir katkıyı temsil eder; Bu bileşiklerden flavonoidler en çok çalışılan ve bol bulunanlardır. Apigenin, rutin ve naringenin flavonoidlerinin antioksidan aktivitesi incelendi. Bu flavonoidler, temel olarak çeşitli meyvelerde, bitkilerde ve sebzelerde, kabuklu yemişlerde ve soğanlarda bulunan biyoaktif bileşiklerdir. In vitro çalışmalar, bu flavonoidlerin hidroksil radikallerini, süperoksiti, hidrojen peroksiti, nitrik oksit radikallerini, DPPH'yi ve lipid peroksidasyonunu etkili bir şekilde nötralize ettiğini göstermiştir [26-29]. Chen ve diğerleri, 2012'de [30], rutin dahil on beş flavonoidin UV kaynaklı fototoksisiteye karşı ROS temizleme kapasitelerini değerlendirmek için bir zebra balığı larva modeli kullanarak bir QSAR analizi gerçekleştirdi. Önceki çalışmalara uygun olarak, güçlü bir biyolojik aktivite için gerekli olan en az iki hidroksil grubu ile iki hidroksil grubunun ve konumlarının önemi sonucuna varmışlardır [30,31]. Ayrıca, C3, C5 ve C7 pozisyonlarındaki hidroksil gruplarının daha iyi flavon stabilitesi ve aktivitesi sağladığı belirlendi [31]. Sonuçlarımız, üç flavonoid için tBOOH kaynaklı öldürücülüğe karşı koruyucu bir etki gösterdi. Apigenin ve rutin de dismorfojeneze karşı koruyucu etkiler gösterdi; ancak naringenin dismorfogenez üzerinde herhangi bir etki göstermedi.

Flavonoidlere ek olarak oleuropein, klorojenik asit ve kurkuminin antioksidan etkileri de değerlendirildi. In vitro ve in vivo çalışmalar göstermiştir ki bu

üç fenolik bileşiğin önemli antioksidan etkileri vardır [32-34]. Oleuropein, zeytin yapraklarında, sızma zeytinyağında ve Oleaceae familyasının bazı türlerinde bulunan bir biyofenoldür [32]. Klorojenik asitler (CGA'lar), kafeik ve kinik asitler arasında oluşan esterlerdir ve insan diyetinde bulunan bir grup polifenolleri temsil eder [35]. Birkaç çalışma, kahve, çay, şarap ve çeşitli meyve suları gibi CGA içeren içeceklerin içilmesinin farklı kronik hastalıklara yakalanma riskini azalttığını göstermiştir [36-38]. Bu azalmanın nedenlerinden biri, serbest radikalleri azaltmak ve oksidasyon reaksiyonlarını engellemek için hidrojen atomları bağışlayan CGA'ların antioksidan kapasitesidir [35]. Curcumin, gıda ürünlerinde renklendirme ve baharatlama için kullanılan bir polifenoldür. Antioksidan aktivitesi son birkaç yılda incelenmiştir ve bir çalışma, biyomembranları peroksidatif hasara karşı koruyabileceğini düşündürmektedir [39]. ZF embriyo modeli kullanılarak oleuropein, klorojenik asit veya kurkumin ile ön tedavinin tBOOH ile indüklenen oksidatif stresin mortaliteyi indükleyen etkisini azalttığı; bununla birlikte, dismorfogeneze karşı önemli bir koruyucu etki sadece kurkumin için gözlenmiştir.

