Sistanche tubulosa'dan ekstrakte edilen ürik asit düşürme etkisi ve aktinakosid mekanizması
Mar 03, 2025
Soyut:Acteosid (AS) ve ekinakozit (ECH) 'nin ekstrakte edilen ürik asit düşürücü etkilerini ve mekanizmalarını keşfetmeyi hedefleyin.Cistanche tubulosa.
YöntemHiperürisemi (HUA) sıçan modeli, adenin (100 mg · kg {-1 · d -1) ile birlikte potasyum oksonat (1.5 g · kg -1 · d -1) kullanılarak kuruldu. Hua model sıçanları rastgele bir model kontrol grubuna, bir allopurinol grubuna (30 mg · kg -1 {{9} {{{{{{{{-1} · d {{{-1} · d {{{{-1} · d -1)) doz grupları ve 100'ü doz grupları ve 100 {13}) mg · kg -1 · d -1) doz grupları. Daha önce normal bir kontrol grubu kurulmuştu. Dört haftalık uygulamadan sonra, idrarda Sua üre, crea, adenosin deaminaz (ADA) ve ürik asit (UUA) seviyelerini tespit etmek için kan biyokimyası analizörü kullanıldı. Serumdaki ksantin oksidaz (XOD) seviyelerini saptamak için enzime bağlı immünosorban deneyi kullanıldı. Böbrek dokusu toplandı ve böbrek katsayısı tartıldı ve hesaplandı. Renal patolojik değişiklikleri gözlemlemek için hematoksilin eozin (HE) boyaması kullanıldı. Immunohistokimya (IHC) ve gerçek zamanlı PCR, ürat taşıyıcı 1 (URAT1), glikoz taşıyıcı 9 (GLUT9), organik anyon taşıyıcı 1 (OAT1) ve organik anyon taşıyıcı 3 (OAT3) 'nin böbrek tusis içinde protein ve mRNA ekspresyon seviyelerini tespit etmek için kullanıldı. AND ve ECH, HUA model sıçanlarında böbrek fonksiyonunu iyileştirebilir, kan ürik asit seviyelerini azaltabilir, ürik asit atılımını teşvik edebilir, ADA ve XOD serum seviyelerini aşağı regüle edebilir ve böbrek dokusunda URAT1 ve GLUT9'un protein ve mRNA ekspresyonunu renal dokuda protein ve mRNA ekspresyonunu regülasyonlaştırabilir.
Sonuçlar Cistanche tubulosa'dan gelen feniletanoid glikozitler ve ECH, HUA model sıçanlarında böbrek fonksiyonunu iyileştirerek, ADA ve XOD seviyelerini azaltarak ve URAT1, GLUT9, OAT1 ve OAT3 ekspresyonunu düzenleyerek ürik asit düşürücü etkiler uygulayabilir.
Anahtar Kelimeler: Cistanche tubulosa; aktosit; ekinakozit; hiperürisemi; ürik asit azaltma; mekanizma
% 16 akteosid ile Cistanche tubulosa özütü
Hiperürisemi (HUA), insan vücudunda düzensiz pürin metabolizmasının neden olduğu metabolik bir hastalıktır, bu da yüksek kan ürik asit seviyelerine yol açar [1]. Tipik olarak kan ürik asit seviyeleri 7'yi aştığında teşhis edilir. Hiperüriseminin gelişimi öncelikle yüksek purine diyetler, kronik alkol tüketimi, ilaç kullanımı ve hipotiroidizm gibi faktörlerle ilişkilidir. Sadece kardiyovasküler hastalık, diyabet ve hipertansiyon riskini arttırmakla kalmaz [3-4], aynı zamanda hastaların sağlığını da önemli ölçüde etkiler.