Antioksidan özelliklere sahip başka bir grup, her yerde bulunan bir izoprenoid pigment grubu olan karotenoidlerdir. Singlet oksijenin söndürücüleri ve ROS süpürücüleridir [40]. Karotenoidlerin antioksidan ve prooksidan aktivitesinin altında yatan moleküler mekanizmalar hala tam olarak anlaşılamamıştır. En çok çalışılan karotenoidler arasında likopen ve -karoten bulunur. Bunlar domates, domates sosu, çeşitli meyveler, algler ve sebzelerde bol miktarda bulunur [18,41]. Bu karotenlerin koruyucu etkileri değerlendirildiğinde, likopenin embriyonik ölümcüllüğe karşı koruyucu etki ile antioksidan aktivite gösterdiği; bununla birlikte, dismorfojeneze karşı hiçbir etki bulunmadı. Öte yandan, -karoten, tek başına oksidanın etkisine kıyasla ZF embriyolarında letalite ve dismorfogenez insidansını arttırdı; bu, yüksek dozlarda -karoten'in antioksidan etkilere sahip olduğunu ve ardından yüksek oksijen geriliminde yan etkileriyle ilişkili olabilecek bir prooksidan etkinin olduğunu gösteren çalışmalarla uyumludur [42]. Ayrıca, bir çalışma, -karoten takviyesinin, diyabetik erkek sigara içenlerin toplam mortalitesi üzerinde plaseboya kıyasla koruyucu bir etkisinin olmadığını göstermiştir [43]. Değerlendirilen başka bir karotenoid astaksantin idi; alg, maya, somon, alabalık, kril, karides ve kerevitte bulunan bir ksantofil karotenoiddir. Pro-Vitamin A aktivitesi olmayan kırmızı, yağda çözünen bir antioksidan pigmenttir [44]. Çalışmamızda astaksantin öldürücülüğe karşı koruyucu etki göstermiş, ancak dismorfogenez üzerinde herhangi bir etki bulunamamıştır.

Sonuç olarak, değerlendirilen dokuz molekülden sekizi, ZF embriyonik öldürücülüğüne karşı koruyucu etkileri olan antioksidan aktivite gösterdi. Sadece apigenin (10 µM), rutin (10 µM) ve kurkumin (15 µM) ek olarak tBOOH ile indüklenen oksidatif stresten kaynaklanan dismorfogeneze karşı koruyucu etkiler sergiledi. Buna karşılık, -karotenin LC50 ve EC50 değerlerini düşürdüğü için tam tersi etki yaparak mortalite ve dismorfojenez oranını arttırdığı bulundu. Oksidatif ve antioksidatif kuvvetlerin dengesi ve zamanlaması, embriyonik gelişimin uygun şekilde düzenlenmesi ve zamanlamasının anahtarıdır [45]. Bu antioksidanların kinetiklerindeki veya etki mekanizmalarındaki farklılıklar, dismorfojeneze karşı farklı koruyucu kapasitelerin önde gelen nedeni olabilir. Embriyonik gelişim sırasında neden sadece bazı bileşiklerin morfogenez üzerinde koruyucu etkiler gösterdiğini araştırmak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. Bu çalışma, embriyotoksik etki (ölümcül) ve dismorfojenez etki (teratojenisite) arasında ayrım yapmaya çalıştı. Bazı durumlarda, malformasyonların önce gelmesi ve ölümle sonuçlanması muhtemeldir. Diğer durumlarda, ölümcüllük ve malformasyon farklı nedenlere bağlı olabilir. Bir bileşik öldürücü ve dismorfojenez konsantrasyon-tepki eğrileri arasındaki ayrımı arttırdıysa, bu iki tezahürün bağımsızlığından şüphelenilebilir. Çalışmamızda test edilen tüm antioksidan bileşikler, ölümcül doz üzerinde teratojenik etkiyi iki kattan fazla artırmadı; bu nedenle, herhangi bir antioksidan bileşik için teratojenik potansiyel artışı gözlemlenmemiştir [46].

Toplamda, bu sonuçlar, bu ZF embriyo modelinin, gıdayı oluşturan antioksidan moleküllerin koruyucu etkilerini analiz etmek için değerli bir araç olduğunu göstermektedir. Apigenin, rutin ve kurkuminin çalışmamızda en yüksek koruyucu etkiyi göstermesinin kimyasal-yapısal nedenlerini belirlemek için daha ileri analizlere ihtiyaç vardır; örneğin, nicel yapı-aktivite ilişkilerini (QSAR'lar) belirlemek için.

4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Etik Beyanı

Zebra balığı larvalarını ve embriyolarını içeren prosedürler, Barselona Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu, Katalonya Hükümeti Hayvancılık ve Balıkçılık Dairesi'nin 7971 numaralı yetki numarası veya protokolü (ProcedureDAAM 7971) tarafından yetkilendirilmiştir.

4.2. Kimyasallar ve Çözelti

HazırlıkTert-bütil hidroperoksit (tBOOH, CAS numarası: 75-91-2) ve antioksidan bileşikler, TCI Europe'dan alınmıştır. tBOOH, 0.3X Danieau tamponunda (17.4 mM NaCl; 0.23 mM KCl; 0.12 mM MgS04.7 H2O; 0.18 mM Ca) çözüldü. (NO3)2; 1.5 mM HEPES(N-(2-hidroksietil) piperazin-N0 -(2-etansülfonik asit); pH 7.4).

Naringenin (20 µM) (CAS numarası: 67604-48-2), oleuropein (15 µM) (CAS numarası:32619-42-4), rutin (10 µM) (CAS numarası : 207671-50-9), klorojenik asit (20 µM) (CAS numarası: 327-97-9), apigenin (10 µM) (CAS numarası: 520-36-5), kurkumin (15 µM) (CAS numarası: 458-37-7), likopen (20 µM) (CAS numarası: 502-65-8), astaksantin (20 µM) (CAS numarası: 472-61-7) ve -karoten (25 µM) (CAS numarası: 7235-40-7) Sigmar-Aldrich®'ten satın alınmıştır. Antioksidanlar yüzde 100 dimetil sülfoksit (DMSO, Sigma Aldrich, Madrid, İspanya) içinde çözüldü ve ardından yüzde 0.05 (h/h) nihai DMSO konsantrasyonuna kadar 0.3x Danieau tamponunda seyreltildi. Antioksidanlar, öldürücülük veya embriyonik gelişim üzerinde hiçbir etkinin gözlemlenmediği en yüksek konsantrasyona bağlı olarak farklı konsantrasyonlarda kullanılmıştır (maksimum tolere edilebilir konsantrasyon, MTC)

4.3. Zebra balığı Bakımı ve Yumurta Üretimi

Yetişkin vahşi tip zebra balığı, standart koşullarda barındırıldı. Embriyolar toplandı, temizlendi ve canlılıklarına göre seçildi. Döllenmiş embriyolar, Uluslararası Standardizasyon Örgütü (ISO) standartlarına 7346-1 ve 7346-2 (ISO, 1998; 2 mM CaCl2·2H2O, 0.5 mM MgSO4) göre standardize edilmiş suyla muamele edildi. ·7H2O, 0.75 mM NaHC03 ve 0.07 mM KCl). Döllenmiş yumurtalar, Kimmel ve diğerleri, 1995 [47] tarafından yapılan önceki çalışmalara göre sahnelendi ve bir diseksiyon stereomikroskopu (Motic SMZ168, Motic China Group, LTD., Luwan, Shanghai, China) altında sonraki maruziyet için seçildi. Balık embriyoları, 27 ± 1 ◦C kontrollü bir sıcaklıkta cam şişelerde tutuldu.

4.4. Zebra Balığı Embriyolarının Oksidatif Strese Maruz Kalması (Tert-Butyl Hydroperoxide)

tBOOH eğrisinin hazırlanması için Boix'in 2020 metodolojisi takip edildi. Bu metodoloji, ZF embriyolarını bir oksidatif stres indükleyicisi olan tertbutil hidroperoksite (tBOOH) maruz bırakarak bir konsantrasyon-ölümcül yanıt (LC50) eğrisi ve dismorfojenez (EC50) elde etmeye dayanır. Zebra balığı embriyoları elde edildikten sonra, 0 ila 24 hpf arasında 0.3X Danieau'nun ortamında tutulurlar. 24 ila 48 hpf arasında embriyolar, 1, 1.5, 2, 2.5, 3 ve 3.5 mM'lik farklı konsantrasyonlarda tBOOH çözeltilerine maruz bırakılır. Üç kopya halinde 3 farklı zebra balığı kavramasından embriyolar kullanıldı (Şekil 5A).

4.5. Antioksidan Bileşiklerin Koruyucu Etkilerinin Belirlenmesi

Bir bileşiğin oksidatif strese karşı koruyucu bir etkisi olup olmadığını belirlemek için, zebra balığı embriyoları önce 0 ila 24 hpf arasındaki antioksidan bileşiğe maruz bırakıldı. Konsantrasyonlar, maksimum tolere edilebilir konsantrasyon analizlerine bağlı olarak hesaplandı. Daha sonra, 24 ila 48 hpf arasında embriyolar, stres indükleyiciye, tBOOH'ye maruz bırakıldı. Daha sonra, her bir embriyo grubu, tBOOH konsantrasyonlarının her birinde değerlendirildi (Şekil 5B). Önemli bir fark olup olmadığını belirlemek için, tek başına tBOOH'ye maruz kalma eğrisi ve antioksidan bileşiğe önceden maruz kalma eğrisi karşılaştırıldı.