Şu anda, hiperürisemi için klinik tedaviler esas olarak ürik asit üretimini inhibe eden ve ürik asit atılımını teşvik eden ilaçları içerir. Bununla birlikte, bu tedavilerin karaciğer veya böbrek fonksiyonu bozulmuş hastalar için belirli sınırlamaları vardır [5-6]. Bu nedenle, düşük yan etkileri olan etkili ilaçların keşfedilmesi, hiperüriseminin önlenmesi ve tedavisi için büyük önem taşımaktadır.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, geleneksel Çin tıbbında böbrek tonlayıcı bir bitki olarak yaygın olarak kullanılan, iktidarsızlık, infertilite, öz ve kan eksikliği, alt sırt ve dizlerde zayıflık, kas zayıflığı ve bağırsak kuruluşundan kaynaklanan kabızlık gibi durumları tedavi etmek için kullanılır [7]. Çalışmalar bunu göstermiştirCistanche tubulosaKanser hastaları için kemoterapide nöroprotektif [8], anti-enflamatuar [9], kemik metabolizması regülasyonuna [10] ve etkinliği artırıcı etkilere sahiptir [11]. Çeşitli aktif bileşenleri arasında, feniletanoid glikozitler en boldur.
Acteosid (AS) ve ekinakozit (ECH), yüksek içeriğe sahip iki feniletanoid glikozitCistanche tubulosa, güçlü biyolojik aktivite sergileyin ve geliştirme ve uygulama için önemli bir potansiyele sahiptir. Sonuç olarak, araştırma grubumuz daha ileri çalışma için AS ve ECH'yi seçmiştir. Farelerde ağ farmakolojisi tahminleri ve ön deneyler aracılığıyla, feniletanoid glikozit ekstraktlarınınCistanche tubulosabelirli bir ürik asit düşürücü etkiye sahip olabilir. Bununla birlikte, bu etkilerin yolları ve mekanizmaları belirsizliğini korumaktadır.
Bu nedenle, ürik asit üretimi mekanizmalarını ve birincil atılım yollarını araştırma odağı olarak kullanarak, feniletanoid glikozit ekstraktlarının ve ECH'nin ürik asit düşürücü etkilerini araştırdık. Bu çalışma, AS ve ECH'nin ürik asit düşürücü etkilerini uyguladığı yolları ve mekanizmaları açıklamayı amaçlamaktadır.
1 Malzeme
1.1 Deneysel Hayvanlar
150-180 g ağırlığındaki yetmiş erkek SPF sınıfı Sprague-Dawley (SD) sıçanları, Sincan Tıp Üniversitesi'nin deneysel hayvan merkezinden satın alındı. Hayvan Üretim Lisansı Numarası: SCXK (XIN) 2023-0001. Bu deney, Sincan Otonom Bölgesi Uygur Tıp Araştırma Enstitüsü Hayvan Etik Komitesi tarafından hayvan etiği onay numarası ile onaylanmıştır: IACUC- (ZHUN) -2024-009.
1.2 Uyuşturucu ve Reaktifler
Feniletanoid glikozit özleri (AS ve ECH)itibarenCistanche tubulosa (purity >%98'i, yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile doğrulanmıştır) ekstrakte edildi, saflaştırıldı ve Uygur Formülasyon Biliminin Temel Laboratuvarı, Xinjiang Otonom Bölgesi Uygur Tıp Araştırma Enstitüsü tarafından hazırlandı. Parti numaraları: 20220617 (AS) ve 20220526 (ECH).
Allopurinol tabletler, Parti Numarası: 62208726, Jiangsu Wanbang Biyokimya Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Potasyum oksonatVeadenin, Parti Numaraları: I2130050 ve C2202255, Şangay Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.'den satın alındı.
Crea (kreatinin), UA (ürik asit), üre ve Ada (adenosin deaminaz) test kitleri, Parti Numaraları: 141123010, 141223004, 141323008 ve 043624005, Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
Xod (ksantin oksidaz) aktivite deneyi kiti, Parti Numarası: Y10001219, Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.'den satın alındı.
Antikorlar (Urat1, GLUT9, OAT1, OAT3), Toplu Numaralar: 3I5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, Affinity Biosciences'dan satın alındı.
HRP etiketli keçi anti-tavşan IgG, toplu numara: 245440113, zsgb-bio'dan satın alındı.