On döllenmiş yumurta, her madde ve konsantrasyon için 2.5 mL'ye maruz bırakıldı. Farklı yumurtlama olaylarından elde edilen yumurtalar kullanılarak üç bağımsız çoğaltma gerçekleştirilmiştir. ZF embriyoları, 24 saat boyunca antioksidan bileşiklere önceden maruz bırakıldı, ardından antioksidan solüsyon çıkarıldı, Danieau ortamı kullanılarak yıkama yapıldı ve ZF embriyoları farklı tBOOH konsantrasyonlarına maruz bırakıldı. Ölümcüllük 48 saat sonra değerlendirildi ve uygun tahlillerden sonra ölü embriyoların ortalaması hesaplandı. Dismorfogenez değerlendirmesi için Teixido ve ark. [48] ​​embriyoların dismorfogenezini yaklaşık 48 hpf'de hesaplamak için. Tablo 2'de açıklanan dokuz morfolojik özellik seçtik. Her konsantrasyon ve tedavi edilen grup için anormal embriyoların sıklığı hesaplandı (herhangi bir morfolojik özellikte 1 puana sahip embriyolar olarak tanımlandı).

Antioksidanlara önceden maruz kalma nedeniyle konsantrasyon-tepki eğrisinin sağa kayması, oksidatif stres indükleyicisine karşı koruyucu bir etki gösterir, çünkü tek başına tBOOH'ye maruz kalanlarla aynı sonuçları elde etmek için daha yüksek bir indükleyici konsantrasyonu gereklidir. Antioksidanlara önceden maruz kalma nedeniyle, konsantrasyon-tepki eğrisinin soluna bir kayma, oksidatif streste bir artış anlamına gelir.

4.6.İstatistiksel Analiz

Mortalite ve dismorfogenez için konsantrasyon-tepki eğrileri GraphPad 7.02 Software Inc kullanılarak hesaplandı ve değerlendirildi. Eğrinin her bir veri grubunun parametrelerinin uyumunu karşılaştırmak için ekstra kareler toplamı F testi kullanıldı. Güven aralığı yüzde 95'e ayarlandı.

5. Sonuçlar

Bu çalışmada, gıdalarda yaygın olarak bulunan altı fenolik bileşiğin ve üç karotenoidin koruyucu kapasitesini test etmek için model organizma olarak zebra balığı embriyoları kullanılmıştır. -karoten hariç tüm bileşikler, oksidatif stres kaynaklı öldürücülüğe karşı koruyucu etkiler gösterdi. Ayrıca apigenin, rutin ve kurkumin de tBOOH ile indüklenen dismorfojeneze karşı koruyucu etkiler sergilemiştir. Potansiyel antioksidan kapasiteye sahip yeni biyoaktif gıda bileşenlerinin in vivo koruyucu etkilerini değerlendirmek için burada sunulduğu gibi bir zebra balığı embriyo testinin uygulanabileceğini öneriyoruz.

Cristina Arteaga 1,20, Nuria Boix13,Elisabet Teixido 13⑤,Fernanda Marizande 2,Santiago Cadena4 ve Alberto Bustillos 5,*

1 Toksikoloji Ünitesi, Farmakoloji, Toksikoloji ve TerapötikKimya Bölümü, Eczacılık Fakültesi,

Barselona Üniversitesi, Avda Joan XXIIs/n,08028Barselona, ​​İspanya;

2 Sağlık Bilimleri, Beslenme ve Diyetetik Fakültesi, Ambato Teknik Üniversitesi, Ambato 180207, Ekvador;

3 INSA-UB Beslenme ve Gıda Güvenliği Araştırma Enstitüsü, Gıda ve Beslenme Torribera Kampüsü,

Barselona Üniversitesi, Prat de la Riba 171, 08921 Santa Coloma de Gramenet, İspanya

4 Uygulamalı Bilimler Fakültesi, Uluslararası SEK Üniversitesi, Quito 170134, Ekvador;

5Sağlık Bilimleri Fakültesi, Tıp, Ambato Teknik Üniversitesi, Ambato 180207

Referanslar

1. Tan, BL; Norhaizan, ME; Liew, W.-P.-P. Besinler ve Oksidatif Stres: Dost mu Düşman mı? Oksit. Med. Hücre. Longev. 2018, 2018, 9719584. [CrossRef] [PubMed]
2. Sies, H. Oksidatif Stresin Biyokimyası. Ange. Kimya Int. Ed. İngilizce 1986, 25, 1058-1071. [Çapraz Referans]
3. Dröge, W. Hücre Fonksiyonunun Fizyolojik Kontrolünde Serbest Radikaller. Fizol. Rev. 2002, 82, 47-95. [CrossRef] [PubMed]
4. Rendra, E.; Riabov, V.; Mossel, DM; Sevastyanova, T.; Harmsen, MC; Kzhyshkowska, J. Makrofaj aktivasyonunda reaktif oksijen türleri (ROS) ve diyabette işlev. İmmünobiyoloji 2019, 224, 242–253. [Çapraz Referans]
5. Lin, MT; Beal, MF Mitokondriyal disfonksiyon ve nörodejeneratif hastalıklarda oksidatif stres. Doğa 2006, 443, 787-795. [CrossRef] [PubMed]
6. Therond, P. Oksidatif stres ve biyomoleküllere (lipidler, proteinler, DNA) verilen zararlar. Anne. Eczacılık Fr. 2006, 64, 383-389. [Çapraz Referans]
7. Ermak, G.; Davies, KJA Kalsiyum ve oksidatif stres: Hücre sinyalleşmesinden hücre ölümüne. Mol. immünol. 2002, 38, 713-721. [Çapraz Referans]
8. Wadhwa, R.; Gupta, R.; Maurya, PK Oksidatif Stres ve Nörodejeneratif ve Nöropsikiyatrik Bozuklukta Hızlandırılmış Yaşlanma. Kör. Eczacılık Des. 2018, 24, 4711-4725. [Çapraz Referans]
9. Denizcilik, AC; Sanders, RA; Watkins, JB Diyabet, oksidatif stres ve antioksidanlar: Bir inceleme. J. Biochem. Mol. Toksikol. 2003, 17, 24-38. [Çapraz Referans]
10. Sinha, N.; Hipertansiyonda Dabla, PK Oksidatif stres ve antioksidanlar-güncel bir inceleme. Kör. Hipertens. Rev. 2015, 11, 132-142. [Çapraz Referans]
11. Klaunig, JE Oksidatif Stres ve Kanser. Kör. Eczacılık Des. 2018, 24, 4771-4778. [CrossRef] [PubMed]
12. Sies, H. Oksidatif stres: Redoks biyolojisi ve tıpta bir kavram. Redoks Biol. 2015, 4, 180-183. [Çapraz Referans]
13. Pietta, P.-G. Antioksidan Olarak Flavonoidler. J. Nat. Ürün 2000, 63, 1035-1042. [Çapraz Referans]
14. Halliwell, B.; Gutteridge, Biyoloji ve Tıpta JMC Serbest Radikaller, 5. baskı; Oxford University Press: Oxford, Birleşik Krallık, 2015; ISBN 9780198717478.
15. Hollman, PC; Katan, MB Diyet flavonoidleri: alım, sağlık etkileri ve biyoyararlanım. Gıda Kimyası Toksikol. Int. J. Yayın. Br. Ind. Biol. Araş. Doç. 1999, 37, 937-942. [Çapraz Referans]
16. Hertog, MG; Holman, PC; Katan, MB; Kromhout, D. Hollanda'da yetişkinlerde potansiyel olarak antikanserojenik flavonoidlerin ve belirleyicilerinin alımı. Nutr. Kanser 1993, 20, 21-29. [Çapraz Referans]
17. Martínez, S.; Gonzalez, J.; Culebras, J.; Tuñón, M. Flavonoides: Propiedades ve acciones antioksidanları. Nutr. hastane 2002, 17, 271-278.
18. Arteaga, C.; Bustilos, A.; Gómez, J. Migración de neutrófifilos en larvas de pez cebra expuestos bir özüt de sofrito de tomate. Kemer Latinoam. Nutr. 2021, 70, 216–224. [Çapraz Referans]