Hematoksilin boyama çözeltisi, Parti numarası: 24135741h, Pekin Lanjieke Technology Co., Ltd.'den satın alındı.
DAB kromojenik reaktif kiti, Parti numarası: 240010512, ZSGB-Bio'dan satın alındı.
DEPC (dietil pirokarbonat), Katalog Numarası: D 60029-500 ml, Amresco'dan (ABD) satın alındı.
M5 hiclear DL2000 DNA markeri, Katalog Numarası: MF025, Pekin Genomics Biotechnology Co., Ltd.'den satın alındı.
Trizol ™ reaktifi, Katalog Numarası: 15596026, Thermo Fisher Scientific (ABD) 'den satın alındı.
5x All-In-One Rt MastermixVeEvagreen Express 2 × QPCR MasterMix-LOW Rox, Katalog Numaraları: G492 ve G891, her ikisi de Applied Biological Materials Inc.'den (ABM) satın alındı.
2 Yöntem
2.1 Model Kuruluşu ve Gruplama
Yetmiş erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanları alışıldı ve iki gruba ayrıldı: normal bir kontrol grubu (1 0 sıçan) ve bir model kontrol grubu (60 sıçan). Normal kontrol grubuna gavaj yoluyla% 0.5 CMC-NA uygulandı. Model kontrol grubuna, adenin (100 mg · kg⁻) ile birleştirilmiş potasyum oksonat (1.5 g · kg⁻), arka arkaya 14 gün boyunca günde bir kez 10 mL · kg⁻⁻ dozunda uygulandı. Model, bir biyokimyasal analizör tarafından ölçüldüğü gibi, üre, Crea ve SUA seviyeleri önemli ölçüde arttığında başarılı bir şekilde oluşturuldu.
Hiperürisemi model sıçanları ayrıca SuA, üre ve Crea seviyelerine dayanan aşağıdaki gruplara ayrıldı: model kontrol grubu, allopurinol grubu (3 0 mg · kg⁻), düşük doz (50 mg · kg⁻), grup (100 mg · kg⁻) olarak yüksek doz, yüksek doz (100 mg · kg⁻), düşük doz ech · kg⁻), düşük doz ech · kg⁻), düşük doz ech · kg⁻), düşük doz ech · kg⁻), düşük doz-doz), düşük doz (50-doz), düşük doz (50-doz), düşük doz (50 doz), düşük doz (50 doz), düşük doz (50 doz), düşük doz (50 doz), düşük doz (50 doz), yüksek doz, ve düşük doz (50 doz) ECH grubu (100 mg · kg⁻), her grupta 10 sıçan. Kararlı hiperürisemiyi korumak için, normal kontrol grubu dışındaki tüm gruplara, sabahları gavaj yoluyla adenin (100 mg · kg⁻) ile birleştirilmiş potasyum oksonat (500 mg · kg⁻) uygulandı, ardından öğleden sonra her tedavi grubunda ilgili ilaçların uygulanması. Normal kontrol grubu sabahları% 0.5 CMC-NA çözeltisi ve öğleden sonra, arka arkaya 14 gün boyunca günde bir kez 10 mL · kg⁻ dozunda içme suyu aldı. Daha sonra, modelleme ajanlarının uygulanması durduruldu ve ilgili ilaçlar 14 gün daha sürekli olarak uygulandı.
2.2 Örnek Toplama
Son dozdan sonra, sıçanlar gece boyunca açıldı (su kısıtlanmadı). Ürik asit testi için her gruptan idrar toplandı. Oruçtan sonra vücut ağırlığı ölçüldü ve anestezi altında kan örnekleri toplandı. Serum santrifüj ile ayrıldı ve ileride kullanım için saklandı. Böbrek dokuları toplandı ve tartıldı. Bir böbrek% 4 paraformaldehit çözeltisine sabitlenirken, diğeri daha fazla analiz için sıvı azot içinde snap-frozen edildi.