19. Genç, AJ; Lowe, GL Karotenoidler—Antioksidan özellikler. Antioksidanlar 2018, 7, 28. [CrossRef] [PubMed]
20. Xavier, AAO; Pérez-Gálvez, A. Diyette Antioksidan Kaynağı Olarak Karotenoidler. Alt hücre. Biyokimya. 2016, 79, 359-375. [CrossRef] [PubMed]
21. Stahl, W.; Sies, H. Karotenoidlerin antioksidan aktivitesi. Mol. Asp. Med. 2003, 24, 345-351. [Çapraz Referans]
22. Boix, N.; Teixido, E.; Pique, E.; Llobet, JM; Gomez-Catalan, J. Zebra Balığında Oksidan Kaynaklı Gelişimsel Toksisiteye Karşı Antioksidan Bileşiklerin Modülasyonu ve Koruma Etkileri. Antioksidanlar 2020, 9, 721. [CrossRef]
23. Fenton, HJH Demir varlığında tartarik asidin oksidasyonu. J. Chem. Soc. Trans. 1894, 65, 899-910. [Çapraz Referans]
24. Phaniendra, A.; Jestadi, DB; Periyasamy, L. Serbest Radikaller: Özellikleri, Kaynakları, Hedefleri ve Çeşitli Hastalıklardaki Etkileri. Hint J. Clin. Biyokimya. 2015, 30, 11–26. [CrossRef] [PubMed]
25. Fernández-Pachón, MS; Villano, D.; Troncoso, AM; García-Parrilla, MC Antioksidanları in vitro olarak değerlendirmenin en iyi sonucu. Kemer Latinoam. Nutr. 2006, 56, 110-122. [PubMed] 26. Cavia-Saiz, M.; Busto, MD; Pilar-Izquierdo, MC; Ortega, N.; Perez-Mateos, M.; Muniz, P. Flavonoid naringenin ve glikozit naringinin antioksidan özellikleri, radikal temizleme aktivitesi ve biyomolekül koruma kapasitesi: Karşılaştırmalı bir çalışma. J. Bilim. Gıda Tarımı. 2010, 90, 1238–1244. [CrossRef] [PubMed]
27. Patel, K.; Singh, GK; Patel, DK Naringenin farmakolojik ve analitik yönleri üzerine bir inceleme. Çene. J. Integr. Med. 2014, 24, 551-560. [Çapraz Referans]
28. Rashmi, R.; Magesh, SB; Ramkumar, KM; Suryanarayanan, S.; Subbarao, MV Naringenin Antioksidan potansiyeli, karaciğer dokusunu streptozotosin kaynaklı hasardan korumaya yardımcı olur. Temsilci Biochem. Mol. Biol. 2017, 7, 76-84.
29. Shukla, R.; Pandey, V.; Vadnere, GP; Lodhi, S. Bölüm 18—Enflamatuar Bozuklukların Yönetiminde Flavonoidlerin Rolü. Artrit ve İlgili İnflamatuar Hastalıklar İçin Diyet Müdahaleleri Olarak Biyoaktif Gıdalarda; Watson, RR, Preedy, VR, Eds.; Akademik Basın: Londra, Birleşik Krallık, 2019; s. 293-322; ISBN 978-0-12-813820-5.
30. Chen, YH; Yang, ZS; Wen, CC; Chang, YS; Wang, M.Ö.; Hsiao, CA; Shih, TL Zebra balığı larvalarının antioksidanları ve toksik maddeleri olarak flavonoidlerin yapı-aktivite ilişkisinin değerlendirilmesi. Gıda Kimyası 2012, 134, 717–724. [Çapraz Referans]
31. Cushman, M.; Zhu, H.; Geahlen, RL; Kraker, AJ Sentezi ve Protein-Tirozin Kinazların Potansiyel İnhibitörleri Olarak Bir Seri Aminoflavonun Biyokimyasal Değerlendirilmesi p56lck, EGFr ve p60v-src. J. Med. Kimya 1994, 37, 3353-3362. [Çapraz Referans]
32. Cioffi, G.; Peska, MS; De Caprariis, P.; Braça, A.; Severino, L.; De Tommasi, N. Cilento'dan (Campania, İtalya) zeytinyağı ve zeytinyağındaki fenolik bileşikler ve antioksidan aktiviteleri. Gıda Kimyası 2010, 121, 105-111. [Çapraz Referans]