2.3 Sıçan idrarında ürik asit ölçümü
Her gruptaki idrar örnekleri santrifüjlendi (3, 000 r · min⁻, 10 dakika, santrifüj yarıçapı 14 cm) ve süpernatan toplandı. İdrar örnekleri, salin ile 1: 9 seyreltildi ve biyokimyasal bir analizör kullanılarak ürik asit içeriği için analiz edildi.
2.4 Sıçan serumunda ADA, Üre, Crea ve Sua ölçümü
Her gruptan gelen kan örnekleri santrifüjlendi (3, 000 r · min⁻, 10 dakika, santrifüj yarıçapı 14 cm) ve serum toplandı. Serumdaki Ada, Üre, Crea ve Sua seviyeleri biyokimyasal bir analizör kullanılarak ölçüldü.
2.5 Sıçan serumunda XOD ölçümü
Sıçan serumundaki XOD seviyelerindeki değişiklikler, üreticinin talimatlarına göre enzimatik bir test kullanılarak ölçüldü. 290 nm'de ilk absorbans (A₁) ve nihai absorbans (A₂) kaydedildi ve ΔA (ΔA=a₂ - a₁) hesaplandı. ΔA, formüle değiştirildi:
XOD (nmol⁻ · Min⁻ · ml⁻⁻) =} [ΔA × Reaksiyon Sistemi Toplam hacim ÷ (ürik asit × optik yol uzunluğunun molar yok olma katsayısı) × 10⁹] ÷ örnek hacim ÷ zaman=4262 × ΔA.,
Mililitre serum başına dakikada katalize edilen ürik asit miktarını hesaplamak için.
2.6 Böbrek katsayısı ölçümü
Böbrek dokuları toplandı, salin ile yıkandı ve fazla su çıkarıldı. Organ ağırlığı doğru bir şekilde ölçüldü ve böbrek katsayısı aşağıdaki gibi hesaplandı:
Böbrek katsayısı=böbrek ağırlığı (mg) / vücut ağırlığı (g).
2.7 Böbrek dokusunun He He Boyama ile Histopatolojik Gözlemi
% 4 paraformaldehid çözeltisine sabitlenmiş böbrek dokuları, dereceli etanol konsantrasyonları ile dehidre edildi, ksilen ile temizlendi, parafine gömüldü ve 4- μm dilimler içine kesildi. Kesitler, ksilen ile, dereceli etanol ile nemlendirilmiş, hematoksilin ve eozin (HE) ile boyanmış ve nötr sakız ile kapatılmıştır. Böbrek dokusundaki morfolojik değişiklikler hafif bir mikroskop altında gözlendi ve görüntüler 400 × büyütmede yakalandı.
2.8 Böbrek dokusunda URAT1, GLUT9, OAT1 ve OAT3 protein ekspresyonunun IHC ile saptanması
% 4 paraformaldehid çözeltisine sabitlenmiş böbrek dokuları, kademeli etanol konsantrasyonları ile dehidre edildi, ksilen ile temizlendi, parafine gömüldü ve kesildi. Antijen alımı ve keçi serumu engelleme yapıldı. Birincil antikorlar (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) 1: 200 seyreltmede ilave edildi ve gece boyunca 4 derece inkübe edildi. Ertesi gün, bölümler PBS ile yıkandı, havada kurutuldu ve 30 dakika boyunca 37 derecede biyotin etiketli keçi anti-tavşan IgG ile inkübe edildi. Kesitler PBS ile yıkandı ve 10 dakika boyunca DAB kromojenik reaktif ile inkübe edildi, ardından PBS durulama, 3 dakika boyunca hematoksilin boyaması, hidroklorik asit etanol çözeltisi, lityum karbonat mavisi ile farklılaşma, gradyan etanol ile dehidrasyon, xylen ile temizleme ve nötr sakız ile sızdırmazlığı izledi.
Her sıçan için, böbrek kesitlerinin iki rastgele 4 0 0 × alanı seçildi. Pozitif boyama (kahverengi sarı) analiz edildi ve her alanın entegre optik yoğunluğu (IOD) istatistiksel analiz için Image-Pro Plus 6.0 kullanılarak ölçüldü.