33. Bulotta, S.; Corradino, R.; Celano, M.; D'Agostino, M.; Maiuolo, J.; Oliverio, M.; Prokopio, A.; Iannone, M.; Rotiroti, D.; Russo, D. Oleuropein ve yarı sentetik hiperasetillenmiş türevlerinin meme kanseri hücreleri üzerindeki antiproliferatif ve antioksidan etkileri. Gıda Kimyası 2011, 127, 1609-1614. [Çapraz Referans]
34. Han, J.; Talorete, TPN; Yamada, P.; Isoda, H. Oleuropein ve hidroksitirosolün insan meme kanseri MCF-7 hücreleri üzerindeki anti-proliferatif ve apoptotik etkileri. Sitoteknoloji 2009, 59, 45-53. [CrossRef] [PubMed]
35. Liang, N.; Kitts, DD Oksidatif ve inflamatuar stres koşullarının kontrolünde klorojenik asitlerin rolü. Besinler 2015, 8, 16. [CrossRef] [PubMed]
36. Park, S.-Y.; Freedman, ND; Haiman, CA; Le Marchand, L.; Wilkens, LR; Setiawan, Beyaz Olmayan Popülasyonlar Arasında Toplam ve Nedene Özgü Ölümlü Kahve Tüketimi VW Derneği. Anne. Stajyer. Med. 2017, 167, 228–235. [CrossRef] [PubMed]
37. Tacik, N.; Tacik, M.; Mack, İ.; Enck, P. Kahvedeki ana fenolik bileşenler olan klorojenik asidin sağlık üzerindeki potansiyel etkileri: Literatürün kapsamlı bir incelemesi. Avro. J. Nutr. 2017, 56, 2215–2244. [CrossRef] [PubMed]
38. Poole, R.; Kennedy, AJ; Roderick, P.; Fallowfifield, JA; Hayes, PC; Parkes, J. Kahve tüketimi ve sağlık: çoklu sağlık sonuçlarının meta-analizlerinin şemsiye incelemesi. BMJ 2017, 359, j5024. [CrossRef] [PubMed]
39. Tanvir, EM; Hossen, MS; Hossain, MF; Afruz, R.; Gan, SH; Halil, MI; Karim, N. Bangladeş'ten Popüler Zerdeçal (Curcuma longa) Çeşitlerinin Antioksidan Özellikleri. J. Gıda Kal. 2017, 2017, 8471785. [CrossRef]
40. Fiedor, J.; Burda, K. Karotenoidlerin insan sağlığı ve hastalıklarında antioksidan olarak potansiyel rolü. Besinler 2014, 6, 466–488. [Çapraz Referans]
41. Eggersdorfer, M.; Wyss, A. İnsan beslenmesi ve sağlığında karotenoidler. Kemer Biyokimya. Biyofiz. 2018, 652, 18–26. [Çapraz Referans]
42. Padmanabhan, P.; Cheema, A.; Paliyath, G. Domates, Patlıcan ve Biber İçeren Solanaceous Fruits, 1. baskı; Elsevier Ltd: Londra, Birleşik Krallık, 2015.
43. Kataja-Tuomola, MK; Kontto, JP; Mannistö, S.; Albanes, D.; Virtamo, JR Alfa-tokoferol ve beta-karoten takviyesinin makrovasküler komplikasyonlar ve diyabetten kaynaklanan toplam ölüm oranı üzerindeki etkisi: ATBC Çalışmasının Sonuçları. Anne. Med. 2010, 42, 178–186. [Çapraz Referans]
44. Ambati, RR; Moi, PS; Ravi, S.; Aswathanarayana, RG Astaksantin: Kaynaklar, ekstraksiyon, stabilite, biyolojik aktiviteler ve ticari uygulamaları - Bir inceleme. Mart Uyuşturucu 2014, 12, 128-152. [CrossRef] [PubMed]
45. Dennery, PA Oksidatif stresin embriyonik gelişim üzerindeki etkileri. Doğum Kusurları Araş. C Embriyo Bugün 2007, 81, 155-162. [CrossRef] [PubMed]
46. ​​Selderslaghs, IWT; Blust, R.; Witters, HE 27 bileşikten oluşan bir eğitim seti kullanarak gelişimsel toksisite ve embriyotoksisiteyi taramak için alternatif bir yöntem olarak zebra balığı testinin fizibilite çalışması. tekrar. Toksikol. 2012, 33, 142-154. [Çapraz Referans]
47. Kimmel, CB; Ballard, WW; Kimmel, SR; Ullmann, B.; Schilling, TF Zebra balıklarının embriyonik gelişim aşamaları. geliştirici Din. 1995, 203, 253–310. [CrossRef] [PubMed]
48. Teixido, E.; Pique, E.; Gomez-Catalán, J.; Llobet, JM Zebra balığı embriyo teratojenite testinde gelişimsel gecikmenin değerlendirilmesi. Toksikol. In Vitro 2013, 27, 469-478. [CrossRef] [PubMed]